Difterijos diagnozė nustatoma remiantis klinikiniais duomenimis, po to diagnozė patvirtinama bakteriologiniu tyrimu. Difterijos laboratorinė diagnostika apima daugybę tyrimų, iš kurių pagrindinis yra mikrobiologinis.
Dažnai diagnozei nustatyti pakanka kruopščiai surinktos ligos istorijos ir burnos ir ryklės tyrimo. Bet koks delsimas nustatyti diagnozę ir paskirti tinkamą gydymą padidina nepalankių ligos baigčių tikimybę.
Patogeninių mikroorganizmų kultūros išskyrimas, vėliau nustatant išskirtų patogenų toksikogeniškumą, yra pagrindinis ir vienintelis difterijos mikrobiologinės diagnostikos metodas.Preliminarus rezultatas gaunamas po 24 valandų, po 48 valandų gaunamas difterijos bacilų toksikogeniškumo tyrimo rezultatas, po 72 valandų nustatomas sukėlėjo biovaras.
Mikroskopinis difterijos tyrimas yra neracionalus.
Serologinė diagnozė grindžiama antibakterinių antikūnų titro padidėjimo nustatymu. Rezultatai gaunami 2-ąją ligos savaitę.
Latekso agliutinacijos reakcija yra greitas metodas. Rezultatas gaunamas per dvi valandas.
Imunofluorescencinė analizė yra produktyvi. Tačiau tai turėtų atlikti tik aukštos kvalifikacijos darbuotojai.
Ryžiai. 1. Nešvari balta plėvelė ir ryškus poodinio riebalinio kaklo patinimas – „jaučio kaklas“ – yra klasikiniai difterijos požymiai.
Mikrobiologinė difterijos diagnostika
Mikrobiologinis tyrimas yra pagrindinis difterijos laboratorinės diagnostikos metodas.
Sėjos ant maistinių medžiagų būdas
Kokiais atvejais atliekamas bakteriologinis tyrimas?
Bakteriologiniai tyrimai atliekami šiais atvejais:
suaugusiems ir vaikams diagnozuoti ryklės, nosies ir ryklės difteriją,
siekiant nustatyti galimą bakterijų pernešimą asmenims, patenkantiems į ikimokyklines ir specializuotas suaugusiųjų įstaigas,
siekiant nustatyti ligą tarp kontaktinių asmenų.
Medžiaga tyrimams
Medžiaga tyrimams (difterijos tepinėlis) renkama nevalgius arba praėjus 2 valandoms po valgio. Tyrimams naudojamos difterijos plėvelės ar netoliese esančios audinių gabalėliai, išskyros iš pažeistų vietų, nosiaryklės gleivės.
Medžiagos rinkimo būdas
Medžiagos surinkimas (tepinėlis nuo difterijos) atliekamas vatos tamponu. Liežuvio šaknis spaudžiama mentele. Medvilniniu tamponu reikia paliesti tonzilių gleivinę ties plėvelės riba, lankais ir užpakaline ryklės sienele. Tada tamponas nuleidžiamas į sterilų mėgintuvėlį, neliečiant jo sienelių.
Turi būti išsiųstas į laboratoriją per pirmąsias 3 valandas. Jei per artimiausias 3-4 valandas pasėti neįmanoma, medžiaga surenkama steriliu vatos tamponu, kuris sudrėkintas 5% glicerino tirpale izotoniniame natrio chlorido tirpale arba 2% kalio telurito tirpale.
Medžiagos paėmimas (tepinėlis nuo difterijos) atliekamas dviem vatos tamponėliais, iš kurių vienas naudojamas kultivavimui, kitas – mikroskopijai.
Įtarus difteriją, būtina informuoti laboratorijos darbuotojus, kad surinkta medžiaga būtų pasėta į atitinkamą terpę (kraujo agarą, Lefflerio terpę ar telurito terpę).
Difterijos bakterijų auginimas
Sėjama ant maistinių medžiagų (kraujo agaro, Lefflerio terpės arba telurito terpės). Didelės koncentracijos teluritas slopina lydinčios mikrofloros augimą.
Ryžiai. 2. Nuotraukoje matomas difterijos bacilų kolonijų augimas skirtingose terpėse – kraujo agare ir telurito terpėje.
Kai bakterijos auga ant kraujo agaro, kolonijos įgauna balkšvą spalvą, jos yra nepermatomos, apvalios, išgaubtos, 1 - 2 mm skersmens, dažnai riebios konsistencijos.
Kai bakterijos auga ant telurito terpės, kolonijos yra pilkos, išgaubtos ir lygiais kraštais. Po dviejų dienų kolonijos įgauna tamsiai pilką arba juodą spalvą, turi metalinį blizgesį, lygius arba šukuotus kraštus, paviršius lygus arba radialiai dryžuotas.
Difterijos biotipo (atmainos) nustatymas
Difterijos sukėlėjų padermių identifikavimas grindžiamas bakterijų gebėjimu skaidyti glikogeną ir krakmolą. Šiems tikslams naudojama „ilgoji“ angliavandenių serija.
Atsižvelgiant į patogenų fermentines charakteristikas ir kolonijų struktūrą auginant telurito terpėje, išskiriami 4 Corynebacterium diphtheriae gravis biotipai, Corynebacterium diphtheriae mittis, Corynebacterium diphtheriae intermedius ir Corynebacterium belfantiphtheria.
Ryžiai. 3. Nuotraukoje kairėje yra Corynebacterium diphtheriae gravis kolonijos. Jie dideli, centre išgaubti, radialiai dryžuoti, nelygiais kraštais. Nuotraukoje dešinėje yra Corynebacterium diphtheriae mittis. Jie yra mažo dydžio, tamsios spalvos, lygūs ir blizgūs, lygiais kraštais.
Difterijos bacilų toksikogeniškumo nustatymas
Difterijos sukėlėjų toksikogeniškumas nustatomas išskyrus bakterijų kultūrą. Šiems tikslams naudojamas difuzinio nusodinimo gelyje metodas ir bakterijų toksikogeniškumo gyvame organizme (jūrų kiaulytėse) nustatymo metodas.
Bakterioskopijos technika
Laboratorinė diagnostika naudojant mikroskopiją yra antrinė. Dėl to, kad difterijos sukėlėjai blogai įsisavina dažus, Gramo dažymas laikomas nespecifiniu, tačiau leidžia netiesiogiai identifikuoti nepatogenines korinebakterijas, kurios tepinėlyje išsidėsčiusios lygiagrečiai viena kitai.
Beicuojant pagal Neisser, išryškėja difterijos baciloms būdingi Babesch-Ernst grūdeliai, kurie išsidėstę ląstelių poliuose ir suteikia jiems kuolo išvaizdą.
Tepinėliuose patogeninės difterijos bacilos išsidėsčiusios kampu viena kitos atžvilgiu.
Babes-Ernst grūdams identifikuoti naudojamas fluorescencinės mikroskopijos metodas. Mikroskopu nudažius tepinėlius korifosfinu, galima pamatyti geltonai žalių bakterijų ląstelių kūnelių su oranžinės-raudonos volutino grūdeliais.
Ryžiai. 4. Difterijos bacilos po mikroskopu. Gramo dėmė.
Ryžiai. 5. Nuotraukoje kairėje Hoffmanno pseudodifterijos bacilos. Jie dažnai randami nosiaryklėje. Jie stori, trumpi, išsidėstę lygiagrečiai vienas kitam. Nuotraukoje dešinėje – patogeninės bakterijos. Tepinėlyje jie yra vienas kito atžvilgiu kampu.
Serologiniais tyrimais galima nustatyti antibakterinius ir antitoksinius antikūnus. Antibakterinių antikūnų aptikimas yra reikšmingas, nes antitoksino kiekis kinta nuo pirmųjų dienų naudojant antitoksinį serumą. Šiuo metu labiausiai paplitusi yra pasyvi hemagliutinacijos reakcija (RPHA ir RPHA).
Imunoglobulinai G ir M rodo infekcinio proceso sunkumą.
Imunoglobulinas G rodo neseną ligą.
Imunoglobulinai M rodo ūminę difteriją.
Sergant difterija, laikui bėgant antikūnų titras didėja. Antikūnų koncentracijos sumažėjimas rodo paciento pasveikimą.
Antikūnai prieš difteriją susidaro po vakcinacijos. Jie paskiepyto žmogaus kraujyje cirkuliuoja daugelį metų.
Difterijos diagnozė naudojant imunofluorescencinį tyrimą
Naudojant fluorescencinių antikūnų metodus, tapo įmanoma atlikti kokybinę ir kiekybinę tarpląstelinių ir paviršiaus antigenų analizę ląstelių suspensijų mėginiuose. Antigenai vizualizuojami naudojant specifinius antikūnus su fluorescenciniais žymenimis. Šią techniką gali naudoti tik aukštos kvalifikacijos darbuotojai.
Esant toksiniam širdies raumens pažeidimui, pokyčiai pastebimi širdies elektrokardiogramoje, fonokardiogramoje ir ultragarsu. Tiriamas daugelio fermentų (laktatdehidrogenazės, kreatinfosfokinazės, aspartataminotransferazės) aktyvumas.
Inkstų pažeidimas sergant difterija pasireiškia toksinės nefrozės forma. Įtarus šią komplikaciją, atliekamas bendras kraujo ir šlapimo tyrimas, biocheminiai tyrimai (kreatinino, šlapalo, likutinio azoto nustatymas), inkstų ultragarsinis tyrimas.
Toksinis kepenų pažeidimas pasireiškia hipoglikemijos (gliukozės kiekio kraujyje sumažėjimo) ir gliukozurijos (gliukozės buvimas šlapime) simptomais.
Anemijos vystymasis yra susijęs su raudonųjų kraujo kūnelių hemolize.
Antidifterinio imuniteto buvimas ar nebuvimas nustatomas naudojant intraderminį Schick testą, kuris atliekamas naudojant difterijos toksiną.
Neigiamos reakcijos atveju jie kalba apie imunitetą difterijai. Šiandien Schick reakcija naudojama tik epidemiologinėms indikacijoms. Tai užtrunka kelias dienas. Tačiau nepaisant to, tai padeda nustatyti su ligoniu bendravusių asmenų imlumo difterijai laipsnį ir išsiaiškinti jų imuninę būklę.
Ryžiai. 7. Schick reakcija atliekama su difterijos toksinu. Standartinis difterijos toksinas 0,2 ml dozėje tuberkulino švirkštu įšvirkščiamas intradermiškai į vidurinį dilbio trečdalį.
