Testing for syfilis er en av de vanligste laboratorietester. Tester for syfilis er mye brukt under forebyggende undersøkelser. Ved hjelp av mikroskopi identifiseres årsaken til syfilis - Treponema pallidum.Ved hjelp av serologiske reaksjoner bekreftes diagnosen syfilis, diagnosen latent syfilis er etablert, effektiviteten av behandlingen overvåkes, og kuren av pasienter bestemmes.
Diagnosen syfilis er etablert på grunnlag av kliniske data, påvisning av syfilispatogener i materialprøver og bekreftelse av diagnosen ved serologiske forskningsmetoder. Manifestasjonene av syfilis er mange og varierte, og derfor diagnostiseres sykdommen av leger av forskjellige spesialiteter. Differensialdiagnose av primær syfilis utføres med en rekke sykdommer.
Ris. 1. På bildet er den primære manifestasjonen av syfilis sjankre.
Antistoffer mot Treponema pallidum og serologisk diagnose
Ved infeksjon med syfilis dannes antistoffer i pasientens kropp. Serologisk diagnostikk hjelper legen med å studere dynamikken til antistoffdannelse i kroppen til en pasient med syfilis i de første stadiene av sykdommen, i løpet av behandlingsperioden og etter dens fullføring, for å løse problemet med tilbakefall av sykdommen hos pasienten eller re-infeksjon (reinfeksjon), for å diagnostisere syfilis i massemedisinske tilstander.
Antistoffer mot Treponema pallidum IgM
IgM-antistoffer er de første som produseres etter infeksjon. De begynner å bli oppdaget ved hjelp av serologiske reaksjoner fra den andre uken etter infeksjon. Ved 6–9 ukers sykdom blir antallet maksimalt. Dersom pasienten ikke blir behandlet, forsvinner antistoffene etter seks måneder. IgM-antistoffer forsvinner etter 1 - 2 måneder. etter behandling av tidlig syfilis, etter 3 - 6 måneder. - etter behandling av sen syfilis. Hvis veksten deres registreres, er dette et tegn på tilbakefall av syfilis eller indikerer re-infeksjon. IgM-molekyler er store og passerer ikke gjennom morkaken til fosteret.
Antistoffer mot Treponema pallidum IgG
IgG-immunoglobulinantistoffer vises ved slutten av den første måneden (4. uke) fra infeksjonsøyeblikket. Titeren deres er høyere enn IgM-titeren. IgG vedvarer ganske lenge etter behandling.
Uspesifikke antistoffer
Det er mange serologiske reaksjoner. Dette forklares av den antigene multiplisiteten til Treponema pallidum. I blodserumet til en syk person på forskjellige stadier av syfilis, i tillegg til spesifikke, dannes visse uspesifikke antistoffer - agglutininer, komplementfiksering, immobilisiner, antistoffer som forårsaker immunfluorescens, presipitiner, etc. Serologiske reaksjoner for å oppdage uspesifikke antistoffer har relativ spesifisitet, derfor, for å unngå diagnostiske feil, bør du bruke ikke bare én, men et kompleks av serologiske reaksjoner (SRR).
Falsk positive tester for syfilis
Et særtrekk ved ikke-treponemale tester er mottak av falske positive reaksjoner. Antistoffer-reaginer, som produseres i menneskelig blod mot kardiolipinantigenet, registreres ikke bare i syfilis, men også i andre sykdommer: kollagenose, hepatitt, nyresykdommer, tyreotoksikose, kreft, infeksjonssykdommer (spedalskhet, tuberkulose, brucellose, malaria, tyfus, skarlagensfeber), under graviditet og menstruasjonssykluser, når du tar fet mat og alkohol. Det har blitt lagt merke til at antallet falske positive reaksjoner øker med alderen.
Laboratoriediagnose av syfilis ved hjelp av serologiske tester
Serologiske tester for syfilis er delt inn i treponemal og nontreponemal.
1. Ikke-treponemale tester
Antigenet som brukes i denne gruppen av tester er kardiolipin-antigen. Lipidantigener av syfilispatogener er de mest tallrike. De utgjør 1/3 av cellens tørre masse. Ved hjelp av ikke-treponemale tester påvises reagin-antistoffer som produseres mot kardiolipinantigenet. Denne gruppen inkluderer komplementfikseringstesten (FFR), mikroutfellingstesten (MPR), rask plasmareagintest (RPR), etc. Ved bruk av ikke-treponemale tester gjennomføres primær screening for syfilis (undersøkelse av befolkningsgrupper), og muligheten å oppnå resultater i en kvantitativ form gjør at disse testene kan brukes til å overvåke effektiviteten av behandlingen. Positive resultater fra ikke-treponemale tester må bekreftes ved treponemal-tester. Et særtrekk ved ikke-treponemale tester er mottak av falske positive reaksjoner.
2. Treponemal tester
Treponemal-tester bruker antigener av treponemal opprinnelse isolert fra en kultur av Treponema pallidum. Med deres hjelp bekreftes positive resultater av ikke-treponemal-tester. Gruppen inkluderer: RSKtrep - komplementfikseringsreaksjon, RIF - immunfluorescensreaksjon og dens modifikasjoner, RIT, RIBT - immobiliseringsreaksjon av Treponema pallidum, RPHA - passiv hemagglutinasjonsreaksjon, ELISA - enzymbundet immunosorbentanalyse.
3. Tester for syfilis ved bruk av rekombinante antigener
Antigener for denne gruppen av tester oppnås ved genteknologi og brukes i reaksjoner - RPGA og ELISA, i immunoblotting (IB) analyser og immunokromatografisk analyse.
Ris. 3. Et sett med serologiske tester brukes til å diagnostisere syfilis.
Diagnose av syfilis ved bruk av ikke-treponemal tester
For å oppdage syfilis brukes ikke-treponemal-tester eller et kompleks av serologiske reaksjoner (SSR). Serologisk diagnose brukes fra den 5. uken fra infeksjonsøyeblikket eller fra 2-3 uker etter utseendet av sjankre. Antistoffer påvises hos nesten alle pasienter med fersk primær, sekundær og residiverende syfilis. Serologiske reaksjoner er positive hos 70 – 80 % av pasientene med tertiær aktiv syfilis, i 50 – 60 % av tilfellene hos pasienter med tertiær latent syfilis.
Serologiske tester ved bruk av ikke-treponemale tester kan gi falskt positive resultater.
Komplementfikseringsreaksjon (RSK-kort, KSK med KA, Wasserman-reaksjon)
Wasserman-reaksjonen (RW, РВ), oppfunnet av A. Wasserman for mer enn 100 år siden, har i dag gjennomgått mange endringer, men som en hyllest til tradisjonen har den beholdt navnet til i dag. Komplementfikseringsreaksjonen ved bruk av kardiolipinantigen er ikke bare ment å oppdage antistoffer, men utføres også kvantitativt - med forskjellige serumfortynninger, noe som gjør at den kan brukes til å overvåke effektiviteten av behandlingen. Lav sensitivitet og spesifisitet, å oppnå falske positive resultater er de negative aspektene ved denne typen studier.
Essensen av Wasserman-reaksjonen er som følger: antigenene som brukes til å iscenesette Wasserman-reaksjonen, i tilfelle av tilstedeværelsen av antistoffer mot årsakene til syfilis i menneskeblodet, binder seg til dem gjennom et kompliment og utfelles. Intensiteten av reaksjonen er indikert med et tegn (+).Reaksjonen kan være negativ (-) - ingen sediment, tvilsom (liten sediment eller +), svakt positiv (++), positiv (+++) og sterkt positiv (++++).
Den modifiserte Wasserman-reaksjonen, Kolmer-reaksjonen, er mer følsom. Med dens hjelp påvises antistoffer i sera hvor Wasserman-reaksjonen ga et negativt resultat.
Ved skarpe positive reaksjoner utføres en kvantitativ bestemmelse av reaginer, for hvilke serum brukes i fortynninger fra 1:10 til 1:320, noe som tillater bruk av denne typen studier for å overvåke effektiviteten av behandlingen. For eksempel indikerer en reduksjon i antistofftiter og deres påfølgende seronegativitet (oppnå negative resultater) en vellykket kur av sykdommen.
Ris. 5. Blodprøve for syfilis - Wasserman-reaksjon.
Mikroutfellingsreaksjon (MPR)
Nedbørsmikroreaksjon brukes til masseundersøkelser av visse befolkningsgrupper, diagnostisering av syfilis og overvåking av behandlingens effektivitet. For å utføre denne typen forskning kreves det en liten mengde testmateriale. Mikroreaksjonen av utfelling er basert på den immunologiske antigen-antistoff-reaksjonen. Hvis antistoffer er tilstede i blodserumet til individet, utfelles antigen-antistoffkomplekset og danner flak. Reaksjonen utføres i brønnene til en spesiell glassplate. Det vurderes ved intensiteten av bunnfallet og størrelsen på flakene i (+) som Wasserman-reaksjonen. Det brukes ikke ved undersøkelse av gravide kvinner, donorer og for å overvåke behandlingens effektivitet. VDRL og RPR er typer mikroreaksjoner.
Ris. 6. Type utfellingsreaksjon i en dråpe på glass.
Ris. 7. Blodprøve for syfilis - mikroutfellingsreaksjon.
Ris. 8.Sett for rask bestemmelse av plasmareaginer (RPR-test for syfilis).
Alle positive tester oppnådd under uspesifikke serologiske reaksjoner krever bekreftelse av spesifikke reaksjoner - treponemal-tester.
Diagnose av syfilis ved hjelp av treponemal-tester
Når du utfører treponemal-tester, brukes antigener av treponemal opprinnelse. Deres negative side er umuligheten av å bruke dem til å overvåke effektiviteten av behandlingen, oppnå positive resultater i spiroketose og ikke-veneriske treponematoser, og oppnå falske positive resultater i onkologiske sykdommer, spedalskhet og noen endokrine patologier. Tester som RPGA, ELISA og RIF forblir positive i mange år etter at syfilis er kurert, og i noen tilfeller livet ut.
RIBT og RIF er de mest spesifikke av alle serologiske reaksjoner som brukes til å diagnostisere syfilis. De gjør det mulig å skille mellom falske positive reaksjoner og å identifisere sene former for syfilis som oppstår med negative reaksjoner. Ved hjelp av RIBT gjenkjennes falske positive reaksjoner hos gravide kvinner når det er nødvendig å løse problemet med infeksjon av barnet.
Essensen av reaksjonen er at antistoffene i pasientens blodserum immobiliserer Treponema pallidum. En reaksjon anses som negativ når opptil 20 % av patogenene er immobilisert, svakt positive - 21 - 50 %, positive - 50 - 100%. RIBT gir noen ganger falske positive resultater.Testen er kompleks og arbeidskrevende, men den er uunnværlig i differensialdiagnosen av latente former av sykdommen og falske positive resultater av serologiske reaksjoner, inkludert hos gravide kvinner. RIBT gir 100 % positivt resultat for sekundær, tidlig og sen syfilis, i 94 – 100 % av tilfellene – for andre former for syfilis.
Immunfluorescensreaksjon (RIF)
Essensen av reaksjonen er at treponema pallidum (antigener), kombinert med antistoffer merket med fluorokromer, avgir en gulgrønn glød i et fluorescerende mikroskop. Resultatet vurderes med et tegn (+). Ved å bruke RIF påvises klasse A-immunoglobuliner. Immunfluorescensreaksjonen blir positiv tidligere enn Wasserman-reaksjonen. Det er alltid positivt ved sekundær og latent syfilis, i 95 - 100 % av tilfellene er det positivt ved tertiær og medfødt syfilis. Teknikken for å utføre denne typen forskning er enklere enn RIBT, men det er umulig å erstatte RIF med RIBT, siden denne reaksjonen er dårligere enn RIBT i spesifisitet. RIF-10 (modifikasjon av RIF) er mer følsom, RIF-200 og RIF-abs er mer spesifikke.
Ris. 9. Blodprøve for syfilis - immunfluorescensreaksjon (RIF).
Immunadhesjonsreaksjon av Treponema pallidum (IAT)
Essensen av reaksjonen er at treponema pallidum, sensibilisert av pasientens serum, i nærvær av komplement, fester seg til overflaten av røde blodlegemer. De resulterende kompleksene utfelles under sentrifugering. Sensitiviteten til denne testen og spesifisiteten er nær RIF og RIBT.
Enzymimmunanalyse for syfilis (ELISA)
Ved hjelp av ELISA bestemmes immunglobuliner av klasse M og G. IgM-ELISA-teknikken kan brukes som en screening og bekreftende test.Sensitiviteten til ELISA og dens spesifisitet er lik RIF. For syfilis gir ELISA positive resultater fra den tredje infeksjonsmåneden og forblir positiv i ganske lang tid (noen ganger gjennom hele livet).
RPHA er basert på evnen til røde blodceller som treponema pallidum-antigener er adsorbert på, til å holde seg sammen (hemagglutinasjon) i nærvær av pasientens serum. RPGA brukes til å diagnostisere alle former for syfilis, inkludert latent. Når du bruker et antigen av høy kvalitet, overgår denne typen serologisk reaksjon alle andre tester i spesifisitet og sensitivitet.
Ris. 11. RPGA brukes til å diagnostisere alle former for syfilis.
Ris. 12. Test for syfilis - passiv (indirekte) hemagglutinasjonsreaksjon (skjema).
Ris. 13. Utseendet til en omvendt paraply som opptar hele bunnen av reagensrøret indikerer en positiv reaksjon. I tilfellet når røde blodceller legger seg i en kolonne ("knapp") i midten av bunnen av reagensrøret, er en negativ reaksjon indikert.
Sammen med serologisk diagnose spiller metoden for å oppdage Treponema pallidum (mikrobiologisk diagnose) en viktig rolle, spesielt i perioden med seronegativ syfilis, når det fortsatt ikke er antistoffer i blodet, men det er allerede de første manifestasjonene av frisk primær syfilis ( chancroid).
Det biologiske materialet for studien er utslipp fra overflaten av harde sår (chancres), innholdet av pustulære syfilider, gråtende og erosive papler, punkteringer av infiserte lymfeknuter, cerebrospinalvæske og fostervann for PCR - blod.
Den beste metoden for å oppdage syfilispatogener er å undersøke biologisk materiale i et mørkfeltsmikroskop. Denne teknikken lar deg se treponema pallidum i en levende tilstand, studere dens strukturelle egenskaper og bevegelse, og skille patogene patogener fra saprofytter.
Ris. 15. Analyse for syfilis - mørkfeltsmikroskopi.
Ris. 16. Når du studerer tørre utstryk, brukes Romanovsky-Giemsa-farging. Blek treponema blir rosa, alle andre typer spirochetes blir lilla.
Påvisning av Treponema pallidum ved mørkefeltsmikroskopi er et absolutt kriterium for den endelige diagnosen syfilis.
Ris. 17. For å identifisere bakterier brukes en immunfluorescensreaksjon (RIF) - en treponemal test. Et spesifikt antigen-antistoffkompleks, når det kombineres med et spesifikt serum merket med en fluorokrom, i lys av et fluorescerende mikroskop gir bakteriene en grønnaktig glød.
Ris. 18. Årsakene til syfilis er tydelig synlige i utstryk tilberedt med Levaditi-metoden (sølvimpregnering). Blek treponema er mørk i fargen mot bakgrunnen av den gule fargen på cellene i infisert vev.
Ris. 19. Årsaken til syfilis ved multippel forstørrelse.
Ris. 20. Bildet viser en koloni av Treponema pallidum. Det er vanskelig å få tak i en bakteriekultur. De vokser praktisk talt ikke på kunstige næringsmedier. På medier som inneholder heste- og kaninserum, vises kolonier på dag 3–9.
I dag er polymerasekjedereaksjonsteknikken effektiv og lovende.PCR for syfilis lar deg få resultater innen få timer, og minst flere patogener kan være tilstede i materialet som samles inn for diagnostisering.
Ris. 21. PCR for syfilis kan påvise DNA eller dets fragmenter fra Treponema pallidum.
Sensitiviteten til denne forskningsmetoden avhenger av tilstedeværelsen av Treponema pallidum i det biologiske materialet og når 98,6 %. Spesifisiteten til denne testen avhenger i stor grad av riktig valg av mål for amplifikasjon under diagnose og når 100 %.
På samme tid, på grunn av de utilstrekkelig studerte komparative egenskapene til følsomheten og spesifisiteten til direkte metoder for diagnostisering av syfilis og PCR, er denne undersøkelsesmetoden i Russland for diagnostisering av sykdommen ennå ikke godkjent.
PCR for syfilis er kun tillatt å utføre i noen tilfeller, som en tilleggsmetode for diagnostisering av medfødt syfilis, neurosyfilis, hvis det er vanskelig å diagnostisere syfilis ved hjelp av serologiske metoder hos HIV-pasienter.
Ris. 22. Påvisning av Treponema pallidum DNA ved bruk av PCR indikerer enten tilstedeværelse av levedyktige bakterier eller rester av døde bakterier, men som inneholder individuelle seksjoner av kromosomalt DNA som er i stand til å danne ytterligere kopier.
