En HIV-blodprøve eller HIV-test inkluderer flere laboratoriediagnostiske metoder som hjelper til med å bestemme tilstedeværelsen av immunsviktviruset (HIV), oppdage antistoffer mot dets proteiner (immunoglobuliner) eller antigener (virusproteiner) i pasientens blod, spytt eller urin. Det humane immunsviktviruset har en unik antigen variabilitet, som er assosiert med en høy grad av transkripsjon (reproduksjon), noe som gjør både diagnostisering av HIV-infeksjon og forebygging av den vanskelig.
Grunnlaget for å diagnostisere HIV-infeksjon, som enhver annen smittsom sykdom, er:
epidemiologisk historie,
karakteristiske plager hos pasienten,
klinisk bilde av sykdommen,
data fra laboratorieforskningsmetoder.
Når diagnosen HIV-infeksjon er etablert, for å avklare arten av forløpet til den underliggende sykdommen og sekundære sykdommer, utføres ytterligere undersøkelse av pasienten og passende behandling foreskrives.
Alvorlighetsgraden av sykdommen vurderes av nivået av viruskonsentrasjon i blodet, antall CD4-lymfocytter og bestemmelsen av p24-antigenet.
Hovedtyper av HIV-diagnose
Virologisk diagnostikk er basert på påvisning av HIV i pasientens vev og biologiske væsker.
Polymerase kjedereaksjon (PCR) brukes til å oppdage viruset og vurdere virusmengden, noe som gjør det mulig å bedømme effektiviteten av spesifikk behandling og forutsi forløpet av infeksjonssykdommen.
Serologisk diagnose HIV-infeksjon innebærer påvisning av virale antigener og antistoffer i blodserum. Påvisning av antistoffer mot humant immunsviktvirus ved hjelp av ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) er den viktigste metoden for laboratoriediagnose. Alle positive resultater bekreftes ved immunblotting. Rask HIV-test er basert på påvisning av antistoffer i blodet og biologiske væsker til forsøkspersonen. Brukes i tilfeller hvor det er nødvendig å raskt oppnå resultater.
Nivå av immunsuppresjon bestemt ved metoden for telling av CD4- og CD8-lymfocytter, etterfulgt av bestemmelse av CD4:CD8-forholdet.
Hver av laboratoriemetodene for å diagnostisere HIV-infeksjon er preget av en viss sensitivitet (% av korrekt identifiserte tester blant åpenbart (+) prøver) og spesifisitet (% av korrekt identifiserte tester blant åpenbart negative prøver).HIV-testresultater tolkes som negative, positive eller tvetydige.
Ris. 1. På bildet til venstre infiserer HIV en immuncelle (angitt med gult). På bildet til høyre er en lymfocytt infisert med HIV. Langstrakte strukturer på celleoverflaten er forårsaket av proteinoverproduksjon.
Ris. 2. Bildet viser prosessen med frigjøring (spirer) av virioner fra en infisert celle.
Enhver innbygger i landet vårt kan ta en blodprøve for HIV anonymt og gratis. Men det er kategorier av mennesker som er pålagt å bli testet for HIV. Disse inkluderer:
alle givere av blod og dets komponenter, samt vev og andre biologiske væsker;
personer som har gjennomgått en transfusjon eller transplantasjon (utført i løpet av de første 3 månedene etter prosedyren);
gravide kvinner;
personer skadet som følge av ulykken;
personer med kliniske indikasjoner - feber, diaré, vedvarende hoste og utvidelse av mer enn 2 grupper av lymfeknuter, som varer mer enn 1 måned, uforklarlig vekttap, AIDS-assosierte og opportunistiske infeksjonssykdommer, somatisk og onkopatologi;
utenlandske statsborgere;
personer i faresonen (narkomane og de som lider av seksuelt overførbare sykdommer).
Alle som har vært utsatt for HIV bør testes for HIV.
Ris. 3. Blodprøve for hiv i vårt land kan tas anonymt og gratis.
Hvor kan man donere blod for HIV
En HIV-test kan tas gratis i helseinstitusjoner som opererer på budsjettbasis hvis du har pass og helseforsikring. Leger er pålagt å opprettholde medisinsk konfidensialitet.Du kan testes gratis og anonymt ved AIDS-forebyggings- og kontrollsentrene og få medisinsk rådgivning der før og etter undersøkelsen. HIV-testing utføres på betalt basis i kommersielle medisinske institusjoner. Enhver person som er midlertidig bosatt i dette territoriet kan ta en HIV-test.
Laboratoriet skal ta en blodprøve for HIV ved hjelp av enzymimmunoanalysemetoden (ELISA).
Anonym HIV-test
I offentlige helseinstitusjoner (klinikker og sykehus) kan du ikke anonymt ta blodprøve for hiv. Informasjon om resultatene av studien vil være kjent for en snever krets av leger som er pliktige til å opprettholde medisinsk taushetsplikt.
Anonyme testrom finnes ved AIDS-sentrene, hvor hver test er tildelt et nummer.
Ris. 4. Reagensglass med blod sendes til serologisk testing.
Tvunget HIV-test
Det er fire befolkningsgrupper der HIV-testing er obligatorisk, men ikke tvunget:
Donorer av blod og annet biologisk materiale.
Ved søknad om arbeid i institusjoner hvor arbeidstaker kan ha kontakt med åpenbart infisert materiale og pasienter.
Utenlandske statsborgere ved mottak av visum for opphold (mer enn 3 måneder) på den russiske føderasjonens territorium.
Hvis det er kliniske indikasjoner for personer i fengsel.
Tvunget testing av befolkningen for HIV er fåfengt og i strid med respekten for menneskerettighetene. Tvunget testing av befolkningen i den russiske føderasjonen er ulovlig.
Ris. 5. Hiv-testing av straffedømte gjennomføres i henhold til kliniske indikasjoner.
Hvor mye koster en HIV-test?
I offentlige institusjoner er HIV-testing gratis, i private klinikker betales det:
Kostnaden for ELISA varierer fra 400 til 800 rubler. Svaret vil være klart etter en dag. Det er en hastediagnose, når svar kan mottas innen 2 timer.
Kostnaden for en HIV-test ved hjelp av immunoblot-metoden varierer fra 3 til 5 tusen rubler. Resultatet vil være klart om 4 - 7 dager.
Kostnaden for en HIV-test ved bruk av PCR-metoden er 10 - 12 tusen rubler. Resultatet vil være klart om 10 - 14 dager.
Hvor lang tid tar det å teste for HIV?
I offentlige etater er fristen for å motta HIV-testresultater:
Ved bruk av 3. generasjons ELISA gir resultatene de mest pålitelige resultatene 12 uker fra øyeblikket med mistanke om infeksjon.
Ved bruk av 4. generasjons ELISA – 6 uker.
Ved bruk av PCR - 4 uker.
Hvordan bli testet for HIV
Det er nødvendig å ta en HIV-test tidligst 3 til 4 uker etter den mistenkte infeksjonen.
Testing utføres tidligst 8 timer etter spising.
Den eneste væsken du kan drikke er rent vann.
For analyse tas 3 - 5 ml blod fra ulnarvenen, som det brukes en vanlig sprøyte eller nål med pumpe for.
Før transport til laboratoriet kan blodserum oppbevares i kjøleskapet i opptil 7 dager. Uten kjøling ikke mer enn 30 minutter etter innsamling.
Transport av rør med blodserum utføres i spesielle termiske beholdere ved en temperatur på +4 - +8OMED.
Ris. 6. For å teste for HIV, er det nødvendig å samle 3 - 5 ml blod tatt fra antecubitalvenen - som en vanlig sprøyte (bilde til venstre) eller en nål med pumpe (bilde til høyre) brukes til.
Når blod tas fra en blodåre, er det umulig å bli smittet med det humane immunsviktviruset.
Falsk-positiv HIV-test og andre typer testresultater
HIV-testresultater kan tolkes som positive, negative eller tvetydige.
Tvilsomt testresultatfor HIV oppnås når det er antistoffer i blodserumet som kryssreagerer med proteiner fra humant immunsviktvirus. I dette tilfellet gjentas analysen, og under gjennomføringen vil mer spesifikke testsystemer bli brukt. Hvis et tvilsomt resultat vedvarer, bør testing utføres hver 1. til 3. måned i seks måneder.
Positivt resultat på HIV-testen (seropositiv) indikerer tilstedeværelsen av antistoffer mot viruset i testpersonens blod. I dette tilfellet gjentas den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA) og, hvis et nytt positivt resultat oppnås, bekreftes det med en immunoblotting-test med samme blodprøve.
Negativt resultat på HIV-testen (seronegativ) indikerer fravær av HIV-infeksjon, eller infeksjonen skjedde ganske nylig og antistoffer er ennå ikke utviklet i blodet til forsøkspersonen («vindus»-perioden). I dette tilfellet bør undersøkelsen gjentas etter 3 og 6 måneder.
Falsk positiv HIV-testresultat er registrert når årsaken ikke var det humane immunsviktviruset, men graviditet, en autoimmun sykdom, allergier, enhver annen infeksjonssykdom, en nylig vaksinasjon, onkopatologi, organtransplantasjon og til og med vanlig mat (frø, krydret, fet og sur mat som inntas hver dag før, og til og med høyt kullsyreholdig mineralvann). Et stort antall falske positive resultater oppnås ved testing hjemme.
Falsk negativ HIV-testresultat indikerer at viruset er tilstede i pasientens blod, men at antistoffer ennå ikke er utviklet.Ved gjennomføring av en PCR-analyse kan et falsk negativt resultat oppnås hos HIV-infiserte pasienter i løpet av perioden med spesifikk behandling, når konsentrasjonen av virus i blodet er så lav at det fører til svikt i testsystemet. I de fleste tilfeller oppnås et falsk negativt resultat på grunn av en teknisk feil eller defekt i testsystemet, noe som er ekstremt sjeldent på grunn av streng kvalitetskontroll på alle nivåer.
En HIV-test bør utsettes i minst to uker etter en smittsom sykdom eller vaksinasjon.
Testsystemer som bestemmer tilstedeværelsen av antistoffer mot HIV
Ved å teste for antistoffer mot humant immunsviktvirus, vurderes kroppens respons på infeksjon. For dette formålet brukes en enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) for å påvise antistoffer mot virale proteiner og en bekreftende immunoblotting-analyse (Western blot), som bestemmer reaksjonen av antistoffer mot virale proteiner.
Antistoffer mot HIV
Humane immunsviktvirus har antigene egenskaper og, når de kommer inn i menneskekroppen, forårsaker det syntese av antistoffer - spesifikke immunglobuliner. Ved å bruke moderne testsystemer kan klassen av immunglobuliner (antistoffer) bestemmes i blodserumet og andre biologiske væsker til en HIV-pasient. IgM-klasse immunglobuliner vises før alle andre (en uke etter infeksjon). Veksten deres observeres i løpet av en måned og deretter vedvarer de i omtrent 30 dager. IgG-klasse immunglobuliner sirkulerer i blodet i flere år. Påvisningen deres er en indikator på tilstedeværelsen av HIV-infeksjon.
Antistoffer mot HIV vises innen 2–4 uker.etter infeksjon og så oppdages de i blodet gjennom hele sykdommen.
"Vindu"-periode for HIV
Antistoffer produseres ikke umiddelbart i kroppen til en infisert person. Til å begynne med viser ikke HIV-infeksjon seg på noen måte. Antistoffer vises i blodet i gjennomsnitt 2 - 3 måneder fra infeksjonsøyeblikket (fra 2 uker til 6 måneder). Denne perioden kalles "vinduet", når tester for antistoffer fortsatt er negative, men virusene formerer seg intensivt, og pasienten selv blir farlig med tanke på å infisere kontaktpersoner. En infisert person kan identifiseres etter en kortere (1 - 2 uker) periode etter infeksjon, hvor polymerasekjedereaksjon (PCR) brukes. På grunn av de høye kostnadene blir denne typen studier imidlertid ikke brukt til screening.
Enzymimmunanalyse for diagnostisering av HIV
Hos 90 - 95 % av infiserte individer oppstår antistoffer i blodserumet 3 måneder etter infeksjon Hos en liten del av pasientene (5 - 9%) oppstår antistoffer i perioden fra 3 til 9 måneder og i 0,5 - 1 % -. på mer enn sene datoer. I det terminale stadiet av AIDS synker antallet antistoffer betydelig, og forsvinner i noen tilfeller helt.
Siden 1985 har denne teknikken blitt brukt i den russiske føderasjonen for masseforskning. Det er enkelt å implementere, viser ganske nøyaktige resultater og er billig sammenlignet med andre metoder. På grunn av muligheten for å oppnå falske positive resultater, blir alle positive resultater undersøkt to ganger, hvoretter pasientens blodserum undersøkes med en bekreftende test - en immunoblot. Dette bruker samme blodprøve. Hvis det er 2 positive resultater ved bruk av ELISA og immunoblot i en prøve, stilles en diagnose av HIV-infeksjon.
I den russiske føderasjonen brukes vanligvis 4. generasjons ELISA-er. Studien er utført for å få det totale spekteret av antistoffer mot HIV-proteiner (antigener) - p24 og gp160.
Testen ser både antistoffer som produseres av pasientens kropp og p24-antigener (virusproteiner). Vindusperioden for 4. generasjons tester er kortere. Innen en måned kan du få pålitelige resultater. Imidlertid, ifølge russiske helseeksperter, er termer på 6, 8 eller 12 uker mer pålitelige.
Ris. 8. Bildet viser enzymimmunoanalyseanalysatorer.
Ris. 9. Bildet viser en automatisk enzymimmunanalyseanalysator.
For den første undersøkelsen av grupper av mennesker for å oppdage HIV-infeksjon, brukes kun ELISA-metoden.
Immunblotting metode
Immunoblotting-metoden er mer nøyaktig enn ELISA ifølge de fleste eksperter, det er referansemetoden. Med dens hjelp oppdages antistoffer mot HIV-proteiner i blodserum. Teknikken brukes til å bekrefte resultatene oppnådd under ELISA. Har høy spesifisitet. Falske positive resultater er sjeldne. Påliteligheten til de oppnådde resultatene når 99%. Immunblotting er en kostbar teknikk og krever høy spesialisering av spesialisten som utfører studien. Tvilsomme resultater kan oppnås.
Metoden er basert på separasjon av HIV-antigener (proteiner) ved hjelp av elektroforese basert på molekylvekt. Antistoffer mot kapsidproteiner er de første som oppdages under infeksjon.Gag" (p24 og p17) og forløperen p55. De etterfølges av antistoffer mot superkapsidproteiner.Env"(glykoproteiner gр 160, gр120, gр41 og proteiner p88) og ikke-strukturelle proteiner "Pol" (р31, р51 og р66). I noen tilfeller kan antistoffer mot gener påvises.vpu», «vpr», «vif», «krimskrams», «nef», «rev», «krimskrams».
Blodserumet til pasienter med HIV-1 og HIV-2 inneholder antistoffer mot alle virale proteiner, men for å bekrefte diagnosen er det kun antistoffer mot proteinene p24, gp41, gp120 og gp160 som påvises i HIV-1, og antistoffer mot proteinene gp105, gp140 og gp140 i HIV-2 gr36.
Hvis det er 2 positive resultater ved bruk av ELISA og immunoblot i en prøve, stilles en diagnose av HIV-infeksjon.
Ris. 10. Apparat for å utføre immunoblotforskning.
Ris. 11. Diagnosen HIV-infeksjon stilles i nærvær av 2 positive resultater ved bruk av ELISA og immunoblot i én prøve.
En av de immunologiske testene som brukes for HIV-infeksjon er metoden for å telle CD4- og CD8-lymfocytter i blodet.
CD4-lymfocytter (T-hjelpeceller) er påvirket av immunsviktvirus. Den gradvise utarmingen av deres befolkning fører til en reduksjon i immunitet og pasientens kropp slutter å motstå infeksjon. CD4-lymfocytttellinger utføres ved flowcytometri ved bruk av automatiserte analysatorer eller manuelt ved bruk av optisk eller fluorescensmikroskopi. Antallet CD4-lymfocytter bestemmer tidspunktet for oppstart av spesifikk behandling (antiretroviral terapi) og forebygging av opportunistiske infeksjoner, og evaluerer effektiviteten av behandlingen.
Når antallet CD4-lymfocytter i blodserumet er 500 eller mindre per 1 ml, indikerer det utvikling av immunsvikt.
Når antallet CD4-lymfocytter synker til 200 per 1 ml (normen er fra 600 til 1900 celler per 1 ml), utvikles ervervet immunsviktsyndrom (AIDS).
Når nivået av CD4-lymfocytter synker til 50 eller under per 1 μl, går AIDS inn i terminalstadiet.
Andelen CD4-lymfocytter blant alle lymfocytter er normalt ca. 40 %.En nedgang i frekvensen til 20% indikerer utviklingen av AIDS.
CD8-lymfocytter (T-killers, på engelsk. morder - morder) ødelegge HIV-virus ved cytolyse. Deres spredning (økning i antall) avhenger av aktiviteten til T-hjelpeceller. Ved HIV-infeksjon synker antallet CD4- og CD8-lymfocytter, men nivået av CD4-lymfocytter synker mest av alt. Normalt CD4/CD8-forhold er 1,5 - 2,5. Med en reduksjon i antall CD4-lymfocytter observeres en reduksjon i indeksen.
Dens verdi mindre enn 1 indikerer en utviklet immunsvikt med et forhold på 0,6 - 0,8, AIDS utvikler seg.
Etter å ha mottatt positive testresultater, må en person registrere seg hos det offentlige byrået Senter for forebygging og kontroll av AIDS, hvor tilstanden hans vil bli overvåket og tilstrekkelig spesifikk behandling vil bli foreskrevet.
Ris. 12. På bildet brukes automatiske strømningsanalysatorer for å telle CD4-lymfocytter i blodet til personen som studeres.
De siste årene har en molekylærgenetisk metode for å diagnostisere HIV-infeksjon – polymerasekjedereaksjon (PCR) – blitt stadig mer utbredt. Med dens hjelp bestemmes det genetiske materialet til patogenet - RNA - allerede 1 - 2 uker etter den påståtte infeksjonen, og testens høye følsomhet lar deg oppdage RNA-virus selv om det bare er noen få av dem i testen materiale. Denne teknikken er kostbar og brukes derfor for øyeblikket ikke til screening. I tillegg er et betydelig problem med studien muligheten for å oppnå falske positive resultater.
Essensen av PCR-teknikken for HIV
Essensen av denne teknikken er å oppnå flere kopier av virus-RNA (nukleinsyre), som deretter identifiseres både ved deres karakteristiske struktur og ved hjelp av merkede enzymer eller isotoper.
Muligheter for PCR for HIV-infeksjon
Ved å bruke PCR kan du løse tvilsomme resultater oppnådd ved bruk av immunoblotting-teknikken, diagnostisere HIV-infeksjon i de tidlige stadiene (så tidlig som 1-2 uker etter den mistenkte infeksjonen), overvåke effektiviteten av antiretroviral terapi og bestemme sykdomsstadiet .
Det anbefales å ta PCR-tester 4 uker fra datoen for forventet risiko.
Ris. 13. På bildet til venstre er en normal T-lymfocytt, til høyre er en T-lymfocytt infisert med HIV. Flere bobler er synlige, mellom hvilke nydannede virus (små avrundede formasjoner) har dukket opp. Ved bruk av PCR oppdages HIV-infeksjon innen 1 - 2 uker etter mistenkt infeksjon.
Fordeler med PCR-teknikken for HIV
Ved hjelp av PCR er det mulig å oppdage selve viruset og dets mengde.
Mulighet for bruk hos barn under ett og et halvt år.
Vurder effektiviteten av behandlingen.
Bestem alvorlighetsgraden og prognosen til sykdommen.
Ulemper med PCR-teknologi for HIV
Høye forskningskostnader.
Tilgjengelighet av spesialiserte laboratorier.
Varighet for å oppnå resultater (opptil 4 uker).
Hvem trenger PCR?
Mottak av resultatet innen 7-10 dager for personer ved mistanke om infeksjon, når et resultat oppnådd på kort tid er ønsket.
For å bestemme startdatoen og evaluere effektiviteten av behandlingen.
PCR utføres på infiserte gravide 4 uker før fødselen for å avgjøre om man skal bruke keisersnitt.
Nyfødte fra smittede mødre. Et positivt resultat oppnådd to ganger indikerer at barnet er smittet.
Under normale forhold brukes ikke PCR til screening og diagnostisering av HIV-infeksjon.
RNA PCR og DNA PCR. Hva er forskjellen
RNA PCR beviser tilstedeværelsen av immunsviktviruset i blodet og volumet av påvist RNA. Denne studien brukes i diagnostiserte individer for å evaluere effektiviteten av terapi.
Ved hjelp av DNA PCR bestemmes tilstedeværelsen av viruset i mononukleære celler hos barn når antistoffer mot det humane immunsviktviruset hos mor forhindrer bruk av ELISA-metoden.
Viral belastning
Virusbelastningen bestemmes ved å telle antall RNA-kopier i 1 ml blodplasma, noe som gjør det mulig å bestemme sykdomsstadiet, analysere den spesifikke behandlingen som gis og bestemme alvorlighetsgraden og prognosen til sykdommen. Jo høyere virusmengden er, desto færre CD4-lymfocytter registreres i blodplasmaet.
Tolkning av resultater:
RNA blir enten ikke oppdaget, eller antallet RNA-kopier er mindre enn 20 per ml. plasma.
RNA ble påvist ved grensen for følsomhet - mindre enn 20 kopier/ml.
RNA fra 20 til 106 kopier i 1 ml blodplasma indikerer påliteligheten til resultatet.
Mer enn 10 RNA-kopier6ml er den øvre grensen for det lineære området.
En økning i virusmengden hos en pasient med HIV-infeksjon med tre eller flere ganger er et klinisk signifikant resultat.
Viral belastningsovervåking utføres hver 3. måned hos pasienter som ennå ikke mottar behandling. Hvis antiretroviral behandling startes, utføres kontroll etter 2–8 uker.
Ris. 14. PCR har blitt stadig mer populært de siste årene.
Ris. 15. Forsterkere for PCR.
En HIV-test må utføres i de tidlige stadiene av infeksjon og periodisk under sykdommen, noe som vil sikre rettidig administrering av antiretroviral terapi for å forhindre utvikling av farlige smittsomme og onkologiske prosesser.
Virus, dets RNA, DNA, antigener og antistoffer kan påvises ikke bare i blodserum, men også i sædceller, spytt, vaginalt innhold osv. HIV dyrkes i en kultur av lymfocyttceller. Teknikken er svært sensitiv og spesifikk (opptil 100%), men de høye kostnadene ved studien tillater ikke bruk i det daglige laboratoriearbeidet.
Som et resultat av skade på de hematopoietiske organene av humane immunsviktvirus, observeres hemming av hematopoiesis, som manifesteres av en reduksjon i antall lymfocytter (lymfopeni), nøytrofiler (nøytropeni), blodplater (trombopeni) og anemi. I tillegg er ødeleggelsen av cellepopulasjoner påvirket av autoimmune prosesser som utvikles hos HIV-infiserte pasienter. IgG-immunoglobuliner dominerer i blodserumet til pasienter.
Ris. 16. Tar blod fra en vene og finger for testing.
I dag kan hvem som helst ta en HIV-test anonymt og gratis i løpet av få minutter, og moderne utstyr og opplært personell gjør at du får de mest nøyaktige resultatene.
