Rozpoznanie błonicy opiera się na danych klinicznych, a następnie potwierdzeniu rozpoznania poprzez badanie bakteriologiczne. Diagnostyka laboratoryjna błonicy obejmuje szereg badań, z których główne ma charakter mikrobiologiczny.
Często do postawienia diagnozy wystarczy dokładnie zebrany wywiad i badanie jamy ustnej i gardła. Wszelkie opóźnienia w ustaleniu diagnozy i przepisaniu odpowiedniego leczenia zwiększają prawdopodobieństwo niekorzystnego przebiegu choroby.
Główną i jedyną metodą diagnostyki mikrobiologicznej błonicy jest izolacja hodowli patogenów z późniejszym określeniem toksyczności wyizolowanych patogenów.Wstępny wynik uzyskuje się po 24 godzinach, po 48 godzinach uzyskuje się wynik badania prątków błonicy pod kątem toksyczności, po 72 godzinach oznacza się biowar patogenu.
Badanie mikroskopowe w kierunku błonicy jest nieracjonalne.
Diagnostyka serologiczna opiera się na określeniu wzrostu miana przeciwciał przeciwbakteryjnych. Wyniki uzyskuje się w 2. tygodniu choroby.
W przypadku rozpoznania błonicy stosuje się metodę genetyczną (PCR) w celu określenia DNA bakterii.
Reakcja aglutynacji lateksu jest metodą szybką. Wynik uzyskuje się w ciągu dwóch godzin.
Analiza immunofluorescencyjna jest produktywna. Jednakże powinien on być wykonywany wyłącznie przez wysoko wykwalifikowany personel.
Ryż. 1. Brudny biały film i wyraźny obrzęk podskórnej tkanki tłuszczowej szyi - „byczej szyi” – to klasyczne objawy błonicy.
Diagnostyka mikrobiologiczna błonicy
Główną metodą diagnostyki laboratoryjnej błonicy jest badanie mikrobiologiczne.
Sposób siewu na pożywki
W jakich przypadkach wykonuje się badanie bakteriologiczne?
Badania bakteriologiczne przeprowadza się w następujących przypadkach:
w celu diagnostyki błonicy gardła, nosa i gardła u dorosłych i dzieci,
w celu wykrycia ewentualnego nosicielstwa bakterii u osób trafiających do placówek przedszkolnych i specjalistycznych placówek dla dorosłych,
w celu identyfikacji choroby wśród osób kontaktowych.
Materiał do badań
Materiał do badań (rozmaz na błonicę) pobiera się na czczo lub 2 godziny po posiłku. Do badań wykorzystuje się błonicowe błony lub kawałki tkanki znajdujące się w pobliżu, wydzielinę z dotkniętych obszarów i śluz nosowo-gardłowy.
Sposób gromadzenia materiału
Pobieranie materiału (rozmaz na błonicę) odbywa się za pomocą wacika. Korzeń języka dociska się szpatułką. Za pomocą wacika należy dotknąć błony śluzowej migdałków na granicy filmu, łuków i tylnej ściany gardła. Następnie wymaz zanurza się w sterylnej probówce, nie dotykając jej ścianek.
Należy przesłać do laboratorium w ciągu pierwszych 3 godzin. Jeżeli w ciągu kolejnych 3-4 godzin nie można zaszczepić, materiał pobiera się sterylnym wacikiem zwilżonym 5% roztworem gliceryny w izotonicznym roztworze chlorku sodu lub 2% roztworze tellurynu potasu.
Pobieranie materiału (rozmaz na błonicę) odbywa się za pomocą dwóch wacików bawełnianych, z których jeden służy do hodowli, drugi do mikroskopii.
W przypadku podejrzenia błonicy należy powiadomić personel laboratorium w celu posiewu pobranego materiału na odpowiednie podłoża (agar z krwią, podłoże Lefflera lub podłoże tellurytowe).
Hodowla bakterii błonicy
Zaszczepianie przeprowadza się na pożywce (agar z krwią, podłoże Lefflera lub podłoże tellurytowe). Telluryn w wysokim stężeniu hamuje rozwój towarzyszącej mikroflory.
Ryż. 2. Zdjęcie przedstawia wzrost kolonii Bacillus błonicy na różnych podłożach - agarze z krwią i podłożu tellurytowym.
Kiedy bakterie rosną na agarze z krwią, kolonie nabierają białawego koloru, są nieprzezroczyste, okrągłe, wypukłe, o średnicy 1 - 2 mm, często o oleistej konsystencji.
Kiedy bakterie rosną na podłożu tellurytowym, kolonie są szare, wypukłe i mają gładkie krawędzie. Po dwóch dniach kolonie nabierają ciemnoszarego lub czarnego koloru, mają metaliczny połysk, gładkie lub karbowane krawędzie, powierzchnia jest gładka lub promieniście prążkowana.
Identyfikacja biotypu (odmiany szczepu) błonicy
Identyfikacja odmian szczepów patogenów błonicy opiera się na zdolności bakterii do rozkładania glikogenu i skrobi. W tym celu stosuje się technikę „długiej” serii węglowodanów.
Biorąc pod uwagę charakterystykę enzymatyczną patogenów oraz strukturę kolonii podczas wzrostu na podłożach tellurycznych, wyróżnia się 4 biotypy Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius i Corynebacterium diphtheriae belfanti.
Ryż. 3. Na zdjęciu po lewej stronie kolonie Corynebacterium diphtheriae gravis. Są duże, wypukłe w środku, promieniście prążkowane, o nierównych krawędziach. Na zdjęciu po prawej stronie widać Corynebacterium diphtheriae mittis. Są niewielkich rozmiarów, ciemnego koloru, gładkie i błyszczące, o gładkich krawędziach.
Oznaczanie toksyczności prątków błonicy
Toksyczność patogenów błonicy określa się po wyizolowaniu hodowli bakteryjnej. Do tych celów stosuje się metodę rozproszonego strącania w żelu oraz metodę oznaczania toksyczności bakterii w organizmie żywym (świnki morskie).
Technika bakterioskopowa
Diagnostyka laboratoryjna za pomocą mikroskopii ma drugorzędne znaczenie. Ze względu na to, że patogeny błonicy słabo wchłaniają barwniki, barwienie metodą Grama uważane jest za niespecyficzne, ale pozwala na pośrednią identyfikację maczugowców niepatogennych, które w rozmazie są ułożone równolegle do siebie.
Po barwieniu według Neissera ujawniają się charakterystyczne dla prątków błonicy ziarna Babescha-Ernsta, które znajdują się na biegunach komórek, nadając im wygląd maczugi.
W rozmazach chorobotwórcze prątki błonicy są ułożone pod kątem względem siebie.
Do identyfikacji ziaren Babesa-Ernsta wykorzystuje się technikę mikroskopii fluorescencyjnej. Po zabarwieniu rozmazów koryfosfiną pod mikroskopem można zobaczyć żółto-zielone ciała komórek bakteryjnych z pomarańczowo-czerwonymi ziarnami wolutyny.
Ryż. 4. Prątki błonicy pod mikroskopem. Plama Grama.
Ryż. 5. Na zdjęciu po lewej stronie widać pałeczki pseudodiphtheria Hoffmanna. Często znajdują się w nosogardzieli. Są grube, krótkie, umieszczone w pociągnięciach równoległych do siebie. Zdjęcie po prawej stronie to bakterie chorobotwórcze. W rozmazie są one umieszczone pod kątem względem siebie.
Testy serologiczne pozwalają wykryć przeciwciała antybakteryjne i antytoksyczne. Wykrycie przeciwciał przeciwbakteryjnych jest istotne, ponieważ zawartość antytoksyny zmienia się pod wpływem stosowania serum antytoksycznego już od pierwszych dni. Obecnie najczęściej spotykaną reakcją jest bierna reakcja hemaglutynacji (RPHA i RPHA).
Immunoglobuliny G i M wskazują na ciężkość procesu zakaźnego.
Immunoglobulina G wskazuje na niedawną chorobę.
Immunoglobuliny M wskazują na ostrą błonicę.
W przypadku błonicy miano przeciwciał wzrasta z czasem. Spadek stężenia przeciwciał wskazuje na powrót pacjenta do zdrowia.
Po szczepieniu powstają przeciwciała przeciw błonicy. Krążą we krwi osoby zaszczepionej przez wiele lat.
Diagnostyka błonicy za pomocą testu immunofluorescencyjnego
Dzięki zastosowaniu technik przeciwciał fluorescencyjnych możliwe stało się prowadzenie jakościowej i ilościowej analizy antygenów wewnątrzkomórkowych i powierzchniowych w próbkach zawiesin komórkowych. Antygeny wizualizuje się za pomocą specyficznych przeciwciał ze znacznikami fluorescencyjnymi. Stosowanie tej techniki można powierzyć wyłącznie wysoko wykwalifikowanemu personelowi.
Diagnostyka błonicy za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR)
Technikę PCR stosuje się do wczesnego wykrywania prątków błonicy, potwierdzenia rozpoznania oraz w przypadku atypowego bólu gardła. Wykrywanie genu toksycznego za pomocą PCR jest najszybszą i najbardziej niezawodną metodą laboratoryjnej diagnostyki błonicy.
Ryż. 6. PCR jest najszybszą i najbardziej niezawodną metodą laboratoryjnej diagnostyki błonicy.
W przypadku toksycznego uszkodzenia mięśnia sercowego zmiany odnotowuje się na elektrokardiogramie, fonokardiogramie i USG serca. Badana jest aktywność szeregu enzymów (dehydrogenazy mleczanowej, fosfokinazy kreatynowej, aminotransferazy asparaginianowej).
Uszkodzenie nerek w błonicy objawia się w postaci toksycznej nerczycy. W przypadku podejrzenia tego powikłania wykonuje się ogólne badanie krwi i moczu, badania biochemiczne (oznaczenie kreatyniny, mocznika, azotu resztkowego) oraz USG nerek.
Toksyczne uszkodzenie wątroby objawia się hipoglikemią (spadek poziomu glukozy we krwi) i cukromoczem (obecność glukozy w moczu).
Rozwój niedokrwistości jest związany z hemolizą czerwonych krwinek.
Obecność lub brak odporności przeciw błonicy ustala się za pomocą śródskórnego testu Schicka, który przeprowadza się z toksyną błoniczą.
W przypadku reakcji negatywnej mówią o odporności na błonicę. Obecnie reakcję Schicka stosuje się wyłącznie ze wskazań epidemiologicznych. Wykonanie zajmuje kilka dni. Mimo to pozwala określić stopień podatności na błonicę osób, które miały kontakt z pacjentem i wyjaśnić ich stan odporności.
Ryż. 7. Reakcję Schicka przeprowadza się z toksyną błoniczą. Standardową toksynę błoniczą w dawce 0,2 ml wstrzykuje się śródskórnie w środkową jedną trzecią przedramienia za pomocą strzykawki tuberkulinowej.
