Nowoczesna diagnostyka krztuśca pozwala szybko postawić prawidłową diagnozę i zalecić odpowiednie leczenie, które może znacząco złagodzić stan pacjenta oraz podjąć w odpowiednim czasie działania zapobiegawcze, zapobiegając zakażeniu innych i osób kontaktowych. Analiza krztuśca przy użyciu metody badań bakteriologicznych jest główną metodą diagnozowania choroby.
Jednak doświadczenie wielu badań pokazuje, że dla dokładnej diagnostyki laboratoryjnej choroby konieczne jest zastosowanie kilku uzupełniających się technik. Najbardziej skuteczną kombinacją jest połączenie metody bakteriologicznej i reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR).
Ryż. 1. Dominującym objawem krztuśca u dzieci jest kurczowy, napadowy kaszel.
Kliniczne metody diagnozowania krztuśca
Rozpoznanie krztuśca we wczesnych stadiach rozwoju choroby nastręcza dużych trudności, co wiąże się z kilkoma czynnikami:
Choroba rozwija się powoli. Jej kulminacja następuje 2–3 tygodnie po wystąpieniu pierwszych objawów choroby.
W przypadku krztuśca nie występuje pierwotna toksyczność i wyraźna reakcja temperaturowa na początku choroby, tak charakterystyczna dla wielu chorób zakaźnych wieku dziecięcego. Dlatego diagnostyka laboratoryjna jest często opóźniona.
U zaszczepionych dzieci i dorosłych najczęściej notuje się nietypowe postacie choroby, w których zmienia się charakterystyka kaszlu (nie występują ataki kaszlu spazmatycznego ani nawroty).
Kryteria rozpoznawania krztuśca w okresie przeddrgawkowym (katarowym):
Kontakt z pacjentami, którzy mają długotrwały kaszel.
Powolny rozwój choroby. Normalna lub niska temperatura ciała. Stan pacjenta jest zadowalający.
Brak wyraźnych zjawisk katarowych.
Początkowo kaszel, a następnie uporczywy suchy kaszel, który następnie przechodzi w napadowy kaszel spazmatyczny, trwa 1–2 tygodnie.
Leczenie objawowe nie daje żadnych efektów.
Często nie słychać grzechotek w płucach. Wysoki poziom białych krwinek (leukocytoza) i limfocytów (limfocytoza) z prawidłowym współczynnikiem sedymentacji erytrocytów (ESR).
Wykrywanie patogenów krztuśca w uprawach (Bordetella pertussis).
Ryż. 2. Zdjęcie przedstawia różową bakterię Bordetella pertussis pod mikroskopem (barwienie metodą Grama). Pałeczki krztuśca są krótkie, w kształcie kokosa, końce są zaokrąglone, długość wynosi 0,5 - 2 mikrony, w rozmazach znajdują się osobno, rzadziej - parami.
Ryż. 3. Widok bakterii krztuśca w mikroskopie elektronowym.
Izolacja patogenów krztuśca ze śluzu nosowo-gardłowego jest klasyczną metodą laboratoryjnego potwierdzenia choroby. Szybkość siewu patogenów rzadko osiąga 80%. Średnio nie przekracza 10 - 30%. Przyczyny tego są następujące:
Powolny wzrost prątków krztuśca na pożywce.
Niska jakość pożywek.
Późniejsze badanie pacjenta.
Zanieczyszczenie materiału badawczego florą bakteryjną.
Błędy w pobraniu materiału do badań.
Stosowanie antybiotyków do czasu pobrania materiału do badania bakteriologicznego.
Materiałem do badania bakteriologicznego jest wymaz z przewodów nosowych (obu) oraz tylnej ściany nosogardzieli (nie z krtani!).
Do pobrania wymazu stosuje się wymaz z dakronu lub metodę plastra na kaszel.
Wysiew odbywa się natychmiast na pożywce lub podłożu transportowym. Materiał przechowuje się w nośniku transportowym nie dłużej niż jeden dzień. Wstępną odpowiedź uzyskujemy w ciągu 3–5 dni. Ostateczną odpowiedź uzyskujemy w ciągu 5 – 7 dni.
Badaniu poddawane są osoby podejrzane o zachorowanie oraz osoby, u których kaszel utrzymuje się dłużej niż 7, ale nie dłużej niż 30 dni.
Ryż. 4. Na zdjęciu kolonia Bordetella pertussis. Do hodowli wykorzystuje się podłoże Bordet-Gengou (zdjęcie po prawej) lub agar kazeinowo-węgielny (zdjęcie po lewej). Na tych podłożach tworzenie kolonii następuje po 3–4 dniach od wysiewu. Kolonie drobnoustrojów są błyszczące, szaro-kremowe, wyglądem przypominają kropelki rtęci i mają lepką konsystencję. Po usunięciu kolonii z pożywki pozostaje kremowy ślad.
Ryż. 5. Oglądając kolonie Bordetella pertussis pod mikroskopem świetlnym, można zobaczyć, jak kolonie rzucają cień (stożek świetlny).
Diagnostyka krztuśca za pomocą PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) jest najbardziej obiecującą techniką we współczesnych warunkach. Wysoka czułość testu pozwala na wykrycie DNA bakterii, nawet jeśli w badanym materiale jest ich kilka.
Metoda oznaczania DNA Bordetella pertussis metodą PCR opracowano w Nowosybirsku w 1999 roku. Ma szereg zalet w porównaniu z metodą bakteriologiczną:
Wysoka czułość tej metody. Nawet obecność jednego lub więcej patogenów w próbce pozwala uzyskać wynik pozytywny.
Metoda ta jest wysoce specyficzna. Odsetek wyników pozytywnych wynosi 85 - 100%. Zanieczyszczenie mikroflorą wtórną nie ma wpływu na wyniki badania.
Wynik uzyskuje się w ciągu 1 dnia.
Ta metoda diagnostyczna nie zastępuje metody kulturowej.
Metoda bakteriologiczna i technika PCR stanowią komplementarne i wiarygodne testy do identyfikacji Bordetella pertussis.
Ryż. 6. Na zdjęciu typy kolonii Bordetella pertussis.
Badanie na krztusiec przy użyciu techniki przeciwciał fluorescencyjnych
Niski odsetek potwierdzeń bakteriologicznych choroby stał się impulsem do opracowania innych, bardziej czułych metod identyfikacji czynnika wywołującego krztusiec. W latach 60. metoda ustalania Bordetella pertussis przy użyciu przeciwciał fluorescencyjnych. Specjalnie przetworzone rozmazy ogląda się pod mikroskopem fluorescencyjnym. Test ten może wykonywać wyłącznie wysoko wykwalifikowany personel; stosowane są odczynniki wysokiej jakości. W przeciwnym razie możliwa jest duża liczba wyników fałszywie dodatnich. Technika ta jest rzadko stosowana w medycynie praktycznej.
Ryż. 7.Specjalnie przetworzone rozmazy ogląda się pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Testowanie na krztusiec za pomocą testów serologicznych
Patogeny krztuśca zawierają substancje (antygeny), które mogą wywołać odpowiedź immunologiczną w organizmie osoby zakażonej (powstanie przeciwciał). Dzięki badaniom serologicznym identyfikowane i badane są przeciwciała i antygeny w surowicy krwi pacjenta. Opierają się na reakcjach immunologicznych organizmu. Specyficzność tego typu badań nie sięga 100%, dlatego też wyniki badania serologicznego ocenia się wyłącznie z uwzględnieniem obrazu klinicznego choroby. Do przeprowadzenia analizy epidemiologicznej wykorzystuje się także metody serologiczne.
Aby zdiagnozować krztusiec, stosuje się kilka testów:
Test immunoenzymatyczny (ELISA) - czuły, specyficzny i stosunkowo niedrogi test. W tym celu stosuje się antygeny białkowe bakterii krztuśca, za pomocą których mierzy się w surowicy immunoglobuliny klas G, M i A, których poziom wzrasta we krwi po chorobie lub szczepieniu. Wzrost immunoglobulin M w surowicy we wczesnych stadiach choroby, immunoglobulin G w surowicy w późniejszych stadiach.
Rozpoznanie krztuśca w późniejszych stadiach choroby przeprowadza się za pomocą reakcji aglutynacji: RPG, RNG I RA. Podstawą takich reakcji jest zdolność antygenów korpuskularnych do sklejania się za pomocą przeciwciał.
Zmiany w składzie komórkowym krwi: wysoki poziom leukocytów (leukocytoza) i limfocytów (limfocytoza) z prawidłowym współczynnikiem sedymentacji erytrocytów (ESR) częściej wykrywa się u nieszczepionych dzieci.
Niezależnie od formy, w jakiej występuje krztusiec, dziś lekarze mają możliwość przeprowadzenia wczesnej diagnostyki laboratoryjnej tej choroby.
Ryż. 8. Na zdjęciu po lewej leukocyty, po prawej limfocyty. W przypadku krztuśca ich liczba znacznie wzrasta.
Metoda diagnostyki różnicowej umożliwia wykluczenie wielu możliwych chorób u pacjentów i ustalenie jedynej prawidłowej diagnozy. Prawidłowo przeprowadzona diagnostyka różnicowa krztuśca pozwala na podjęcie odpowiedniego leczenia w odpowiednim czasie i złagodzenie przebiegu choroby.
Krztusiec należy odróżnić od ARVI, krztuśca, zapalenia oskrzeli, astmy oskrzelowej, obecności ciał obcych w drogach oddechowych, zapalenia płuc, gruźliczego zapalenia oskrzeli i innych.
Największą trudnością jest zdiagnozowanie choroby. w okresie kataru. Krztusiec w tym okresie wykazuje wiele podobieństw do całej grupy ostrych chorób wirusowych układu oddechowego, a także odry i parakokluszu. Krztusiec w tym okresie charakteryzuje się uporczywym, nasilającym się kaszlem oraz brakiem lub słabym nasileniem zjawisk nieżytowych górnych dróg oddechowych.W tym okresie konieczne jest zastosowanie ekspresowych metod i diagnostyka bakteriologiczna krztuśca.
Podczas ataków spazmatycznego kaszlu krztusiec należy odróżnić od ostrych chorób układu oddechowego z zespołem obturacyjnym, ostrych chorób wirusowych z dominującym uszkodzeniem dolnych partii aparatu oddechowego, mykoplazmozy układu oddechowego, gruźliczego zapalenia oskrzeli, aspiracji ciała obcego, guza śródpiersia, oskrzelowo-płucnej postaci mukowiscydozy.
Ryż. 9. Nowoczesna diagnostyka krztuśca pozwala szybko postawić prawidłową diagnozę. A odpowiednie leczenie w odpowiednim czasie znacznie złagodzi stan chorego dziecka i przeprowadzi środki zapobiegawcze, zapobiegając w ten sposób zakażeniu osób kontaktowych.
