Тест на ВИЧ

Анализ на ВИЧ или тест на ВИЧ включает в себя несколько методов лабораторной диагностики, позволяющих выяснить присутствие вируса иммунодефицита (ВИЧ), обнаружить антитела к его белкам (иммуноглобулины) или антигены (белки вируса) в крови больного, слюне или моче.

Вирусологическая диагностика основана на выявлении ВИЧ в тканях и биологических жидкостях больного.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) применяется с целью выявления вируса и оценки вирусной нагрузки, что позволяет судить об эффективности специфического лечения и прогнозировать течение инфекционного заболевания.

Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции предполагает выявление антигенов вируса и антител в сыворотке крови. Обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека с помощью ИФА (иммуноферментного анализа) является основным методом лабораторной диагностики. Все положительные результаты подтверждаются методом иммуноблоттинга.

Экспресс тест на ВИЧ основан на выявлении антител в крови и биологических жидкостях исследуемого. Используются в случаях, когда необходимо быстро получить результат.

Уровень иммуносупрессии определяется методикой подсчета СD4 и СD8-лимфоцитов, с последующим определением соотношения CD4 : CD8.

Каждый из лабораторных методов диагностики ВИЧ-инфекции характеризуется определенной чувствительностью (% верно определенных среди заведомо (+) образцов ) и специфичностью (% правильно определенных тестов среди заведомо отрицательных образцов). Результаты теста на ВИЧ интерпретируются как отрицательные, положительные или сомнительные.

Вирусу иммунодефицита человека присуща уникальная антигенная изменчивость, что связано с большой скоростью транскрипции (размножения), в связи с чем затрудняется как диагностика ВИЧ-инфекции, так и ее профилактика.

В основе диагностики ВИЧ-инфекции, как и любого другого инфекционного заболевания лежит:

  • эпидемиологический анамнез,
  • характерные жалобы больного,
  • клиническая картина заболевания,
  • данные лабораторных методов исследования.

Как только диагноз ВИЧ-инфекции установлен, с целью уточнения характера течения основного заболевания и вторичных заболеваний проводится дальнейшее обследование больного и назначается соответствующее лечение.

Тяжесть заболевания оценивается по уровню концентрации вирусов в крови, количеству CD4-лимфоцитов и определению антигена р24.

иммунная клетка

Рис. 1. На фото слева ВИЧ заражают иммунную клетку (обозначено желтым). На фото справа лимфоцит, поражённый ВИЧ. Вытянутые структуры на поверхности клетки вызваны гиперпродукцией белка.

вирионы вич

Рис. 2. На фото зафиксирован процесс выхода (отпочкования) вирионов из инфицированной клетки.

Анализ на ВИЧ. Что надо знать

Анализ на ВИЧ может сделать любой житель нашей страны по своему желанию анонимно и бесплатно. Но есть категории лиц, которые обследуется на ВИЧ в обязательном порядке. К ним относятся:

  • все доноры крови и ее компонентов, а также тканей и других биологических жидкостей;
  • лица, которым была проведена трансфузия или осуществлена трансплантация (проводится в течение первых 3-х месяцев после проведения процедуры);
  • беременные;
  • лица, пострадавшие в результате аварии;
  • лица, имеющие клинические показания — лихорадку, диарею, постоянный кашель и увеличение более 2-х групп лимфатических узлов, длящиеся более 1-го месяца, необъяснимую потерю веса, СПИД-ассоциированные и оппортунистические инфекционные заболевания, соматическая и онкопатология;
  • иностранные граждане;
  • лица из группы риска (наркоманы и страдающие венерическими заболеваниями).

Тест на ВИЧ необходимо проводить всем, кто был подвергнут риску заражения.

где сдать анализ на вич

Рис. 3. Кровь на ВИЧ в нашей стране можно сдать анонимно и бесплатно.

Где сдать анализ (кровь) на ВИЧ

Анализ на ВИЧ можно сдать бесплатно в учреждениях здравоохранения, работающих на бюджетной основе при наличии паспорта и медицинской страховки. Врачи при этом обязаны хранить врачебную тайну. Бесплатно и анонимно можно сдать анализ в Центрах профилактики и борьбы со СПИДом и там же получить врачебную консультацию до и после обследования. На платной основе проводится тестирование на ВИЧ в коммерческих лечебных учреждениях. Тест на ВИЧ может пройти любой человек, временно проживающий на данной территории.

В лаборатории будет сделан анализ крови на ВИЧ иммуноферментным методом (ИФА).

Анализ на ВИЧ анонимно

В государственных учреждениях здравоохранения (поликлиниках и больницах) анонимно сдать анализ крови на ВИЧ нельзя. Сведения о результатах исследования будут известны узкому кругу медиков, которые обязаны хранить врачебную тайну.

Кабинеты анонимного тестирования существуют на базах Центров СПИДа, где каждому исследованию присваивается номер.

сдать кровь на вич

Рис. 4. Пробирки с кровью отправляются на серологическое исследование.

Анализ на ВИЧ принудительно

Существует четыре группы населения, тестирование на ВИЧ которых является обязательным, но не насильственным:

  1. Доноры крови и другого биологического материала.
  2. При устройстве на работу в учреждения, где работник может иметь контакт с заведомо инфицированным материалом и больными.
  3. Иностранные граждане при получении виз для проживания (более 3-х месяцев) на территории РФ.
  4. При наличии клинических показаний лицам, находящихся в местах лишения свободы.

Принудительное тестирование населения на ВИЧ является бесперспективным и противоречит соблюдению прав человека. Принудительное тестирование населения в РФ является незаконным.

диагностика вич

Рис. 5. Тестирование на ВИЧ осужденных проводится по клиническим показаниям.

Сколько стоит анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях обследование на ВИЧ бесплатное, в частных клиниках — платное:

  • Стоимость ИФА составляет от 400 до 800 руб. Ответ будет готов по истечении одних суток. Существует срочная диагностика, когда ответ можно получить в течение 2-х часов.
  • Стоимость анализа на ВИЧ методом иммуноблота составляет от 3 до 5 тыс. рублей. Результат будет готов через 4 — 7 дней.
  • Стоимость теста на ВИЧ методом ПЦР составляет 10 — 12 тыс. руб. Результат будет готов через 10 — 14 дней.

Сколько делается анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях срок получения результатов анализа на ВИЧ составляет:

  • При применении ИФА 3-го поколения результаты дают самый достоверный результат через 12 недель от момента предполагаемого инфицирования.
  • При применении ИФА 4-го поколения — 6 недель.
  • При применении ПЦР — 4 недели.

Как сдавать анализ на ВИЧ

  • Сдавать анализ на ВИЧ необходимо не ранее, чем через 3 — 4 недели от предполагаемого заражения.
  • Тестирование проводится не ранее, чем через 8 часов после приема пищи.

Из жидкости можно употреблять только обычную воду.

  • Для анализа осуществляется забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены, для чего используется обычный шприц или игла с помпой.
  • До транспортировки в лабораторию сыворотка крови может храниться в холодильнике до 7-и дней. Без холодильника не более 30 минут после забора.
  • Транспортировка пробирок с сывороткой крови осуществляется в специальных термоконтейнерах при температуре +4 — +8оС.
общий анализ крови при вич

Рис. 6. Для анализа осуществляется забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены, для чего используется обычный шприц или игла с помпой.

При заборе крови из вены вирусом иммунодефицита человека заразиться невозможно.

к содержанию ↑

Ложноположительный анализ на ВИЧ и другие виды результатов исследования

Результаты анализа на ВИЧ могут трактоваться как положительные, отрицательные и сомнительные.

Сомнительный результат теста на ВИЧ получается при присутствии в сыворотке крови антител, которые перекрестно реагируют с белками вируса иммунодефицита человека. Анализ в данном случае сдается повторно, а при его проведении будут применяться белее специфичные тест-системы. Если сомнительный результат сохраняется, то тестирование необходимо проводить каждые 1 — 3 месяца в течение полугода.

Положительный результат теста на ВИЧ (серопозитивный) говорит о наличии в крови исследуемого антител к вирусу. В данном случае иммуноферментный анализ (ИФА) повторяется и при получении повторного положительного результата подтверждается тестом иммуноблотинга с тем же образцом крови.

Отрицательный результат теста на ВИЧ (серонегативный) говорит об отсутствии ВИЧ-инфекции, либо инфицирование произошло совсем недавно и в крови обследуемого еще не выработались антитела (период «окна»). В таком случае обследование следует повторить через 3 и 6 месяцев.

Ложноположительный результат теста на ВИЧ регистрируется тогда, когда причиной явился не вирус иммунодефицита человека, а беременность, аутоиммунное заболевание, аллергия, любое другое инфекционное заболевание, недавно сделанная прививка, онкопатология, трансплантация органа и даже обычная еда (семечки, острая, жирная и кислая пища, употребленная накануне, и даже минеральная сильногазированная вода). Большое количество ложноположительных результатов получается при проведении тестирование в домашних условиях.

Ложноотрицательный результат теста на ВИЧ говорит о том, что вирус в крови больного присутствует, но антитела еще не выработались. При проведении анализа ПЦР ложноотрицательный результат может быть получен у ВИЧ-инфицированных больных в период проведения специфического лечения, когда концентрация вирусов в крови настолько мала, что приводит к несрабатыванию тест-системы. В большинстве случаев ложноотрицательный результат получается при технической ошибке или браке в тест-системе, что встречается крайне редко ввиду проведения жесткого контроля качества на всех уровнях.

Анализ на ВИЧ необходимо отложить минимум на две недели после перенесенного инфекционного заболевания или вакцинации.

серологическое исследование вич

Рис. 7. Проведение серологического исследования крови.

к содержанию ↑

Тест-системы, определяющие наличие антител к ВИЧ

При помощи тестирования на антитела в вирусу иммунодефицита человека оценивается ответ организма на инфицирование. С этой целью применяется иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA), позволяющий обнаружить антитела к белкам вируса и подтверждающий анализ иммуноблотинг (вестерн-блот), при помощи которого определяется реакция антител на белки вируса.

Антитела к ВИЧ

Вирусы иммунодефицита человека обладают антигенными свойствами и при попадании в организм человека вызывают синтез антител — специфических иммуноглобулинов. С помощью современных тест-систем в сыворотке крови и других биологических жидкостях больного ВИЧ можно определить класс иммуноглобулинов (антител). Раньше всех (через неделю после инфицирования) появляются иммуноглобулины класса IgМ. Их рост отмечается в течение месяца и далее они сохраняются еще около 30 дней. Иммуноглобулины класса IgG циркулируют в крови несколько лет. Их выявление является показателем наличия ВИЧ-инфекции.

Антитела к ВИЧ появляются через 2 — 4 нед. после инфицирования и далее они определяются в крови на протяжении всего заболевания.

Период «окна» при ВИЧ

Антитела в организме инфицированного человека вырабатываются не сразу. На первых порах ВИЧ-инфекция ничем себя не проявляет. Антитела появляются в крови в среднем через 2 — 3 месяца от момента заражения (от 2-х недель до 6-и месяцев). Этот период получил названия «окна», когда анализы на антитела еще отрицательные, но вирусы интенсивно размножаются, а сам больной становится опасным в плане заражения контактных лиц. Выявить инфицированного можно через более короткий (1 — 2 недели) период после заражения, для чего применяется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Однако из-за дороговизны данный вид исследования для скрининга не используется.

Иммуноферментный анализ при диагностике ВИЧ

У 90 — 95% инфицированных лиц антитела в сыворотке крови появляются через 3-и месяца после заражения, У небольшой части больных (5 — 9 %) антитела появляются в период от 3 до 9 месяцев и у 0,5 — 1% — в более поздние сроки. В терминальной стадии СПИДа количество антител снижается значительно, а в некоторых случая исчезают вовсе.

ИФА при диагностике ВИЧ проводится с целью получения суммарного спектра антител против белков (антигенов) ВИЧ — р24 и gр160. С 1985 года данная методика используется на территории РФ с целью массовых исследований. Он прост в исполнении, показывает довольно точные результаты, является дешевым по сравнению с другими методиками. В связи с возможностью получения ложноположительных результатов все положительные результаты исследуются дважды, после чего сыворотка крови больного исследуется подтверждающим тестом — иммунного блота. При этом используется тот же образец крови. При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

В РФ используются обычно ИФА 4-го поколения. Тест видит как антитела (вырабатываются организмом больного), так и антигены (белки вируса ) р24. «Период окна» для тестов 4-го поколения более короткий. Уже через месяц можно получать достоверные результаты. Однако более надежным, как считают специалисты здравоохранения, являются сроки 6, 8 или 12 (в РФ) недель.

иммуноферментные анализаторы вич

Рис. 8. На фото иммуноферментные анализаторы.

анализатор вич

Рис. 9. На фото иммуноферментный автоматический анализатор.

Для первичного обследования групп лиц с целью выявления ВИЧ-инфекции применяется только методика ИФА.

Метод иммуноблотинга

Метод иммуноблотинга является более точным, чем ИФА, по мнению большинства специалистов — эталонным. С его помощью в сыворотке крови обнаруживают антитела к белкам ВИЧ. Методика применяется с целью подтверждения результатов, полученных при проведении ИФА. Обладает высокой специфичностью. Ложноположительные результаты встречаются редко. Достоверность полученных результатов достигает 99%. Иммуноблотинг является дорогостоящей методикой и требует высокой специализации специалиста, проводящего исследование. Возможно получение сомнительных результатов.

Метод основан на разделении антигенов (белков) ВИЧ с применением электрофореза по молекулярной массе. Первыми при инфицировании выявляются антитела против капсидных белков «Gag» (р24 и р17) и прекурсор р55. Вслед за ними появляются антитела против суперкапсидных белков «Env» (гликопротеидов gр 160, gр120, gр41 и белков р88) и неструктурных белков «Pol» (р31, р51 и р66). В ряде случаев могут определяться антитела против генов «vpu», «vpr», «vif», «tat», «nef», «rev», «tat».

Сыворотка крови больных ВИЧ-1 и ВИЧ-2 содержит антитела ко всем белкам вирусов, но для подтверждения диагноза определяются у ВИЧ-1 только антитела к белкам р24, gр41, gр120 и gр160, у ВИЧ-2 — антитела к белкам gр105, gр140 и gр36.

При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

иммуноблот вич

Рис. 10. Аппарат для проведения исследования методом иммуноблота.

иммуноблот

Рис. 11. Диагноз ВИЧ-инфекции ставиться при наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе.

к содержанию ↑

Тест-системы для подсчета СД4-лимфоцитов

Одним из иммунологических тестов, применяемых при ВИЧ-инфекции, является методика подсчета СD4 и СД8-лимфоцитов в крови.

СD4-лимфоциты (Т-хелперы) поражаются вирусами иммунодефицита. Постепенное истощение их популяции приводит к снижению иммунитета и организм больного перестает противостоять инфекции. Подсчет CD4-лимфоцитов осуществляется методом проточной цитометрии с помощью автоматических анализаторов или вручную при оптической или флюоресцентной микроскопии. По количеству СD4-лимфоцитов определяется время начала специфического лечения (антиретровирусной терапии) и профилактики оппортунистических инфекций, оценивается эффективность лечения.

  • При количестве CD4-лимфоцитов в сыворотке крови от 500 и ниже в 1 мл говорит о развитии иммунодефицита.
  • При снижении количества CD4-лимфоцитов до 200 в 1 мл (норма от 600 до 1900 клеток в 1 мл) развивается сидром приобретенного иммунодефицита — СПИД.
  • При снижении уровня CD4-лимфоцитов до 50 и ниже в 1 мкл СПИД переходит в терминальную стадию.

Удельный вес CD4-лимфоцитов среди всех лимфоцитов в норме составляет около 40%. Снижение показателя до 20% говорит о развитии СПИДа.

CD8-лимфоциты (Т-киллеры, на англ. killer — убийца) уничтожают вирусы ВИЧ путем цитолиза. Их пролиферация (увеличение количества) зависит от активности Т-хелперов. При ВИЧ-инфекции количество CD4 и CD8-лимфоцитов уменьшается, но более всего падает уровень CD4-лимфоцитов. Соотношение CD4/ CD8 в норме составляет 1,5 — 2,5. При снижении количества CD4- лимфоцитов отмечается снижение индекса.

Его величина менее 1 говорит о развившемся иммунодефиците, при показателе соотношения 0,6 — 0,8 развивается СПИД.

При получении положительных результатов тестирования человек должен стать на учет в государственное учреждение Центр профилактики и борьбы со СПИД, где будет установлен мониторинг за его состоянием и назначено адекватное специфическое лечение.

фото анализ вич

Рис. 12. На фото проточные автоматические анализаторы с помощью которых осуществляется подсчет CD4-лимфоцитов в крови исследуемого.

к содержанию ↑

Тест на ВИЧ с применением ПЦР

Все большее распространение в последние годы получает молекулярно-генетический метод диагностики ВИЧ-инфекции — полимеразная цепная реакция (ПЦР). С ее помощью определяется генетический материал возбудителя — РНК уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения, а высокая чувствительность теста позволяет выявлять РНК вирусов даже если их в исследуемом материале находятся единицы. Данная методика является дорогостоящей и поэтому в настоящее время для скрининга не используется. К тому же значимой проблемой исследования является возможность получения ложноположительных результатов.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Суть данной методики заключается в получении множества копий РНК вируса (нуклеиновой кислоты), в последующем выявляемых как по характерному строению, так и с помощью меченых ферментов или изотопов.

Возможности ПЦР при ВИЧ-инфекции

С помощью ПЦР можно разрешить сомнительные результаты, полученные при применении методики иммуноблотинга, диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях (уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения), контролировать эффективность проводимой антиретровирусной терапии, определять стадию заболевания.

Анализы ПЦР рекомендовано сдавать спустя 4 недели от момента предполагаемого риска.

фото вич

Рис. 13. На фото слева нормальный Т-лимфоцит, справа — Т-лимфоцит, инфицируемый ВИЧ. Видны множественные пузыри, между которыми появились новообразованные вирусы (мелкие округлой формы образования). С помощью ПЦР ВИЧ-инфицированность выявляется уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения.

Преимущества методики ПЦР при ВИЧ

  • С помощью ПЦР возможно выявить сам вирус и его количество.
  • Возможность использования у детей младше полутора лет.
  • Проводить оценку эффективности лечения.
  • Определить тяжесть и прогноз заболевания.

Недостатки методики ПЦР при ВИЧ

  • Большая стоимость исследования.
  • Наличие специализированных лабораторий.
  • Длительность получения результатов (до 4-х недель).

Кому проводится ПЦР

  1. Получение результата на 7 — 10 день лицам в случае предполагаемого инфицирования, когда желателен результат, полученный в короткие сроки.
  2. Для определения срока начала и оценки эффективности проводимого лечения.
  3. ПЦР проводится инфицированным беременным за 4 недели до родов с целью решения вопроса о применения кесарево сечения.
  4. Новорожденным от инфицированных матерей. Дважды полученный положительный результат свидетельствует о заражении ребенка.

В обычных условиях для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции ПЦР не используется.

РНК ПЦР и ДНК ПЦР. В чем разница

  • РНК ПЦР доказывает факт наличия вируса иммунодефицита в крови и объем выявленной РНК. Данное исследование применяется у диагностированных лиц с целью оценки эффективности проводимой терапии.
  • С помощью ДНК ПЦР определяется наличие вируса в мононуклеарных клетках у детей, когда антитела к вирусу иммунодефицита человека у матери мешает использовать методику ИФА.

Вирусная нагрузка

Вирусная нагрузка определяется путем подсчета количества РНК-копий в 1 мл плазмы крови, что позволяет определить стадию заболевания, провести анализ проводимого специфического лечения, определить тяжесть и прогноз заболевания. Чем выше вирусная нагрузка, тем меньше в плазме крови регистрируется CD4-лимфоцитов.

Интерпретация результатов:

  • РНК либо не выявлена, либо число копий РНК менее 20 в 1 мл. плазмы.
  • РНК выявлена на пределе чувствительности — менее 20 копий/мл.
  • РНК от 20 до 106 копий в 1 мл плазмы крови говорит о достоверности результата.
  • РНК-копий более 106мл — верхний предел линейного диапазона.

Увеличение вирусной нагрузки у больного с ВИЧ-инфекцией в три и более раза является клинически значимым результатом.

Контроль над вирусной нагрузкой проводится каждые 3 месяца у больных, лечение которым еще не проводится. В случае начала проведения антиретровирусной терапии контроль осуществляется через 2 — 8 недель.

пцр вич

Рис. 14. ПЦР в последние годы пользуется все большей популярностью.

пцр

Рис. 15. Амплификаторы для проведения ПЦР.

Тест на ВИЧ необходимо проводить на ранних сроках инфицирования и периодически при заболевании, что обеспечит своевременное назначение антиретровирусной терапии предупреждение и развития грозных инфекционных и онкологических процессов.

к содержанию ↑

Культивирование вируса

Обнаружить вирусы, его РНК, ДНК, антигены и антитела можно не только в сыворотке крови, но и сперме, слюне, содержимом влагалища и др. Культивируют ВИЧ в культуре клеток лимфоцитов. Методика является высокочувствительной и специфичной (до 100%), однако дороговизна исследования не позволяет его использовать в повседневной лабораторной работе.

к содержанию ↑

Общий анализ крови на ВИЧ

В результате поражения вирусами иммунодефицита человека кроветворных органов отмечается угнетение кроветворения, что проявляется снижением числа лимфоцитов (лимфопения), нейтрофилов (нейтропения), тромбоцитов (тромбопения) и анемия. К тому же на разрушение клеточных популяций оказывают влияние аутоиммунные процессы, развивающиеся у ВИЧ-инфицированных больных. В сыворотке крови больных доминирут иммуноглобулины IgG.

забор крови из вены

Рис. 16. Забор крови из вены и пальца для анализов.

Сегодня сдать анализ на ВИЧ можно любому человеку анонимно и бесплатно за считанные минуты, а современное оборудование и обученный персонал позволяют получить максимально точные результаты.

Кстати, на эту тему у нас есть статья  Можно ли вылечить ВИЧ-инфекцию
К содержанию ↑  
Статьи раздела "ВИЧ-инфекция"
Самое популярное
ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?
Подпишитесь на нашу рассылку!
 Комментарии
О микробах и болезнях © 2017
Рейтинг@Mail.ru
Наверх