Listerióza je infekční onemocnění, které způsobuje nejvirulentnější alimentární infekce. Listerióza je běžná u zvířat i lidí. Vyznačuje se mnoha zdroji infekce, různými cestami a faktory jejího přenosu, více formami projevů a vysokou mortalitou. Listerióza celosvětově postihuje tisíce lidí, z nichž 20 až 30 % zemře. Úmrtnost na těžké běžné formy onemocnění dosahuje 90 - 100 %. Včasná diagnostika listeriózy umožňuje předepsat adekvátní léčbu, která zajistí pacientovi úplné vyléčení.
Rýže. 1. Na fotografii je pacient s listeriovou meningitidou.
Polymorfismus klinických projevů a nemožnost identifikace zdroje infekce v některých případech vytváří výjimečné obtíže při stanovení diagnózy na základě klinických a epidemiologických dat. V tomto ohledu se stává zásadní laboratorní diagnostika listeriózy.Předběžná diagnóza je stanovena na základě bakterioskopického vyšetření, konečná diagnóza vyžaduje bakteriologické potvrzení nebo PCR.
U žen, které porodily mrtvé dítě nebo se známkami listeriózy, se vyšetřuje placenta, plodová voda a výtok z porodních cest.
Meconium je testováno u novorozenců.
U pacientů s podezřením na listeriovou meningitidu se vyšetřuje mozkomíšní mok.
Z mrtvol se odebírá nejrůznější biologický materiál.
Pro stanovení bakteriálního nosičství se odebírají výkaly a orofaryngeální výtěry.
Diagnostika listeriózy pomocí prosté a fluorescenční mikroskopie
Rýže. 2. Pohled na Listerii pod mikroskopem. Bakterie jsou umístěny jednotlivě nebo v párech, méně často v krátkých řetězcích. Při obarvení Gramovým barvivem se Listeria jeví jako růžová.
Rýže. 3. Listerie ve světle mikroskopu, který poskytuje trojrozměrné zvětšení, vypadá jako válce.
Rýže. 4. Listerie v makrofázích.
Mikroskopie listeriových granulomů
Snížení fungování buněčné imunity vede k šíření infekce po celém těle. V orgánech a tkáních se tvoří specifické granulomy — listeriomy. Jejich specifické složení je určeno mikroskopií nátěru nebo biopatu.
Rýže. 5. Granulomy v játrech (foto vlevo). Granulom (listeriom) v mozku (foto vpravo).
Laboratorní diagnostika listeriózy pomocí bakteriologického vyšetření
Listeria roste při pokojové teplotě na běžných živných půdách – mírně zásaditých a neutrálních. Plodiny se doporučuje provádět v prvních 7 - 10 dnech onemocnění.Inkubace trvá 3 týdny při teplotě 37 °C. Při nanášení na glukózo-krevní agar se vyberou typické kolonie (průhledné nebo rohovité), které produkují hemolýzu.
Rýže. 6. Kolonie Listeria při výsevu na masový peptonový agar připomínají kapky rosy. V procházejícím světle získávají kolonie perleťový odstín.
Rýže. 7. Když Listeria roste na chromogenním agaru, získávají kolonie modrou barvu.
Rýže. 8. Při pěstování na Oxfordském agaru se kolem kolonií tvoří černé halo.
Rýže. 9. Když Listeria roste v masovo-peptonovém vývaru, vytváří se zákal s mírnou opalescencí.
Biologické testy jsou založeny na infikování laboratorních zvířat biologickým materiálem odebraným od pacienta za účelem zjištění bakterií. Bílé myši, králíci, morčata a stepníci jsou vystaveni infekci.
Rýže. 10. Na fotografii jsou bílé myši infikované listeriózou. Uprostřed je zdravá myš. Napravo a nalevo od něj jsou kojené myši s ochrnutím předních nohou.
Rýže. 11. Na fotografii vlevo se listerióza u králíka rozvinula po nitrožilní infekci. Fotografie vpravo ukazuje zánětlivou reakci, která se vyvinula v místě intradermální injekce Listeria.
Protilátky proti listeriím se stanovují pomocí sérologických reakcí: aglutinační reakce (RA), nepřímá hemaglutinační reakce (IRHA) a reakce fixace komplementu (CFR) s listeriovým antigenem v párových sérech. Pokud má pacient listeriózu, zaznamená se zvýšení titru 4krát nebo více. Reakce se provádějí dvakrát s 2týdenní přestávkou.
Vzhledem k antigennímu vztahu bakterií Listeria a Staphylococcus jsou možné falešně pozitivní výsledky.
Po 2 týdnech od začátku onemocnění jsou v krvi pacienta detekovány protilátky IgG, které jsou v krvi přítomny po celou dobu onemocnění. Protilátky při chronické listerióze zůstávají v krvi dlouhou dobu.
Fluorescenční protilátková metoda
Imunofluorescenční reakce (RIF) je rychlá a vysoce citlivá metoda pro diagnostiku listeriózy. Existuje přímá a nepřímá metoda RIF. Při stanovení protilátek přímou metodou se k suspenzi mikrobů fixované na podložní sklíčko přidá sérum značené fluorochromem. Když se pod modrofialovým (ultrafialovým) světlem vytvoří komplex antigen-protilátka, bakterie pod fluorescenčním mikroskopem září jasně zeleně.
Rýže. 12. Záře Listeria během imunofluorescenční reakce.
Krevní test na Listerii je účinný způsob, jak odhalit infekci listerií. U různých forem listeriózy se v těle pacientů aktivuje systém mononukleárních fagocytů – makrofágů. Zachycují a ničí bakterie a viry žijící intracelulárně, čtou informace o jejich struktuře a předávají je T-lymfocytům. Následně začnou B lymfocyty produkovat protilátky, které zničí patogen. S onemocněním se zvyšuje počet monocytů v periferní krvi. U septické formy listeriózy jejich počet dosahuje 70 % (s normou 3 - 11 %).
Rýže. 13. Na fotografii jsou monocyty největšími buňkami v periferní krvi.
K diagnostice listeriózy se používá intradermální (alergický) test. Antigen Listeria se podává intradermálně. Po 24 hodinách se reakce studuje. Pokud je listerie přítomna v těle testované osoby, objeví se na kůži v místě zavedení listeriového antigenu papule (infiltrát) o velikosti 10 a více milimetrů.
Intradermální test se provádí 6.–9. den od okamžiku onemocnění.
V případě ojedinělých případů listeriózy by měla být diagnóza onemocnění provedena pomocí bakteriologické metody a metody PCR.
