Diagnóza záškrtu se opírá o klinická data, poté následuje potvrzení diagnózy bakteriologickým vyšetřením. Laboratorní diagnostika záškrtu zahrnuje řadu studií, z nichž hlavní je mikrobiologická.
Ke stanovení diagnózy často stačí pečlivě shromážděná anamnéza a vyšetření orofaryngu. Jakékoli zpoždění při stanovení diagnózy a předepsání adekvátní léčby zvyšuje pravděpodobnost nepříznivého výsledku onemocnění.
Izolace kultury patogenů s následným stanovením toxikogenity u izolovaných patogenů je hlavní a jedinou metodou mikrobiologické diagnostiky záškrtu.Předběžný výsledek je získán po 24 hodinách, po 48 hodinách je získán výsledek testování difterických bacilů na toxikogenitu, po 72 hodinách je stanoven biovar patogenu.
Mikroskopické vyšetření na záškrt je iracionální.
Sérologická diagnostika je založena na stanovení zvýšení titru antibakteriálních protilátek. Výsledky jsou získány ve 2. týdnu onemocnění.
Při diagnóze záškrtu se ke stanovení DNA bakterií používá genetická metoda (PCR).
Latexová aglutinační reakce je rychlá metoda. Výsledek se dostaví do dvou hodin.
Imunofluorescenční analýza je produktivní. Měl by to však provádět pouze vysoce kvalifikovaný personál.
Rýže. 1. Špinavý bílý film a výrazný otok podkožní tukové tkáně krku – „volský krk“ – jsou klasickými příznaky záškrtu.
Mikrobiologická diagnostika záškrtu
Mikrobiologické vyšetření je hlavní metodou laboratorní diagnostiky záškrtu.
Způsob setí na živné půdy
V jakých případech se provádí bakteriologické vyšetření?
Bakteriologický výzkum se provádí v následujících případech:
pro účely diagnostiky záškrtu hltanu, nosu a hltanu u dospělých a dětí,
za účelem identifikace možného přenosu bakterií u osob, které vstupují do předškolních zařízení a specializovaných zařízení pro dospělé,
za účelem identifikace onemocnění mezi kontaktními osobami.
Materiál pro výzkum
Materiál pro výzkum (nátěr na záškrt) se odebírá nalačno nebo 2 hodiny po jídle. Pro výzkum se používají difterické filmy nebo kousky tkáně umístěné v blízkosti, výtok z postižených oblastí a nasofaryngeální hlen.
Způsob sběru materiálu
Odběr materiálu (stěr na záškrt) se provádí vatovým tamponem. Kořen jazyka se přitlačí špachtlí. Pomocí vatového tamponu se musíte dotknout sliznice mandlí na hranici filmu, oblouků a zadní stěny hltanu. Poté se tampon spustí do sterilní zkumavky, aniž by se dotkl jejích stěn.
Musí být odeslán do laboratoře během prvních 3 hodin. Pokud není možné provést inokulaci v následujících 3-4 hodinách, materiál se odebere sterilním vatovým tamponem, který se navlhčí v 5% roztoku glycerinu v izotonickém roztoku chloridu sodného nebo 2% roztoku teluritu draselného.
Odběr materiálu (stěr na záškrt) se provádí dvěma vatovými tampony, z nichž jeden slouží ke kultivaci, druhý k mikroskopii.
Při podezření na záškrt je nutné upozornit pracovníky laboratoře, aby byl odebraný materiál naočkován na vhodná média (krevní agar, Lefflerovo médium nebo teluritové médium).
Kultivace bakterií záškrtu
Inokulace se provádí na živná média (krevní agar, Lefflerovo médium nebo teluritové médium). Telurit ve vysoké koncentraci potlačuje růst doprovodné mikroflóry.
Rýže. 2. Fotografie ukazuje růst kolonií difterických bacilů na různých médiích - krevní agar a teluritové médium.
Při růstu bakterií na krevním agaru získávají kolonie bělavou barvu jsou neprůhledné, kulaté, konvexního tvaru, o průměru 1 - 2 mm, často olejovité konzistence;
Když bakterie rostou na teluritovém médiu, jsou kolonie šedé, konvexní a mají hladké okraje. Po dvou dnech získávají kolonie tmavě šedou nebo černou barvu, mají kovový lesk, hladké nebo vroubkované okraje, povrch je hladký nebo radiálně pruhovaný.
Identifikace biotypu (odrůdy kmene) záškrtu
Identifikace odrůd kmenů patogenů záškrtu je založena na schopnosti bakterií rozkládat glykogen a škrob. Pro tyto účely se používá technika „dlouhé“ série sacharidů.
S přihlédnutím k enzymatickým charakteristikám patogenů a struktuře kolonií během růstu na teluritovém médiu se rozlišují 4 biotypy Corynebacterium diphtheria: Corynebacterium diphtheriae gravis, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius a Corynebacterium belfantiphtheria.
Rýže. 3. Na fotografii vlevo jsou kolonie Corynebacterium diphtheriae gravis. Jsou velké velikosti, konvexní ve středu, radiálně pruhované, s nerovnými okraji. Na fotografii vpravo je Corynebacterium diphtheriae mittis. Jsou malé velikosti, tmavé barvy, hladké a lesklé, s hladkými okraji.
Stanovení toxikogenity difterických bacilů
Toxikogenita patogenů záškrtu se stanoví po izolaci bakteriální kultury. Pro tyto účely se využívá metoda difuzního srážení v gelu a metoda stanovení toxikogenity bakterií v živém organismu (morčata).
Technika bakterioskopie
Laboratorní diagnostika pomocí mikroskopie je druhořadá. Vzhledem k tomu, že patogeny záškrtu dobře neabsorbují barviva, je Gramovo barvení považováno za nespecifické, ale umožňuje nepřímou identifikaci nepatogenních korynebakterií, které jsou v nátěru umístěny paralelně k sobě.
Při barvení podle Neissera se odhalí Babesch-Ernstova zrna charakteristická pro bacily záškrtu, která se nacházejí na pólech buněk a dodávají jim vzhled kyje.
V nátěrech jsou patogenní difterické bacily umístěny vzájemně pod úhlem.
K identifikaci Babes-Ernstových zrn se používá technika fluorescenční mikroskopie. Když jsou nátěry obarveny koryfosfinem pod mikroskopem, lze vidět žlutozelená těla bakteriálních buněk s oranžově červenými zrnky volutinu.
Rýže. 4. Záškrtové bacily pod mikroskopem. Gramova skvrna.
Rýže. 5. Na fotografii vlevo jsou Hoffmannovy pseudodifterické bacily. Často se nacházejí v nosohltanu. Jsou tlusté, krátké, umístěné v tahech paralelně k sobě. Na fotografii vpravo jsou patogenní bakterie. V nátěru jsou umístěny pod úhlem vůči sobě.
Sérologické testy mohou detekovat antibakteriální a antitoxické protilátky. Detekce antibakteriálních protilátek je významná, protože obsah antitoxinu se v důsledku použití antitoxického séra od prvních dnů mění. Nejběžnější je v současnosti pasivní hemaglutinační reakce (RPHA a RPHA).
Imunoglobuliny G a M indikují závažnost infekčního procesu.
Imunoglobulin G ukazuje na nedávné onemocnění.
Imunoglobuliny M indikují akutní záškrt.
Při záškrtu se titr protilátek v průběhu času zvyšuje. Snížení koncentrace protilátek ukazuje na zotavení pacienta.
Po očkování se tvoří protilátky proti záškrtu. V krvi očkovaného člověka kolují řadu let.
Diagnostika záškrtu pomocí imunofluorescenčního testu
Díky použití technik fluorescenčních protilátek bylo možné provádět kvalitativní a kvantitativní analýzu intracelulárních a povrchových antigenů ve vzorcích buněčných suspenzí. Antigeny jsou vizualizovány pomocí specifických protilátek s fluorescenčními markery. Použití této techniky je důvěryhodné pouze pro vysoce kvalifikovaný personál.
Diagnostika záškrtu pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR)
Technika PCR se používá pro včasnou detekci difterických bacilů, potvrzení diagnózy a v případech atypické angíny. Detekce toxikogenního genu pomocí PCR je nejrychlejší a nejspolehlivější metodou laboratorní diagnostiky záškrtu.
Rýže. 6. PCR je nejrychlejší a nejspolehlivější metoda pro laboratorní diagnostiku záškrtu.
Při toxickém poškození srdečního svalu jsou změny zaznamenány na elektrokardiogramu, fonokardiogramu a ultrazvuku srdce. Je studována aktivita řady enzymů (laktátdehydrogenáza, kreatinfosfokináza, aspartátaminotransferáza).
Poškození ledvin při záškrtu se projevuje ve formě toxické nefrózy. Při podezření na tuto komplikaci se provádí obecný test krve a moči, biochemické studie (stanovení kreatininu, močoviny, zbytkového dusíku) a ultrazvuk ledvin.
K toxickému poškození jater dochází s příznaky hypoglykémie (pokles hladiny glukózy v krvi) a glukosurie (přítomnost glukózy v moči).
Rozvoj anémie je spojen s hemolýzou červených krvinek.
Přítomnost nebo nepřítomnost anti-difterické imunity je stanovena pomocí intradermálního Schickova testu, který se provádí s difterickým toxinem.
V případě negativní reakce hovoří o imunitě vůči záškrtu. Schickova reakce se dnes používá pouze pro epidemiologické indikace. Dokončení trvá několik dní. Navzdory tomu však pomáhá určit míru náchylnosti k záškrtu osob, které byly v kontaktu s pacientem, a objasnit jejich imunitní stav.
Rýže. 7. Schickova reakce se provádí s difterickým toxinem. Standardní difterický toxin v dávce 0,2 ml se aplikuje intradermálně do střední třetiny předloktí tuberkulinovou stříkačkou.
