Диагнозата на дифтерия се основава на клинични данни, последвани от потвърждаване на диагнозата чрез бактериологично изследване. Лабораторната диагностика на дифтерията включва редица изследвания, основното от които е микробиологично.
Често внимателно събраната анамнеза и преглед на орофаринкса са достатъчни за поставяне на диагнозата. Всяко забавяне при поставяне на диагноза и предписване на адекватно лечение увеличава вероятността от неблагоприятен изход от заболяването.
Изолирането на култура от патогени с последващо определяне на токсикогенността в изолираните патогени е основният и единствен метод за микробиологична диагностика на дифтерия.Предварителният резултат се получава след 24 часа, след 48 часа се получава резултатът от изследването на дифтерийни бацили за токсикогенност, след 72 часа се определя биоварът на патогена.
Микроскопското изследване за дифтерия е нерационално.
Серологичната диагноза се основава на определяне на повишаването на титъра на антибактериалните антитела. Резултатите се получават на 2-та седмица от заболяването.
При диагностициране на дифтерия се използва генетичен метод (PCR) за определяне на ДНК на бактериите.
Реакцията на латекс аглутинация е бърз метод. Резултатът се получава в рамките на два часа.
Имунофлуоресцентният анализ е продуктивен. Но трябва да се извършва само от висококвалифициран персонал.
Ориз. 1. Мръсен бял филм и изразено подуване на подкожната мастна тъкан на шията - "врат на бик" - са класически признаци на дифтерия.
Микробиологична диагностика на дифтерия
Микробиологичното изследване е основният метод за лабораторна диагностика на дифтерия.
Метод на засяване върху хранителни среди
В какви случаи се извършва бактериологично изследване?
Бактериологично изследване се извършва в следните случаи:
за целите на диагностицирането на дифтерия на фаринкса, носа и фаринкса при възрастни и деца,
за идентифициране на възможно бактериално носителство при лица, които влизат в предучилищни институции и специализирани институции за възрастни,
за идентифициране на заболяването сред контактните лица.
Материал за изследване
Материалът за изследване (намазка за дифтерия) се събира на празен стомах или 2 часа след хранене. За изследване се използват дифтерийни филми или парчета тъкан, разположени наблизо, изхвърляне от засегнатите области и назофарингеална слуз.
Метод за събиране на материал
Вземането на материал (намазка за дифтерия) се извършва с памучен тампон. Коренът на езика се притиска с шпатула. С помощта на памучен тампон трябва да докоснете лигавицата на сливиците на границата на филма, дъгите и задната стена на фаринкса. След това тампонът се спуска в стерилна епруветка, без да докосва стените й.
Трябва да се изпрати в лабораторията в рамките на първите 3 часа. Ако е невъзможно да се инокулира в следващите 3-4 часа, материалът се събира със стерилен памучен тампон, който се навлажнява в 5% разтвор на глицерин в изотоничен разтвор на натриев хлорид или 2% разтвор на калиев телурит.
Вземането на материал (намазка за дифтерия) се извършва с два памучни тампона, единият от които се използва за култура, а другият за микроскопия.
При съмнение за дифтерия е необходимо да се уведоми персоналът на лабораторията, така че събраният материал да се инокулира върху подходяща среда (кръвен агар, среда на Лефлер или телуритна среда).
Култивиране на дифтерийни бактерии
Инокулацията се извършва върху хранителни среди (кръвен агар, среда на Лефлер или телуритна среда). Телуритът във висока концентрация потиска растежа на съпътстващата микрофлора.
Ориз. 2. Снимката показва растежа на колонии от дифтериен бацил върху различни среди - кръвен агар и телуритна среда.
Когато бактериите растат върху кръвен агар, колониите придобиват белезникав цвят, имат кръгла, изпъкнала форма, с диаметър 1-2 mm, често с маслена консистенция.
Когато бактериите растат върху телуритна среда, колониите са сиви, изпъкнали и имат гладки ръбове. След два дни колониите придобиват тъмносив или черен цвят, имат метален блясък, гладки или назъбени ръбове, повърхността е гладка или радиално набраздена.
Идентифициране на биотипа (разновидността на щама) на дифтерията
Идентифицирането на разновидности на щамове на патогени на дифтерия се основава на способността на бактериите да разграждат гликоген и нишесте. За тези цели се използва техниката на „дългата“ серия от въглехидрати.
Като се вземат предвид ензимните характеристики на патогените и структурата на колониите по време на растеж върху телуритна среда, се разграничават 4 биотипа на Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius и Corynebacterium diphtheriae belfanti.
Ориз. 3. На снимката вляво са представени колонии от Corynebacterium diphtheriae gravis. Те са големи по размер, изпъкнали в центъра, радиално набраздени, с неравни ръбове. На снимката вдясно е Corynebacterium diphtheriae mittis. Те са малки по размер, тъмни на цвят, гладки и лъскави, с гладки ръбове.
Определяне на токсикогенността на дифтерийни бацили
Токсикогенността на дифтерийните патогени се определя след изолиране на бактериалната култура. За тези цели се използва методът на дифузно утаяване в гел и методът за определяне на токсикогенността на бактериите в жив организъм (морски свинчета).
Техника на бактериоскопия
Лабораторната диагностика чрез микроскопия е от второстепенно значение. Поради факта, че дифтерийните патогени не абсорбират добре багрилата, оцветяването по Грам се счита за неспецифично, но позволява индиректно идентифициране на непатогенни коринебактерии, които са разположени успоредно една на друга в намазката.
При оцветяване по Neisser се откриват характерни за дифтерийните бацили зърна на Babesch-Ernst, които са разположени в полюсите на клетките, придавайки им вид на клуб.
В намазките патогенните дифтерийни бацили са разположени под ъгъл един спрямо друг.
За идентифициране на зърната на Babes-Ernst се използва техниката на флуоресцентна микроскопия. При оцветяване на петна с корифосфин под микроскоп могат да се видят жълто-зелени тела на бактериални клетки с оранжево-червени зърна от волютин.
Ориз. 4. Дифтериен бацил под микроскоп. Оцветяване по Грам.
Ориз. 5. На снимката вляво са псевдодифтерийните бацили на Хофман. Често се намират в назофаринкса. Те са дебели, къси, разположени на щрихи, успоредни един на друг. Снимката вдясно е патогенна бактерия. В намазката те са разположени под ъгъл един спрямо друг.
Серологичните тестове могат да открият антибактериални и антитоксични антитела. Откриването на антибактериални антитела е значително, тъй като съдържанието на антитоксин се променя поради използването на антитоксичен серум от първите дни. Най-често срещаната в момента е реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA и RPHA).
Имуноглобулините G и M показват тежестта на инфекциозния процес.
Имуноглобулин G показва скорошно заболяване.
Имуноглобулините М показват остра дифтерия.
При дифтерия титърът на антителата се увеличава с времето. Намаляването на концентрацията на антитела показва възстановяването на пациента.
След ваксинация се образуват анти-дифтерийни антитела. Те циркулират в кръвта на ваксинирания човек в продължение на много години.
Диагностика на дифтерия с помощта на имунофлуоресцентен анализ
Благодарение на използването на техники за флуоресцентни антитела, стана възможно да се извърши качествен и количествен анализ на вътреклетъчни и повърхностни антигени в проби от клетъчни суспензии. Антигените се визуализират с помощта на специфични антитела с флуоресцентни маркери. Използването на тази техника се доверява само на висококвалифициран персонал.
Диагностика на дифтерия чрез полимеразна верижна реакция (PCR)
Техниката PCR се използва за ранно откриване на дифтериен бацил, потвърждаване на диагнозата и при атипични възпалено гърло. Откриването на токсикогенния ген чрез PCR е най-бързият и надежден метод за лабораторна диагностика на дифтерия.
Ориз. 6. PCR е най-бързият и надежден метод за лабораторна диагностика на дифтерия.
При токсично увреждане на сърдечния мускул се отбелязват промени в електрокардиограмата, фонокардиограмата и ултразвука на сърцето. Изследва се активността на редица ензими (лактатдехидрогеназа, креатинфосфокиназа, аспартат аминотрансфераза).
Увреждането на бъбреците при дифтерия се проявява под формата на токсична нефроза. Ако се подозира това усложнение, се извършва общ тест за кръв и урина, биохимични изследвания (определяне на креатинин, урея, остатъчен азот) и ултразвук на бъбреците.
Токсичното чернодробно увреждане се проявява със симптоми на хипогликемия (намаляване на нивата на кръвната захар) и глюкозурия (наличие на глюкоза в урината).
Развитието на анемия е свързано с хемолиза на червените кръвни клетки.
Наличието или отсъствието на антидифтериен имунитет се установява чрез интрадермален тест на Шик, който се провежда с дифтериен токсин.
В случай на отрицателна реакция, те говорят за имунитет към дифтерия. Днес реакцията на Шик се използва само за епидемиологични показания. Завършването отнема няколко дни. Въпреки това, въпреки това, той помага да се определи степента на чувствителност към дифтерия на лица, които са били в контакт с пациента, и да се изясни техният имунен статус.
Ориз. 7. Реакцията на Шик се провежда с дифтериен токсин. Стандартен дифтериен токсин в доза от 0,2 ml се инжектира интрадермално в средната трета на предмишницата с туберкулинова спринцовка.
