Ang pagsusuri para sa syphilis ay isa sa mga pinakakaraniwang pagsusuri sa laboratoryo. Ang mga pagsusuri para sa syphilis ay malawakang ginagamit sa panahon ng preventive examinations. Gamit ang microscopy, natukoy ang causative agent ng syphilis - Treponema pallidum.Gamit ang serological reactions, ang diagnosis ng syphilis ay nakumpirma, ang diagnosis ng latent syphilis ay itinatag, ang pagiging epektibo ng paggamot ay sinusubaybayan, at ang lunas ng mga pasyente ay tinutukoy.
Ang diagnosis ng syphilis ay itinatag batay sa klinikal na data, pagtuklas ng mga pathogens ng syphilis sa mga sample ng materyal at pagkumpirma ng diagnosis sa pamamagitan ng mga pamamaraan ng serological na pananaliksik. Ang mga pagpapakita ng syphilis ay marami at iba-iba, kaya naman ang sakit ay nasuri ng mga doktor ng iba't ibang specialty. Ang pagkakaiba-iba ng diagnosis ng pangunahing syphilis ay isinasagawa sa isang bilang ng mga sakit.
kanin. 1. Sa larawan, ang pangunahing pagpapakita ng syphilis ay chancre.
Antibodies sa Treponema pallidum at serological diagnosis
Kapag nahawaan ng syphilis, ang mga antibodies ay nabuo sa katawan ng pasyente. Ang serological diagnostics ay tumutulong sa doktor na pag-aralan ang dynamics ng pagbuo ng antibody sa katawan ng isang pasyente na may syphilis sa mga unang yugto ng sakit, sa panahon ng paggamot at pagkatapos nito, upang malutas ang isyu ng pagbabalik ng sakit sa pasyente. o re-infection (reinfection), upang masuri ang syphilis sa mass medical condition.
Antibodies sa Treponema pallidum IgM
Ang mga IgM antibodies ay ang unang ginawa pagkatapos ng impeksyon. Nagsisimula silang matukoy gamit ang mga serological na reaksyon mula sa ikalawang linggo pagkatapos ng impeksiyon. Sa 6-9 na linggo ng pagkakasakit, ang kanilang bilang ay nagiging maximum. Kung ang pasyente ay hindi ginagamot, ang mga antibodies ay mawawala pagkatapos ng anim na buwan. Ang IgM antibodies ay nawawala pagkatapos ng 1 - 2 buwan. pagkatapos ng paggamot ng maagang syphilis, pagkatapos ng 3 - 6 na buwan. - pagkatapos ng paggamot ng late syphilis. Kung ang kanilang paglaki ay naitala, ito ay isang tanda ng pagbabalik ng syphilis o nagpapahiwatig ng muling impeksyon. Ang mga molekula ng IgM ay malaki at hindi dumadaan sa inunan patungo sa fetus.
Antibodies sa Treponema pallidum IgG
Lumilitaw ang IgG immunoglobulin antibodies sa katapusan ng unang buwan (ika-4 na linggo) mula sa sandali ng impeksyon. Ang kanilang titer ay mas mataas kaysa sa IgM titer. Ang IgG ay nananatili sa loob ng mahabang panahon pagkatapos ng paggamot.
Nonspecific antibodies
Mayroong maraming mga serological reaksyon. Ito ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng antigenic multiplicity ng Treponema pallidum. Sa serum ng dugo ng isang taong may sakit sa iba't ibang yugto ng syphilis, bilang karagdagan sa mga tiyak, ang ilang mga nonspecific na antibodies ay nabuo - agglutinins, complement-fixing, immobilisin, antibodies na nagdudulot ng immune fluorescence, precipitin, atbp. Serological reactions to detect nonspecific antibodies magkaroon ng kamag-anak na pagtitiyak, samakatuwid, upang maiwasan ang mga error sa diagnostic, dapat mong gamitin hindi lamang isa, ngunit isang kumplikadong mga serological reaksyon (SRR).
Mga maling positibong pagsusuri para sa syphilis
Ang isang natatanging tampok ng mga pagsubok na hindi treponemal ay ang pagtanggap ng mga maling positibong reaksyon. Ang mga antibodies-reagins, na ginawa sa dugo ng tao laban sa cardiolipin antigen, ay naitala hindi lamang sa syphilis, kundi pati na rin sa iba pang mga sakit: collagenosis, hepatitis, sakit sa bato, thyrotoxicosis, kanser, mga nakakahawang sakit (leprosy, tuberculosis, brucellosis, malaria, typhus , scarlet fever), sa panahon ng pagbubuntis at regla, kapag umiinom ng matatabang pagkain at alkohol. Napansin na ang bilang ng mga maling positibong reaksyon ay tumataas sa edad.
kanin. 2. Ang larawan ay nagpapakita ng pangunahing syphilis sa mga kababaihan.
Laboratory diagnosis ng syphilis gamit ang serological test
Ang mga serological na pagsusuri para sa syphilis ay nahahati sa treponemal at nontreponemal.
1. Mga pagsubok na hindi treponemal
Ang antigen na ginamit sa grupong ito ng mga pagsubok ay cardiolipin antigen. Ang mga lipid antigens ng syphilis pathogens ay ang pinakamarami. Binubuo nila ang 1/3 ng tuyong masa ng cell. Gamit ang mga non-treponemal na pagsusuri, ang mga reagin antibodies ay nakita na ginawa laban sa cardiolipin antigen. Kasama sa grupong ito ang complement fixation test (FFR), microprecipitation test (MPR), rapid plasma reagin test (RPR), atbp. Gamit ang non-treponemal tests, isinasagawa ang pangunahing screening para sa syphilis (survey ng mga grupo ng populasyon), at ang posibilidad ng pagkuha ng mga resulta sa isang quantitative form ay nagbibigay-daan sa mga pagsusulit na ito na magamit upang subaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang mga positibong resulta mula sa mga pagsusuring hindi ntreponemal ay dapat kumpirmahin ng mga pagsusuring treponemal. Ang isang natatanging tampok ng mga pagsubok na hindi treponemal ay ang pagtanggap ng mga maling positibong reaksyon.
2. Mga pagsubok sa treponemal
Ang mga pagsusuri sa Treponemal ay gumagamit ng mga antigen na pinagmulan ng treponemal na nakahiwalay sa kultura ng Treponema pallidum. Sa kanilang tulong, ang mga positibong resulta ng mga pagsubok na hindi treponemal ay nakumpirma. Kasama sa grupo ang: RSKtrep - complement fixation reaction, RIF - immunofluorescence reaction at mga pagbabago nito, RIT, RIBT - immobilization reaction ng Treponema pallidum, RPHA - passive hemagglutination reaction, ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay.
3. Mga pagsusuri para sa syphilis gamit ang recombinant antigens
Ang mga antigen para sa pangkat na ito ng mga pagsubok ay nakuha sa pamamagitan ng genetic engineering at ginagamit sa mga reaksyon - RPGA at ELISA, sa immunoblotting (IB) na pagsusuri at immunochromatographic analysis.
kanin. 3. Isang hanay ng mga serological test ang ginagamit upang masuri ang syphilis.
Diagnosis ng syphilis gamit ang mga pagsusuring hindi treponemal
Upang makita ang syphilis, ginagamit ang mga non-treponemal na pagsusuri o isang complex ng serological reactions (SSR). Ang serological diagnosis ay ginagamit mula sa ika-5 linggo mula sa sandali ng impeksiyon o mula 2-3 linggo pagkatapos ng paglitaw ng chancre. Ang mga antibodies ay nakikita sa halos lahat ng mga pasyente na may sariwang pangunahin, pangalawa at paulit-ulit na syphilis. Ang mga reaksyon ng serological ay positibo sa 70 - 80% ng mga pasyente na may tertiary active syphilis, sa 50 - 60% ng mga kaso sa mga pasyente na may tertiary latent syphilis.
Ang mga pagsusuri sa serological na gumagamit ng mga pagsusuring hindi ntreponemal ay maaaring magbigay ng mga maling positibong resulta.
kanin. 4. Pag-sample ng dugo para sa pagsusuri para sa syphilis.
Complement fixation reaction (RSK card, KSK na may KA, reaksyon ng Wasserman)
Ang reaksyon ng Wasserman (RW, РВ), na naimbento ni A. Wasserman higit sa 100 taon na ang nakalilipas, ngayon ay sumailalim sa maraming pagbabago, gayunpaman, bilang isang pagkilala sa tradisyon, pinanatili nito ang pangalan nito hanggang sa kasalukuyan. Ang reaksyon ng pag-aayos ng pandagdag gamit ang cardiolipin antigen ay inilaan hindi lamang upang makita ang mga antibodies, ngunit isinasagawa din sa dami - na may iba't ibang mga serum dilution, na nagpapahintulot na magamit ito upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang mababang sensitivity at specificity, ang pagkuha ng mga maling positibong resulta ay ang mga negatibong aspeto ng ganitong uri ng pag-aaral.
Ang kakanyahan ng reaksyon ng Wasserman ay ang mga sumusunod: ang mga antigen na ginagamit upang isagawa ang reaksyon ng Wasserman, sa kaso ng pagkakaroon ng mga antibodies sa mga sanhi ng syphilis sa dugo ng tao, ay nagbubuklod sa kanila sa pamamagitan ng isang papuri at namuo. Ang intensity ng reaksyon ay ipinahiwatig ng isang tanda (+).Ang reaksyon ay maaaring negatibo (-) - walang sediment, nagdududa (maliit na sediment o +), mahina positibo (++), positibo (+++) at malakas na positibo (++++).
Ang binagong reaksyon ng Wasserman, ang reaksyon ng Kolmer, ay mas sensitibo. Sa tulong nito, ang mga antibodies ay nakita sa sera kung saan ang reaksyon ng Wasserman ay nagbigay ng negatibong resulta.
Sa kaso ng matinding positibong reaksyon, ang isang dami ng pagpapasiya ng mga reagin ay isinasagawa, kung saan ang serum ay ginagamit sa mga pagbabanto mula 1:10 hanggang 1:320, na nagpapahintulot sa paggamit ng ganitong uri ng pag-aaral upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Halimbawa, ang pagbaba sa titer ng antibody at ang kanilang kasunod na seronegativity (pagkuha ng mga negatibong resulta) ay nagpapahiwatig ng matagumpay na lunas ng sakit.
kanin. 5. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - reaksyon ni Wasserman.
Microprecipitation reaction (MPR)
Ginagamit ang precipitation microreaction para sa mass examinations ng ilang partikular na grupo ng populasyon, diagnosis ng syphilis at pagsubaybay sa pagiging epektibo ng paggamot. Upang maisagawa ang ganitong uri ng pananaliksik, kinakailangan ang isang maliit na halaga ng materyal sa pagsubok. Ang microreaction ng precipitation ay batay sa immunological antigen-antibody reaction. Kung ang mga antibodies ay naroroon sa serum ng dugo ng paksa, ang antigen-antibody complex ay namuo upang bumuo ng mga natuklap. Ang reaksyon ay isinasagawa sa mga balon ng isang espesyal na glass plate. Ito ay tinasa ng intensity ng precipitate at ang laki ng mga flakes sa (+) bilang reaksyon ng Wasserman. Hindi ito ginagamit kapag sinusuri ang mga buntis na kababaihan, mga donor at upang subaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot. Ang VDRL at RPR ay mga uri ng micro-reaksyon.
kanin. 6. Uri ng reaksyon ng pag-ulan sa isang patak sa salamin.
kanin. 7. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - reaksyon ng microprecipitation.
kanin. 8.Kit para sa mabilis na pagtukoy ng plasma reagins (RPR test para sa syphilis).
Ang lahat ng mga positibong pagsusuri na nakuha sa panahon ng hindi tiyak na mga reaksyon ng serological ay nangangailangan ng kumpirmasyon ng mga tiyak na reaksyon - mga pagsusuri sa treponemal.
Diagnosis ng syphilis gamit ang mga pagsusuri sa treponemal
Kapag nagsasagawa ng mga pagsusuri sa treponemal, ginagamit ang mga antigen ng pinagmulan ng treponemal. Ang kanilang negatibong panig ay ang imposibilidad ng paggamit ng mga ito upang subaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot, pagkuha ng mga positibong resulta sa spirochetosis at non-venereal treponematoses, at pagkuha ng mga maling positibong resulta sa mga sakit na oncological, ketong, at ilang mga endocrine pathologies. Ang mga pagsusuri tulad ng RPGA, ELISA at RIF ay nananatiling positibo sa loob ng maraming taon pagkatapos gumaling ang syphilis, at sa ilang mga kaso habang buhay.
Ang RIBT at RIF ay ang pinakaspesipiko sa lahat ng serological na reaksyon na ginagamit upang masuri ang syphilis. Ginagawa nilang posible na makilala ang pagitan ng mga maling positibong reaksyon at makilala ang mga huling anyo ng syphilis na nangyayari sa mga negatibong reaksyon. Sa tulong ng RIBT, ang mga maling positibong reaksyon sa mga buntis na kababaihan ay kinikilala kapag kinakailangan upang malutas ang isyu ng impeksyon ng bata.
Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente ay hindi kumikilos sa Treponema pallidum. Ang isang reaksyon ay itinuturing na negatibo kapag hanggang sa 20% ng mga pathogens ay hindi kumikilos, mahina positibo - 21 - 50%, positibo - 50 - 100%. Minsan nagbibigay ang RIBT ng mga maling positibong resulta.Ang pagsubok ay kumplikado at labor-intensive, gayunpaman, ito ay kailangang-kailangan sa differential diagnosis ng mga nakatagong anyo ng sakit at maling-positibong mga resulta ng serological reaksyon, kabilang ang sa mga buntis na kababaihan. Nagbibigay ang RIBT ng 100% positibong resulta para sa pangalawa, maaga at huli na syphilis, sa 94 - 100% ng mga kaso - para sa iba pang mga anyo ng syphilis.
Immunofluorescence reaction (RIF)
Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang treponema pallidum (antigens), na sinamahan ng mga antibodies na may label na fluorochromes, ay naglalabas ng dilaw-berdeng glow sa isang fluorescent microscope. Ang resulta ay sinusuri gamit ang isang palatandaan (+). Gamit ang RIF, natukoy ang mga immunoglobulin ng class A Ang reaksyon ng immunofluorescence ay nagiging positibo nang mas maaga kaysa sa reaksyon ng Wasserman. Ito ay palaging positibo sa pangalawang at tago na syphilis, sa 95 - 100% ng mga kaso ito ay positibo sa tertiary at congenital syphilis. Ang pamamaraan para sa pagsasagawa ng ganitong uri ng pananaliksik ay mas simple kaysa sa RIBT, ngunit imposibleng palitan ang RIF ng RIBT, dahil ang reaksyong ito ay mas mababa sa RIBT sa pagtitiyak. Ang RIF-10 (pagbabago ng RIF) ay mas sensitibo, ang RIF-200 at RIF-abs ay mas tiyak.
kanin. 9. Pagsusuri ng dugo para sa syphilis - immunofluorescence reaction (RIF).
Reaksyon ng immune adhesion ng Treponema pallidum (IAT)
Ang kakanyahan ng reaksyon ay ang treponema pallidum, na sensitized ng suwero ng pasyente, sa pagkakaroon ng pandagdag, ay sumusunod sa ibabaw ng mga pulang selula ng dugo. Ang mga nagresultang complex ay namuo sa panahon ng centrifugation. Ang sensitivity ng pagsubok at pagtitiyak na ito ay malapit sa RIF at RIBT.
Enzyme immunoassay para sa syphilis (ELISA)
Gamit ang ELISA, tinutukoy ang mga immunoglobulin ng klase M at G Ang pamamaraan ng IgM-ELISA ay maaaring gamitin bilang isang screening at confirmatory test.Ang sensitivity ng ELISA at ang pagtitiyak nito ay katulad ng RIF. Para sa syphilis, ang ELISA ay nagbibigay ng mga positibong resulta mula sa ikatlong buwan ng impeksyon at nananatiling positibo sa loob ng mahabang panahon (minsan sa buong buhay).
Ang RPHA ay batay sa kakayahan ng mga pulang selula ng dugo kung saan ang treponema pallidum antigens ay na-adsorbed upang magkadikit (hemagglutination) sa presensya ng suwero ng pasyente. Ginagamit ang RPGA upang masuri ang lahat ng anyo ng syphilis, kabilang ang nakatago. Kapag gumagamit ng mataas na kalidad na antigen, ang ganitong uri ng serological na reaksyon ay lumalampas sa lahat ng iba pang mga pagsubok sa pagiging tiyak at pagiging sensitibo.
kanin. 11. Ginagamit ang RPGA upang masuri ang lahat ng uri ng syphilis.
kanin. 12. Pagsubok para sa syphilis - passive (indirect) hemagglutination reaction (scheme).
kanin. 13. Ang hitsura ng isang baligtad na payong na sumasakop sa buong ilalim ng test tube ay nagpapahiwatig ng isang positibong reaksyon. Sa kaso kapag ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa isang column ("button") sa gitna ng ilalim ng test tube, isang negatibong reaksyon ang ipinahiwatig.
kanin. 14. Pagsusuri ng RPHA sa mga kondisyon ng laboratoryo.
Kasama ng serological diagnosis, ang paraan ng pag-detect ng Treponema pallidum (microbiological diagnosis) ay gumaganap ng isang mahalagang papel, lalo na sa panahon ng seronegative syphilis, kapag wala pa ring mga antibodies sa dugo, ngunit mayroon nang mga unang pagpapakita ng sariwang pangunahing syphilis ( chancroid).
Ang biological na materyal para sa pag-aaral ay discharge mula sa ibabaw ng matitigas na ulser (chancres), ang mga nilalaman ng pustular syphilides, pag-iyak at erosive papules, punctures ng mga nahawaang lymph node, cerebrospinal fluid at amniotic fluid para sa PCR - dugo.
Ang pinakamahusay na paraan para sa pag-detect ng mga pathogen ng syphilis ay ang pagsusuri ng biological na materyal sa isang dark field microscope. Ang pamamaraan na ito ay nagbibigay-daan sa iyo upang makita ang treponema pallidum sa isang buhay na estado, pag-aralan ang mga tampok na istruktura at paggalaw nito, at makilala ang mga pathogen pathogen mula sa saprophytes.
kanin. 15. Pagsusuri para sa syphilis - dark-field microscopy.
kanin. 16. Kapag nag-aaral ng mga dry smears, ginagamit ang Romanovsky-Giemsa staining. Ang maputlang treponema ay nagiging kulay rosas, ang lahat ng iba pang uri ng spirochetes ay nagiging lila.
Ang pagtuklas ng Treponema pallidum sa pamamagitan ng dark-field microscopy ay isang ganap na pamantayan para sa panghuling pagsusuri ng syphilis.
kanin. 17. Upang makilala ang bakterya, isang immunofluorescence reaction (RIF) ang ginagamit - isang treponemal test. Ang isang partikular na antigen-antibody complex, kapag pinagsama sa isang partikular na serum na may label na fluorochrome, sa liwanag ng isang fluorescent microscope ay nagbibigay sa bakterya ng isang maberdeng glow.
kanin. 18. Ang mga sanhi ng ahente ng syphilis ay malinaw na nakikita sa mga pahid na inihanda gamit ang pamamaraang Levaditi (pilak na impregnation). Ang maputlang treponema ay madilim na kulay laban sa background ng dilaw na kulay ng mga selula ng mga nahawaang tisyu.
kanin. 19. Ang causative agent ng syphilis sa multiple magnification.
kanin. 20. Ang larawan ay nagpapakita ng kolonya ng Treponema pallidum. Mahirap makakuha ng bacterial culture. Halos hindi sila lumalaki sa artipisyal na nutrient media. Sa media na naglalaman ng serum ng kabayo at kuneho, lumilitaw ang mga kolonya sa mga araw 3–9.
Ngayon, ang pamamaraan ng polymerase chain reaction ay epektibo at may pag-asa.Binibigyang-daan ka ng PCR para sa syphilis na makakuha ng mga resulta sa loob ng ilang oras, at hindi bababa sa ilang mga pathogen ang maaaring naroroon sa materyal na nakolekta para sa diagnosis.
kanin. 21. Maaaring makita ng PCR para sa syphilis ang DNA o mga fragment nito mula sa Treponema pallidum.
Ang sensitivity ng paraan ng pananaliksik na ito ay nakasalalay sa pagkakaroon ng Treponema pallidum sa biological na materyal at umabot sa 98.6%. Ang pagtitiyak ng pagsusulit na ito ay higit na nakadepende sa tamang pagpili ng target para sa amplification sa panahon ng diagnosis at umabot sa 100%.
Kasabay nito, dahil sa hindi sapat na pinag-aralan na mga paghahambing na katangian ng sensitivity at pagtitiyak ng mga direktang pamamaraan para sa pag-diagnose ng syphilis at PCR, ang pamamaraang ito ng pagsusuri sa Russian Federation para sa pag-diagnose ng sakit ay hindi pa naaprubahan.
Ang PCR para sa syphilis ay pinapayagan na isagawa lamang sa ilang mga kaso, bilang isang karagdagang paraan para sa pag-diagnose ng congenital syphilis, neurosyphilis, kung mahirap i-diagnose ang syphilis gamit ang mga serological na pamamaraan sa mga pasyente ng HIV.
kanin. 22. Ang pagtuklas ng Treponema pallidum DNA gamit ang PCR ay nagpapahiwatig ng alinman sa pagkakaroon ng mabubuhay na bakterya o ang mga labi ng mga patay na bakterya, ngunit naglalaman ng mga indibidwal na seksyon ng chromosomal DNA na may kakayahang bumuo ng mga karagdagang kopya.
