Viral hepatit C är ett allvarligt medicinskt och socialt problem. Omkring 180 miljoner människor i världen idag lider av denna sjukdom, 350 tusen dör varje år. Det långvariga latenta (asymtomatiska) sjukdomsförloppet leder till försenad diagnos. En analys för hepatit C utförs i syfte att diagnostisera sjukdomen, differentialdiagnos, och med dess hjälp bestäms en tidigare liden sjukdom "på fötterna".
Studien används på personer med symtom på hepatit C, förhöjda nivåer av leverenzymer, vid inhämtning av information om en tidigare sjukdom av ospecificerad etiologi, hos personer i riskzonen och screeningstudier.
Diagnos av hepatit C utförs i två steg:
Steg 1. Bestämning av närvaron av antikroppar mot viruset (anti-HCV) i blodserum.
Steg 2. Om anti-HCV finns, utförs ett test för närvaron av RNA (ribonukleinsyra) med PCR-metoden för hepatit C. Testet låter dig identifiera processens fas - "aktiv/inaktiv", och besluta om behov av behandling.Det är känt att cirka 30 % av de smittade blir av med infektionen på egen hand, eftersom de har ett starkt immunförsvar och inte behöver behandling. Med hjälp av PCR bestäms genotypen av viruset. Olika genotyper svarar olika på behandling.
Omfattningen av leverskadan bestäms med hjälp av en biopsi eller andra invasiva och icke-invasiva tester (till exempel fibrotest). Graden av leversteatos bestäms med hjälp av en steatotest. I samtliga fall bör diagnosen hepatit C baseras på data från en epidemiologisk utredning, den kliniska bilden av sjukdomen och data från ett biokemiskt blodprov.
Ris. 1. Allvarliga konsekvenser av viral leverskada - intensiv ascites.
Test för hepatit C: anti-HCV
Antikroppar mot virus (anti-HCV) är specifika markörer för infektion. I en sjuk persons kropp produceras specifika antikroppar mot de virala proteinerna (antigener) - immunglobuliner av IgM- och IgG-klasserna (anti-HCV IgM/IgG).
Om ett positivt resultat för antikroppar erhålls, utförs ett bekräftande test - bestämning av totala antikroppar mot virusets strukturella och icke-strukturella proteiner. Anti-HCV IgM produceras för de strukturella höljesproteinerna av virus El och E2, nukleokapsidproteinet C - cor (anti-HCV IgG) och de 7 icke-strukturella enzymproteinerna NS (anti-HCV NS IgG).
En enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) används för att detektera antikroppar mot hepatit C-virus. För att bekräfta (+) ELISA-resultat används bekräftande tester - RIBA (rekombinant immunoblotting), mindre ofta Inno-Lia (analys av syntetiska peptider).
Anti-HCV IgM-test
IgM-antikroppar dyker upp i blodserumet 4 till 6 veckor efter infektion och når snabbt ett maximum. I slutet av den akuta processen (efter 5 - 6 månader) sjunker deras koncentration.
Långtidsregistrering av förekomsten av anti-HCV IgM indikerar att hepatit C har blivit kronisk.
En ökning av IgM-nivåer under den kroniska perioden indikerar reaktivering av den infektiösa processen.
Nivån av IgM-immunoglobuliner gör det möjligt att bedöma behandlingens effektivitet.
Anti-HCV IgG-test
IgG-antikroppar uppträder i patientens blodserum 11–12 veckor efter infektion. Toppkoncentrationer registreras efter 5–6 månader. Vidare förblir antikroppar på en konstant nivå under hela sjukdomens varaktighet under den akuta perioden och återhämtningsperioden.
Testa för totala antikroppar mot hepatit C-virus
Totalt antal antikroppar mot viruset (anti-HCV totalt) används för att diagnostisera "nya" fall av sjukdomen. Totala antikroppar är antikroppar mot nukleokapsidproteinet C - cor (anti-HCV IgG) och 7 icke-strukturella enzymproteiner NS (anti-HCV NS IgG) - anti-HCV NS3, anti-HCV NS4 och anti-HCV NS5.
Totalt antal antikroppar mot hepatit C-viruset uppträder i blodserumet hos den infekterade personen 11 - 12 veckor efter infektionens början, når en topp efter 5 - 6 månader och förblir på en konstant nivå under hela sjukdomens varaktighet under den akuta perioden och i 5-9 år efter återhämtningsperioden.
Varje typ av antikropp har sitt eget diagnostiska värde:
Anti-HCV C (cor) är de viktigaste indikatorerna på kontakt med hepatit C-virus.
Anti HCV NS3 är en av de första som upptäcks i processen för serokonvertering (produktion av antikroppar som svar på närvaron av viruset), indikerar svårighetsgraden av den infektiösa processen och indikerar en hög virusmängd. Med deras hjälp upptäcks hepatit C hos patienter som inte misstänker att de har infektionen. Den långvariga närvaron av anti-HCV NS3 i blodserumet indikerar en hög risk för kronisk process.
Anti HCV NS4 indikerar att hepatit C har ett långt förlopp. Nivån av antikroppstitrar kan användas för att bedöma graden av leverskada.
Anti-HCV NS5 indikerar närvaron av viralt RNA. Deras upptäckt i den akuta perioden är ett förebud om processens kronicitet. Höga antikroppstitrar under behandlingen indikerar att patienten inte svarar på behandlingen.
Anti HCV NS4 och anti HCV Denna typ av antikropp uppträder sent i utvecklingen av hepatit. Deras minskning indikerar bildandet av remission av den smittsamma processen. Efter behandling minskar titrarna av NS4- och NS5-antikroppar under 8 till 10 år. Denna typ av antikroppar skyddar inte mot återinfektion.
Ris. 2. Makropreparation. Levercirros är en allvarlig komplikation av viral hepatit C.
Frånvaron av antikroppar mot hepatit C-viruset betecknas med termen "normal". Detta betyder dock inte alltid att en person inte har någon sjukdom. Således registreras frånvaron av antikroppar i blodet hos en infekterad person innan de uppträder i blodet - upp till 6 månader från infektionsögonblicket (i genomsnitt efter 12 veckor). Perioden av frånvaro av antikroppar i blodet hos en infekterad person kallas det "serologiska fönstret". 3:e generationens testsystem (ELISA-3) har hög specificitet (upp till 99,7%). Cirka 0,3 % beror på falskt positiva resultat.
Närvaron av anti-HCV indikerar aktuell infektion eller tidigare infektion.
Detektion av IgM-antikroppar och Core IgG-antikroppar, en ökning av Core IgG-antikroppstitrar och (+) PCR-resultat i närvaro av kliniska och laboratoriemässiga tecken på akut hepatit indikerar en akut period av sjukdomen.
Detektering av IgM-antikroppar, anti-HCV Core IgG, anti-HCV NS IgG och (+) PCR resulterar i närvaro av kliniska och laboratoriemässiga tecken på sjukdomen indikerar reaktivering av kronisk hepatit C.
Detekteringen av anti-HCV Core IgG och anti-HCV NS IgG i frånvaro av kliniska och laboratoriemässiga tecken på sjukdomen och ett negativt PCR-resultat indikerar att patienten har kronisk hepatit i latent fas.
Ris. 3. Makroskopiskt prov av levern. Primär levercancer är en allvarlig komplikation av hepatit C.
Polymeraskedjereaktion (PCR) är "guldstandarden" för att diagnostisera viral hepatit C. Testets höga känslighet gör det möjligt att detektera arvsmassan hos virus (RNA), även om det bara finns ett fåtal av dem i testet material. PCR kan detektera viralt RNA långt före uppkomsten av antikroppar i blodserumet, men inte tidigare än från den 5:e dagen från infektionsögonblicket. Vid sjukdom detekteras PCR av virala RNA inte bara i blodserum utan även i leverbiopsier.
Polymeraskedjereaktionen låter dig bestämma närvaron eller frånvaron av hepatit C-virus i blodet och besluta om behandlingens inledning. Det är känt att upp till 30% av patienterna blir av med infektionen på egen hand, eftersom de har ett starkt immunförsvar och inte behöver behandling.
Med hjälp av PCR bestäms genotypen av viruset. Olika genotyper svarar olika på behandling.
PCR används för att övervaka behandlingens effektivitet.
PCR används i frånvaro av antikroppar i blodet, men i närvaro av starka misstankar om sjukdomen (ökade nivåer av alkaliskt fosfatas, totalt bilirubin, 2-faldigt överskott av leverenzymer AST och ALT).
PCR-testning för hepatit C används för att övervaka intrauterin överföring av hepatitvirus.
Med hjälp av PCR-analys är det möjligt att bestämma inte bara närvaron av RNA-virus i blodet - en kvalitativ analys (upptäckt/ej upptäckt), utan också deras kvantitet - virusmängden (antalet enheter av viralt RNA i 1 ml av blod). Kvantitativ PCR används för att övervaka behandlingens effektivitet.
Metoderna som används för PCR har olika känslighet. I Ryska federationen, enligt 2014 års metodrekommendationer, rekommenderas det att använda metoder med en känslighet på 25 IE/ml eller mindre. Enligt 2015 års rekommendationer från European Association for the Study of the Lever, föreslås det att använda metoder för att bestämma viralt RNA med en känslighet på 15 IE/ml eller mindre.
Beroende på testsystemets känslighet får patienten ett eller annat testresultat:
Den lägsta känsligheten för COBAS AMPLICOR-analysatorn är 600 IE/ml (gamla generationens analysator).
Den minsta känsligheten för COBAS AMPLICOR HCV-TEST-analysatorn är 50 IE/ml, vilket är 100 kopior i 1 ml.
Den lägsta känsligheten för RealBest HCV RNA-analysatorn är 15 IE/ml, vilket är 38 kopior i 1 ml (en del av gruppen moderna testsystem). Specificiteten för dessa analysatorer är 100 %. Med deras hjälp detekteras RNA från hepatit C-virus av subtyperna 1a och 1b, 2a, 2b, 2c och 2i, 3, 4, 5a och 6.
Om det finns RNA-kopior under känslighetströskeln för denna analysator får patienten ett "ej upptäckt" svar.
Ris. 4. Exempel på PCR-analys (kvantitativt test). Bestämning av virusmängd.
Tolkning av PCR-testresultat för hepatit C
Frånvaron av viralt RNA indikerar frånvaro av infektion.
Frånvaron av RNA i analysen mot bakgrund av närvaron av antikroppar i blodet indikerar att sjukdomen försvinner under påverkan av behandling eller självläkning.
I vissa fall finns viruset i blodet, men vid undertröskelnivåer när dess koncentration inte detekteras av analysatorer. Sådana patienter förblir farliga när det gäller infektion.
Detektion av viralt RNA under 6 månader i följd hos patienter med akut hepatit C indikerar att sjukdomen har blivit kronisk.
En minskning av viralt RNA i tester under behandlingen indikerar effektiviteten av behandlingen och vice versa.
Ris. 5. Makropreparation. Fet hepatos är en av konsekvenserna av sjukdomen.
Biokemiska blodprover hjälper till att fastställa funktionstillståndet hos många mänskliga organ och system.
Blodprov för leverenzymer ALT och ASAT
Leverenzymer syntetiseras intracellulärt. De deltar i syntesen av aminosyror. Ett stort antal av dem finns i cellerna i levern, hjärtat, njurarna och skelettmusklerna. När organ skadas (kränkning av cellmembranens integritet) kommer enzymer in i blodet, där deras nivåer ökar. Ökade nivåer av enzymer registreras med skada (lys, förstörelse) av leverceller, hjärtinfarkt och andra sjukdomar. Ju högre nivå av transaminaser i blodserumet, desto fler celler förstördes. ALT dominerar i leverceller, AST dominerar i myokardceller. När leverceller förstörs ökar ALT-nivån 1,5 - 2 gånger. När myokardceller förstörs ökar AST-nivån 8-10 gånger.
Vid diagnos av kronisk viral hepatit är det nödvändigt att vara uppmärksam på AST/ALT-förhållandet (de Ritis-koefficient).Ett överskott av AST-nivåer över ALAT indikerar skador på leverceller.
AST-normen för män är upp till 41 enheter/l, för kvinnor - upp till 35 enheter/l, för barn över 12 år - upp till 45 enheter/l.
ALT-normen för män är upp till 45 enheter/l, för kvinnor - upp till 34 enheter/l, för barn 12 år och äldre - upp till 39 enheter/l.
Normalt (hos friska personer) varierar ASAT/ALT-förhållandet från 0,91 till 1,75.
Blodprov för bilirubin
Bilirubin är en nedbrytningsprodukt av hemoglobin. Bilirubin i blodet finns i form av indirekt (upp till 96%) och direkt (4%). Processen för nedbrytning av detta ämne sker huvudsakligen i levercellerna, varifrån det utsöndras från kroppen med galla. När leverceller förstörs ökar nivån av bilirubin i blodserumet. Normalt är halten totalt bilirubin mindre än 3,4 - 21,0 µmol/l. Vid en nivå av 30 - 35 µmol/l och däröver penetrerar bilirubin vävnaderna, vilket gör att huden och skleran blir gulsot.
