Diagnose av difteri er basert på kliniske data, etterfulgt av bekreftelse av diagnosen ved bakteriologisk undersøkelse. Laboratoriediagnose av difteri inkluderer en rekke studier, hvorav den viktigste er mikrobiologisk.
Ofte er en nøye samlet sykehistorie og undersøkelse av orofarynx tilstrekkelig for å stille en diagnose. Enhver forsinkelse i å etablere en diagnose og foreskrive adekvat behandling øker sannsynligheten for et ugunstig utfall av sykdommen.
Isolering av en kultur av patogener med påfølgende bestemmelse av toksikogenisitet i de isolerte patogenene er den viktigste og eneste metoden for mikrobiologisk diagnose av difteri.Det foreløpige resultatet oppnås etter 24 timer, etter 48 timer oppnås resultatet av testing av difteribaciller for toksikogenisitet, etter 72 timer bestemmes biovaren til patogenet.
Mikroskopisk undersøkelse for difteri er irrasjonell.
Serologisk diagnose er basert på å bestemme økningen i titeren av antibakterielle antistoffer. Resultatene oppnås i den andre uken av sykdommen.
Når difteri er diagnostisert, brukes en genetisk metode (PCR) for å bestemme DNA til bakterier.
Lateksagglutinasjonsreaksjonen er en rask metode. Resultatet oppnås innen to timer.
Immunfluorescensanalyse er produktiv. Det bør imidlertid kun utføres av høyt kvalifisert personell.
Ris. 1. En skitten hvit film og uttalt hevelse av det subkutane fettvevet i nakken - "bull neck" - er klassiske tegn på difteri.
Mikrobiologisk diagnose av difteri
Mikrobiologisk undersøkelse er den viktigste metoden for laboratoriediagnose av difteri.
Metode for såing på næringsmedier
I hvilke tilfeller utføres bakteriologisk undersøkelse?
Bakteriologisk forskning utføres i følgende tilfeller:
med det formål å diagnostisere difteri i svelget, nesen og svelget hos voksne og barn,
for å identifisere mulig bakterietransport hos personer som går inn i førskoleinstitusjoner og spesialiserte institusjoner for voksne,
for å identifisere sykdommen blant kontaktpersoner.
Materiale for forskning
Materiale for forskning (utstryk for difteri) samles på tom mage eller 2 timer etter spising. For forskning brukes difterifilmer eller vevsstykker som ligger i nærheten, utslipp fra de berørte områdene og nasofaryngealt slim.
Metode for å samle inn materiale
Innsamlingen av materiale (utstryk for difteri) utføres med en bomullspinne. Roten av tungen presses med en slikkepott. Ved hjelp av en bomullspinne må du berøre slimhinnen i mandlene ved kanten av filmen, buene og bakveggen av svelget. Deretter senkes vattpinnen ned i et sterilt reagensrør uten å berøre veggene.
Må sendes til laboratoriet innen de første 3 timene. Hvis det er umulig å inokulere i løpet av de neste 3-4 timene, samles materialet med en steril bomullspinne, som er fuktet i en 5% løsning av glyserin i en isotonisk løsning av natriumklorid eller en 2% løsning av kaliumtelluritt.
Innsamlingen av materiale (utstryk for difteri) utføres med to bomullspinner, hvorav den ene brukes til dyrking, den andre til mikroskopi.
Ved mistanke om difteri er det nødvendig å varsle laboratoriepersonalet slik at det innsamlede materialet inokuleres på passende medier (blodagar, Lefflers medium eller tellurittmedium).
Dyrking av difteribakterier
Inokulering utføres på næringsmedier (blodagar, Lefflers medium eller tellurittmedium). Telluritt i høy konsentrasjon undertrykker veksten av medfølgende mikroflora.
Ris. 2. Bildet viser veksten av difteribacillus-kolonier på forskjellige medier - blodagar og tellurittmedium.
Når bakterier vokser på blodagar, får koloniene en hvitaktig farge, de er ugjennomsiktige, runde, konvekse i form, 1 - 2 mm i diameter, ofte med en fet konsistens.
Når bakterier vokser på tellurittmedier, er koloniene grå, konvekse og har glatte kanter. Etter to dager får koloniene en mørkegrå eller svart farge, de har en metallisk glans, glatte eller bølgete kanter, overflaten er glatt eller radialt stripete.
Identifikasjon av biotypen (stammevarianten) av difteri
Identifikasjon av varianter av stammer av difteripatogener er basert på bakteriers evne til å bryte ned glykogen og stivelse. For disse formålene brukes den "lange" serien med karbohydrater.
Tatt i betraktning de enzymatiske egenskapene til patogener og strukturen til kolonier under vekst på tellurittmedier, skilles 4 biotyper av Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae be intermedius og Corynebacterium diphtheriae.
Ris. 3. På bildet til venstre er kolonier av Corynebacterium diphtheriae gravis. De er store i størrelse, konvekse i midten, radialt stripete, med ujevne kanter. På bildet til høyre er Corynebacterium diphtheriae mittis. De er små i størrelse, mørke i fargen, glatte og skinnende, med glatte kanter.
Bestemmelse av toksikogenisitet av difteribasiller
Toksikogenisiteten til difteripatogener bestemmes etter isolering av bakteriekulturen. For disse formål brukes metoden for diffus utfelling i en gel og metoden for å bestemme toksikogenisiteten til bakterier i en levende organisme (marsvin).
Bakterioskopiteknikk
Laboratoriediagnostikk ved hjelp av mikroskopi er av underordnet betydning. På grunn av det faktum at difteripatogener ikke absorberer fargestoffer godt, anses Gram-farging som uspesifikk, men det tillater indirekte identifikasjon av ikke-patogene corynebakterier, som er plassert parallelt med hverandre i utstryket.
Når de farges ifølge Neisser, avsløres Babesch-Ernst-korn som er karakteristiske for difteri-basiller, som er plassert ved polene til cellene, og gir dem utseendet som en kølle.
Ved utstryk er patogene difteribasiller plassert i en vinkel til hverandre.
For å identifisere Babes-Ernst-korn brukes fluorescensmikroskopiteknikken. Når utstryk farges med koryfosfin under et mikroskop, kan man se gulgrønne bakteriecellekropper med oransjerøde volutinkorn.
Ris. 4. Difteri-basiller under et mikroskop. Gram flekk.
Ris. 5. På bildet til venstre er Hoffmanns pseudodifteri-basiller. De finnes ofte i nasopharynx. De er tykke, korte, plassert i slag parallelt med hverandre. Bildet til høyre er patogene bakterier. I smøret er de plassert i vinkel mot hverandre.
Serologiske tester kan påvise antibakterielle og antitoksiske antistoffer. Påvisningen av antibakterielle antistoffer er betydelig, siden innholdet av antitoksinet endres på grunn av bruk av antitoksisk serum fra de første dagene. Den vanligste for tiden er den passive hemagglutinasjonsreaksjonen (RPHA og RPHA).
Immunoglobuliner G og M indikerer alvorlighetsgraden av den smittsomme prosessen.
Immunoglobulin G indikerer en nylig sykdom.
Immunoglobuliner M indikerer akutt difteri.
Med difteri øker antistofftiteren over tid. En reduksjon i antistoffkonsentrasjon indikerer at pasienten er frisk.
Anti-difteri-antistoffer dannes etter vaksinasjon. De sirkulerer i blodet til en vaksinert person i mange år.
Difteridiagnose ved hjelp av immunfluorescensanalyse
Takket være bruken av fluorescerende antistoffteknikker har det blitt mulig å utføre kvalitativ og kvantitativ analyse av intracellulære og overflateantigener i prøver av cellesuspensjoner. Antigener visualiseres ved hjelp av spesifikke antistoffer med fluorescerende markører. Bruken av denne teknikken er kun tiltrodd til høyt kvalifisert personell.
Difteridiagnose ved hjelp av polymerasekjedereaksjon (PCR)
PCR-teknikken brukes til tidlig påvisning av difteribaciller, bekreftelse av diagnose og ved atypisk sår hals. Påvisning av det toksikogene genet ved PCR er den raskeste og mest pålitelige metoden for laboratoriediagnose av difteri.
Ris. 6. PCR er den raskeste og mest pålitelige metoden for laboratoriediagnose av difteri.
Med giftig skade på hjertemuskelen noteres endringer på elektrokardiogram, fonokardiogram og ultralyd av hjertet. Aktiviteten til en rekke enzymer (laktatdehydrogenase, kreatinfosfokinase, aspartataminotransferase) studeres.
Nyreskade ved difteri manifesterer seg i form av giftig nefrose. Ved mistanke om denne komplikasjonen utføres en generell blod- og urinprøve, biokjemiske studier (bestemmelse av kreatinin, urea, restnitrogen) og en ultralyd av nyrene.
Giftig leverskade oppstår med symptomer på hypoglykemi (nedgang i blodsukkernivået) og glukosuri (tilstedeværelse av glukose i urinen).
Utviklingen av anemi er assosiert med hemolyse av røde blodlegemer.
Tilstedeværelsen eller fraværet av anti-difteri-immunitet etableres ved hjelp av en intradermal Schick-test, som utføres med difteritoksin.
Ved en negativ reaksjon snakker de om immunitet mot difteri. I dag brukes Schick-reaksjonen kun for epidemiologiske indikasjoner. Det tar flere dager å fullføre. Men til tross for dette, hjelper det å bestemme graden av mottakelighet for difteri hos personer som var i kontakt med pasienten og klargjøre deres immunstatus.
Ris. 7. Schick-reaksjonen utføres med difteritoksin. Standard difteritoksin i en dose på 0,2 ml injiseres intradermalt i den midtre tredjedelen av underarmen med en tuberkulinsprøyte.
