Diagnos av difteri baseras på kliniska data, följt av bekräftelse av diagnosen genom bakteriologisk undersökning. Laboratoriediagnostik av difteri inkluderar ett antal studier, varav den huvudsakliga är mikrobiologisk.
Ofta räcker det med en noggrant insamlad sjukdomshistoria och undersökning av orofarynx för att ställa en diagnos. Varje försening av att fastställa en diagnos och förskriva adekvat behandling ökar sannolikheten för ett ogynnsamt utfall av sjukdomen.
Isolering av en kultur av patogener med efterföljande bestämning av toxicogenicitet hos de isolerade patogenerna är den huvudsakliga och enda metoden för mikrobiologisk diagnos av difteri.Det preliminära resultatet erhålls efter 24 timmar, efter 48 timmar erhålls resultatet av att testa difteribaciller för toxicogenicitet, efter 72 timmar bestäms patogenens biovar.
Mikroskopisk undersökning för difteri är irrationell.
Serologisk diagnos baseras på att bestämma ökningen av titern av antibakteriella antikroppar. Resultaten erhålls under den andra veckan av sjukdomen.
När difteri diagnostiseras används en genetisk metod (PCR) för att bestämma bakteriers DNA.
Latexagglutinationsreaktionen är en snabb metod. Resultatet erhålls inom två timmar.
Immunfluorescensanalys är produktiv. Det bör dock endast utföras av högt kvalificerad personal.
Ris. 1. En smutsig vit hinna och uttalad svullnad av den subkutana fettvävnaden i nacken - "bull neck" - är klassiska tecken på difteri.
Mikrobiologisk diagnos av difteri
Mikrobiologisk undersökning är den huvudsakliga metoden för laboratoriediagnostik av difteri.
Metod för sådd på näringsmedia
I vilka fall görs bakteriologisk undersökning?
Bakteriologisk forskning utförs i följande fall:
i syfte att diagnostisera difteri i svalget, näsan och svalget hos vuxna och barn,
för att identifiera möjlig bakterietransport hos personer som går in på förskoleinstitutioner och specialiserade institutioner för vuxna,
för att identifiera sjukdomen bland kontaktpersoner.
Material för forskning
Material för forskning (utstryk för difteri) samlas in på fastande mage eller 2 timmar efter att ha ätit. För forskning används difterifilmer eller vävnadsbitar som ligger i närheten, flytningar från de drabbade områdena och nasofaryngealt slem.
Metod för att samla in material
Insamlingen av material (utstryk för difteri) utförs med en bomullspinne. Tungans rot pressas med en spatel. Med hjälp av en bomullspinne måste du röra vid slemhinnan i tonsillerna vid gränsen av filmen, bågarna och bakväggen i svalget. Därefter sänks pinnen ner i ett sterilt provrör utan att vidröra dess väggar.
Måste skickas till laboratoriet inom de första 3 timmarna. Om det är omöjligt att inokulera inom de närmaste 3-4 timmarna, samlas materialet upp med en steril bomullspinne, som fuktas i en 5% lösning av glycerin i en isotonisk lösning av natriumklorid eller en 2% lösning av kaliumtellurit.
Insamlingen av material (utstryk för difteri) utförs med två bomullspinnar, varav den ena används för odling, den andra för mikroskopi.
Vid misstanke om difteri är det nödvändigt att meddela laboratoriepersonal så att det insamlade materialet ympas på lämpligt medium (blodagar, Lefflers medium eller telluritmedium).
Odling av difteribakterier
Inokulering utförs på näringsmedium (blodagar, Lefflers medium eller telluritmedium). Tellurit i hög koncentration undertrycker tillväxten av åtföljande mikroflora.
Ris. 2. Bilden visar tillväxten av difteribacilluskolonier på olika medier - blodagar och telluritmedium.
När bakterier växer på blodagar får kolonierna en vitaktig färg de är ogenomskinliga, runda, konvexa till formen, 1 - 2 mm i diameter, ofta med en fet konsistens.
När bakterier växer på telluritmedia är kolonierna grå, konvexa och har släta kanter. Efter två dagar får kolonierna en mörkgrå eller svart färg, de har en metallisk glans, släta eller bågade kanter, ytan är slät eller radiellt strimmig.
Identifiering av biotypen (stamvarianten) av difteri
Identifiering av sorter av stammar av difteripatogener baseras på bakteriers förmåga att bryta ner glykogen och stärkelse. För dessa ändamål används den "långa" serien av kolhydrater.
Med hänsyn till de enzymatiska egenskaperna hos patogener och strukturen hos kolonier under tillväxt på telluritmedier, särskiljs 4 biotyper av Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae be intermedius och Corynebacterium diphtheriae.
Ris. 3. På bilden till vänster finns kolonier av Corynebacterium diphtheriae gravis. De är stora i storleken, konvexa i mitten, radiellt randiga, med ojämna kanter. På bilden till höger är Corynebacterium diphtheriae mittis. De är små i storleken, mörka i färgen, släta och glänsande, med släta kanter.
Bestämning av toxikogenicitet hos difteribaciller
Toxikogeniciteten hos difteripatogener bestäms efter isolering av bakteriekulturen. För dessa ändamål används metoden för diffus utfällning i en gel och metoden för att bestämma toxicogeniciteten hos bakterier i en levande organism (marsvin).
Bakterioskopiteknik
Laboratoriediagnostik med hjälp av mikroskopi är av underordnad betydelse. På grund av det faktum att difteripatogener inte absorberar färgämnen bra anses Gram-färgning vara ospecifik, men den tillåter indirekt identifiering av icke-patogena corynebakterier, som är placerade parallellt med varandra i utstryket.
När de färgas enligt Neisser avslöjas Babesch-Ernst-korn som är karakteristiska för difteribaciller, som är belägna vid cellernas poler, vilket ger dem utseendet av en klubba.
Vid utstryk är patogena difteribaciller belägna i en vinkel mot varandra.
För att identifiera Babes-Ernst-korn används fluorescensmikroskopitekniken. När utstryk färgas med koryfosfin i mikroskop kan gulgröna bakteriecellkroppar med orangeröda korn av volutin ses.
Ris. 4. Difteribaciller i mikroskop. Gram fläck.
Ris. 5. På bilden till vänster syns Hoffmanns pseudodifteribaciller. De finns ofta i nasofarynx. De är tjocka, korta, placerade i slag parallellt med varandra. Bilden till höger är patogena bakterier. I smeten ligger de i vinkel mot varandra.
Serologiska tester kan upptäcka antibakteriella och antitoxiska antikroppar. Detekteringen av antibakteriella antikroppar är betydande, eftersom innehållet av antitoxinet förändras på grund av användningen av antitoxiskt serum från de första dagarna. Den vanligaste för närvarande är den passiva hemagglutinationsreaktionen (RPHA och RPHA).
Immunglobuliner G och M indikerar svårighetsgraden av den infektiösa processen.
Immunoglobulin G indikerar en nyligen inträffad sjukdom.
Immunglobuliner M indikerar akut difteri.
Med difteri ökar antikroppstitern med tiden. En minskning av antikroppskoncentrationen indikerar patientens återhämtning.
Anti-difteriantikroppar bildas efter vaccination. De cirkulerar i blodet hos en vaccinerad person i många år.
Difteridiagnos med hjälp av immunfluorescensanalys
Tack vare användningen av fluorescerande antikroppstekniker har det blivit möjligt att utföra kvalitativ och kvantitativ analys av intracellulära och ytantigener i prover av cellsuspensioner. Antigener visualiseras med hjälp av specifika antikroppar med fluorescerande markörer. Användningen av denna teknik är endast betrodd av högt kvalificerad personal.
Difteridiagnostik med polymeraskedjereaktion (PCR)
PCR-tekniken används för tidig upptäckt av difteribaciller, bekräftelse av diagnos och vid atypisk halsont. Detektion av den toxikogena genen med PCR är den snabbaste och mest pålitliga metoden för laboratoriediagnostik av difteri.
Ris. 6. PCR är den snabbaste och mest pålitliga metoden för laboratoriediagnostik av difteri.
Med giftig skada på hjärtmuskeln noteras förändringar på EKG, fonokardiogram och ultraljud av hjärtat. Aktiviteten hos ett antal enzymer (laktatdehydrogenas, kreatinfosfokinas, aspartataminotransferas) studeras.
Njurskador vid difteri visar sig i form av giftig nefros. Om denna komplikation misstänks utförs ett allmänt blod- och urinprov, biokemiska studier (bestämning av kreatinin, urea, kvarvarande kväve) och ett ultraljud av njurarna.
Giftig leverskada uppstår med symtom på hypoglykemi (minskning av blodsockernivån) och glukosuri (närvaro av glukos i urinen).
Utvecklingen av anemi är förknippad med hemolys av röda blodkroppar.
Närvaron eller frånvaron av anti-difteri-immunitet fastställs med hjälp av ett intradermalt Schick-test, som utförs med difteritoxin.
Vid en negativ reaktion talar de om immunitet mot difteri. Idag används Schick-reaktionen endast för epidemiologiska indikationer. Det tar flera dagar att slutföra. Men trots detta hjälper det att bestämma graden av mottaglighet för difteri hos personer som var i kontakt med patienten och klargöra deras immunstatus.
Ris. 7. Schick-reaktionen utförs med difteritoxin. Standard difteritoxin i en dos av 0,2 ml injiceras intradermalt i den mellersta tredjedelen av underarmen med en tuberkulinspruta.
