Difterijas diagnoze balstās uz klīniskiem datiem, kam seko diagnozes apstiprināšana ar bakterioloģisko izmeklēšanu. Difterijas laboratoriskā diagnostika ietver vairākus pētījumus, no kuriem galvenais ir mikrobioloģisks.
Bieži vien diagnozes noteikšanai pietiek ar rūpīgi savāktu slimības vēsturi un orofarneksa pārbaudi. Jebkāda kavēšanās diagnozes noteikšanā un adekvātas ārstēšanas nozīmēšanā palielina slimības nelabvēlīga iznākuma iespējamību.
Patogēnu kultūras izolēšana ar sekojošu toksicitātes noteikšanu izolētajos patogēnos ir galvenā un vienīgā difterijas mikrobioloģiskās diagnostikas metode.Pēc 24 stundām tiek iegūts provizoriskais rezultāts, pēc 48 stundām tiek iegūts difterijas baciļu toksicitātes pārbaudes rezultāts, pēc 72 stundām tiek noteikts patogēna biovars.
Mikroskopiskā difterijas izmeklēšana ir neracionāla.
Seroloģiskā diagnoze balstās uz antibakteriālo antivielu titra palielināšanās noteikšanu. Rezultāti tiek iegūti slimības 2. nedēļā.
Kad tiek diagnosticēta difterija, baktēriju DNS noteikšanai izmanto ģenētisko metodi (PCR).
Lateksa aglutinācijas reakcija ir ātra metode. Rezultāts tiek iegūts divu stundu laikā.
Imunofluorescences analīze ir produktīva. Tomēr to drīkst veikt tikai augsti kvalificēts personāls.
Rīsi. 1. Netīri balta plēvīte un izteikts kakla zemādas taukaudu pietūkums – “buļļa kakls” – ir klasiskas difterijas pazīmes.
Difterijas mikrobioloģiskā diagnostika
Mikrobioloģiskā izmeklēšana ir galvenā difterijas laboratoriskās diagnostikas metode.
Sēšanas metode uz barības vielu barotnēm
Kādos gadījumos tiek veikta bakterioloģiskā izmeklēšana?
Bakterioloģiskā izpēte tiek veikta šādos gadījumos:
lai diagnosticētu rīkles, deguna un rīkles difteriju pieaugušajiem un bērniem,
lai identificētu iespējamo baktēriju pārnēsāšanos personām, kuras nonāk pirmsskolas iestādēs un specializētās pieaugušo iestādēs,
lai identificētu slimību kontaktpersonu vidū.
Materiāls izpētei
Materiālu pētniecībai (difterijas uztriepi) savāc tukšā dūšā vai 2 stundas pēc ēšanas. Pētījumiem tiek izmantotas difterijas plēves vai audu gabali, kas atrodas tuvumā, izdalījumi no skartajām vietām un nazofaringeālās gļotas.
Materiāla savākšanas metode
Materiāla savākšana (difterijas uztriepe) tiek veikta ar vates tamponu. Mēles sakne tiek nospiesta ar lāpstiņu. Izmantojot vates tamponu, jums jāpieskaras mandeles gļotādai pie plēves robežas, arkas un rīkles aizmugurējās sienas. Pēc tam tamponu nolaiž sterilā mēģenē, nepieskaroties tās sienām.
Pirmo 3 stundu laikā jānosūta uz laboratoriju. Ja nākamo 3-4 stundu laikā nav iespējams inokulēt, materiālu savāc ar sterilu vates tamponu, kas ir samitrināts 5% glicerīna šķīdumā izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā vai 2% kālija telurīta šķīdumā.
Materiāla vākšana (uztriepe pret difteriju) tiek veikta ar diviem vates tamponiem, no kuriem vienu izmanto kultivēšanai, otru mikroskopijai.
Ja ir aizdomas par difteriju, par to jāinformē laboratorijas darbinieki, lai savāktais materiāls tiktu inokulēts uz atbilstošām barotnēm (asins agara, Leflera barotnes vai telūrīta barotnes).
Difterijas baktēriju audzēšana
Inokulāciju veic uz barotnes (asins agara, Leflera barotnes vai telurīta barotnes). Telurīts augstā koncentrācijā nomāc pavadošās mikrofloras augšanu.
Rīsi. 2. Fotoattēlā redzama difterijas baciļu koloniju augšana uz dažādām barotnēm - asins agara un telurīta barotnes.
Baktērijām augot uz asins agara, kolonijas iegūst bālganu krāsu, tās ir necaurspīdīgas, apaļas, izliektas formas, 1–2 mm diametrā, bieži vien eļļainas konsistences.
Kad baktērijas aug uz telurīta barotnes, kolonijas ir pelēkas, izliektas un ar gludām malām. Pēc divām dienām kolonijas iegūst tumši pelēku vai melnu krāsu, tām ir metālisks spīdums, gludas vai ķemmētas malas, virsma ir gluda vai radiāli svītraina.
Difterijas biotipa (celma šķirnes) identificēšana
Difterijas patogēnu celmu šķirņu identificēšana balstās uz baktēriju spēju sadalīt glikogēnu un cieti. Šiem nolūkiem tiek izmantota “garās” ogļhidrātu sērijas tehnika.
Ņemot vērā patogēnu fermentatīvās īpašības un koloniju struktūru augšanas laikā uz telurīta barotnēm, izšķir 4 Corynebacterium diphtheria biotipus: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius un Corynebacterium belfantiphtheria.
Rīsi. 3. Fotoattēlā pa kreisi ir Corynebacterium diphtheriae gravis kolonijas. Tie ir liela izmēra, izliekti centrā, radiāli svītroti, ar nelīdzenām malām. Fotoattēlā labajā pusē ir Corynebacterium diphtheriae mittis. Tie ir maza izmēra, tumšā krāsā, gludi un spīdīgi, ar gludām malām.
Difterijas baciļu toksikogenitātes noteikšana
Difterijas patogēnu toksicitāti nosaka pēc baktēriju kultūras izolēšanas. Šiem nolūkiem tiek izmantota difūzās nogulsnēšanas metode gēlā un baktēriju toksicitātes noteikšanas metode dzīvā organismā (jūrascūciņās).
Bakterioskopijas tehnika
Laboratoriskajai diagnostikai, izmantojot mikroskopiju, ir sekundāra nozīme. Sakarā ar to, ka difterijas patogēni slikti absorbē krāsvielas, Grama krāsojums tiek uzskatīts par nespecifisku, taču tas ļauj netieši identificēt nepatogēnas korinebaktērijas, kas uztriepē atrodas paralēli viena otrai.
Nokrāsojot pēc Neisera, atklājas difterijas baciļiem raksturīgi Babeša-Ernsta graudi, kas atrodas šūnu polios, piešķirot tiem nūjas izskatu.
Uztriepēs patogēni difterijas baciļi atrodas viens pret otru leņķī.
Lai identificētu Babes-Ernst graudus, tiek izmantota fluorescences mikroskopijas tehnika. Mikroskopā iekrāsojot uztriepes ar korifosfīnu, var redzēt dzeltenzaļus baktēriju šūnu ķermeņus ar oranžsarkaniem volutīna graudiņiem.
Rīsi. 4. Difterijas baciļi zem mikroskopa. Grama traips.
Rīsi. 5. Fotoattēlā pa kreisi ir Hofmaņa pseidodifterijas baciļi. Tie bieži atrodas nazofarneksā. Tie ir biezi, īsi, atrodas gājienos paralēli viens otram. Labajā pusē esošajā fotoattēlā ir patogēnas baktērijas. Uztriepes tie atrodas viens pret otru leņķī.
Seroloģiskie testi var noteikt antibakteriālas un antitoksiskas antivielas. Antibakteriālo antivielu noteikšana ir nozīmīga, jo antitoksīna saturs mainās, lietojot antitoksisku serumu jau no pirmajām dienām. Pašlaik visizplatītākā ir pasīvā hemaglutinācijas reakcija (RPHA un RPHA).
Imūnglobulīni G un M norāda uz infekcijas procesa smagumu.
Imūnglobulīns G norāda uz nesenu slimību.
Imūnglobulīni M norāda uz akūtu difteriju.
Ar difteriju antivielu titrs laika gaitā palielinās. Antivielu koncentrācijas samazināšanās norāda uz pacienta atveseļošanos.
Antivielas pret difteriju veidojas pēc vakcinācijas. Tie cirkulē vakcinētas personas asinīs daudzus gadus.
Difterijas diagnostika, izmantojot imunofluorescences testu
Pateicoties fluorescējošu antivielu metožu izmantošanai, ir kļuvis iespējams veikt intracelulāro un virsmas antigēnu kvalitatīvu un kvantitatīvu analīzi šūnu suspensiju paraugos. Antigēnus vizualizē, izmantojot specifiskas antivielas ar fluorescējošiem marķieriem. Šīs tehnikas izmantošana ir uzticēta tikai augsti kvalificētam personālam.
Difterijas diagnostika, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju (PCR)
PCR metodi izmanto difterijas baciļu agrīnai atklāšanai, diagnozes apstiprināšanai un netipisku kakla sāpju gadījumos. Toksikogēnā gēna noteikšana ar PCR ir ātrākā un uzticamākā metode difterijas laboratoriskai diagnostikai.
Rīsi. 6. PCR ir ātrākā un uzticamākā difterijas laboratoriskās diagnostikas metode.
Ar toksiskiem sirds muskuļa bojājumiem izmaiņas tiek atzīmētas elektrokardiogrammā, fonokardiogrammā un sirds ultraskaņā. Tiek pētīta vairāku enzīmu (laktāta dehidrogenāzes, kreatīnfosfokināzes, aspartātaminotransferāzes) aktivitāte.
Nieru bojājumi difterijas gadījumā izpaužas toksiskas nefrozes formā. Ja ir aizdomas par šo komplikāciju, tiek veikta vispārēja asins un urīna analīze, bioķīmiskie pētījumi (kreatinīna, urīnvielas, atlikuma slāpekļa noteikšana) un nieru ultraskaņa.
Toksisks aknu bojājums rodas ar hipoglikēmijas (glikozes līmeņa pazemināšanās asinīs) un glikozūrijas (glikozes klātbūtne urīnā) simptomiem.
Anēmijas attīstība ir saistīta ar sarkano asins šūnu hemolīzi.
Antidifterijas imunitātes esamība vai neesamība tiek noteikta, izmantojot intradermālu Šika testu, ko veic ar difterijas toksīnu.
Negatīvās reakcijas gadījumā viņi runā par imunitāti pret difteriju. Mūsdienās Šika reakciju izmanto tikai epidemioloģiskām indikācijām. Tas aizņem vairākas dienas. Tomēr, neskatoties uz to, tas palīdz noteikt uzņēmības pakāpi pret difteriju personām, kas bijušas saskarē ar pacientu, un noskaidrot viņu imūno stāvokli.
Rīsi. 7. Šika reakciju veic ar difterijas toksīnu. Standarta difterijas toksīns 0,2 ml devā tiek injicēts intradermāli apakšdelma vidējā trešdaļā ar tuberkulīna šļirci.
