Кръвният тест за ХИВ или тестът за ХИВ включва няколко лабораторни диагностични метода, които помагат да се определи наличието на вируса на имунната недостатъчност (HIV), да се открият антитела срещу неговите протеини (имуноглобулини) или антигени (вирусни протеини) в кръвта, слюнката или урината на пациента. Вирусът на човешката имунна недостатъчност има уникална антигенна вариабилност, която е свързана с висока степен на транскрипция (възпроизвеждане), което затруднява както диагностицирането на HIV инфекцията, така и нейната превенция.
Основата за диагностициране на ХИВ инфекцията, както всяка друга инфекциозна болест, е:
епидемиологична история,
характерни оплаквания на пациента,
клинична картина на заболяването,
данни от лабораторни методи на изследване.
След установяване на диагнозата HIV инфекция, за да се изясни естеството на хода на основното заболяване и вторичните заболявания, се извършва допълнително изследване на пациента и се предписва подходящо лечение.
Тежестта на заболяването се оценява от нивото на концентрация на вируса в кръвта, броя на CD4 лимфоцитите и определянето на антигена p24.
Основни видове диагностика на ХИВ
Вирусологична диагностика се основава на откриването на ХИВ в тъканите и биологичните течности на пациента.
Полимеразна верижна реакция (PCR) се използва за откриване на вируса и оценка на вирусния товар, което позволява да се прецени ефективността на специфичното лечение и да се предвиди хода на инфекциозното заболяване.
Серологична диагностика HIV инфекцията включва откриване на вирусни антигени и антитела в кръвния серум. Откриването на антитела срещу вируса на човешката имунна недостатъчност с помощта на ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ) е основният метод за лабораторна диагностика. Всички положителни резултати се потвърждават чрез имуноблотинг. Бърз тест за ХИВ се основава на откриването на антитела в кръвта и биологичните течности на субекта. Използва се в случаите, когато е необходимо бързо получаване на резултати.
Ниво на имуносупресия определен чрез метода за преброяване на CD4 и CD8 лимфоцити, последвано от определяне на съотношението CD4:CD8.
Всеки от лабораторните методи за диагностициране на HIV инфекцията се характеризира с определена чувствителност (% правилно идентифицирани тестове сред очевидно (+) проби) и специфичност (% правилно идентифицирани тестове сред очевидно отрицателни проби).Резултатите от теста за ХИВ се тълкуват като отрицателни, положителни или двусмислени.
Ориз. 1. На снимката вляво ХИВ заразява имунна клетка (посочена в жълто). На снимката вдясно е лимфоцит, заразен с ХИВ. Удължените структури на клетъчната повърхност са причинени от свръхпроизводство на протеини.
Ориз. 2. Снимката показва процеса на освобождаване (пъпкуване) на вириони от заразена клетка.
Всеки жител на страната ни може да направи кръвен тест за ХИВ анонимно и безплатно. Но има категории хора, които са задължени да бъдат тествани за ХИВ. Те включват:
всички донори на кръв и нейните компоненти, както и на тъкани и други биологични течности;
лица, които са претърпели трансфузия или трансплантация (извършена през първите 3 месеца след процедурата);
бременни жени;
лица, пострадали в резултат на произшествието;
лица с клинични показания - висока температура, диария, упорита кашлица и увеличение на повече от 2 групи лимфни възли, продължаващи повече от 1 месец, необяснима загуба на тегло, СПИН-асоциирани и опортюнистични инфекциозни заболявания, соматични и онкопатологии;
Чужди граждани;
лица в риск (наркомани и болни от полово предавани болести).
Всеки, който е бил изложен на ХИВ, трябва да се тества за ХИВ.
Ориз. 3. Кръвен тест за ХИВ у нас може да се направи анонимно и безплатно.
Къде да дарите кръв за ХИВ
Тест за ХИВ може да се направи безплатно в здравни заведения, работещи на бюджетна основа, ако имате паспорт и здравна осигуровка. Лекарите са длъжни да пазят медицинска тайна.Можете да се изследвате безплатно и анонимно в Центровете за превенция и контрол на СПИН и да получите медицински съвет там преди и след прегледа. Тестването за ХИВ се извършва на платена основа в търговски медицински институции. Всяко лице, временно пребиваващо на тази територия, може да си направи тест за ХИВ.
Лабораторията ще направи кръвен тест за ХИВ чрез метода на имуноензимен анализ (ELISA).
Анонимен тест за ХИВ
В обществените здравни институции (клиники и болници) не можете анонимно да направите кръвен тест за ХИВ. Информацията за резултатите от изследването ще бъде известна на тесен кръг лекари, които са задължени да пазят медицинска тайна.
В СПИН центровете съществуват стаи за анонимни тестове, където на всеки тест се присвоява номер.
Ориз. 4. Епруветките с кръв се изпращат за серологично изследване.
Принудителен тест за ХИВ
Има четири групи от населението, за които тестването за ХИВ е задължително, но не и принудително:
Донори на кръв и друг биологичен материал.
При кандидатстване за работа в институции, където служителят може да има контакт с очевидно заразен материал и пациенти.
Чужди граждани при получаване на виза за пребиваване (повече от 3 месеца) на територията на Руската федерация.
При наличие на клинични показания за лица в затвора.
Принудителното тестване на населението за ХИВ е безполезно и противоречи на зачитането на човешките права. Принудителното тестване на населението в Руската федерация е незаконно.
Ориз. 5. Изследването за ХИВ на осъдените се извършва по клинични показания.
Колко струва тестът за ХИВ?
В държавните институции тестването за ХИВ е безплатно, в частните клиники се заплаща:
Цената на ELISA варира от 400 до 800 рубли. Отговорът ще бъде готов след един ден. Има спешна диагностика, когато отговорът може да се получи в рамките на 2 часа.
Цената на теста за ХИВ по метода на имуноблот варира от 3 до 5 хиляди рубли. Резултатът ще бъде готов след 4 - 7 дни.
Цената на теста за ХИВ чрез PCR метода е 10 - 12 хиляди рубли. Резултатът ще бъде готов след 10 - 14 дни.
Колко време отнема изследването за ХИВ?
В държавните агенции крайният срок за получаване на резултатите от теста за ХИВ е:
При използване на ELISA от 3-то поколение резултатите дават най-надеждни резултати 12 седмици от момента на съмнение за инфекция.
При използване на 4-то поколение ELISA – 6 седмици.
При използване на PCR - 4 седмици.
Как да се изследваме за ХИВ
Необходимо е да се направи тест за ХИВ не по-рано от 3 до 4 седмици след предполагаемата инфекция.
Изследването се извършва не по-рано от 8 часа след хранене.
Единствената течност, която можете да пиете, е обикновена вода.
За анализ се вземат 3-5 ml кръв от лакътната вена, за която се използва обикновена спринцовка или игла с помпа.
Преди транспортиране до лабораторията кръвният серум може да се съхранява в хладилник до 7 дни. Без охлаждане не повече от 30 минути след събиране.
Транспортирането на епруветки с кръвен серум се извършва в специални термоконтейнери при температура от +4 - +8ОСЪС.
Ориз. 6. За изследване за ХИВ е необходимо да вземете 3 - 5 ml кръв, взета от антекубиталната вена - за което се използва обикновена спринцовка (снимката вляво) или игла с помпа (снимката вдясно).
При вземане на кръв от вена е невъзможно да се заразите с вируса на човешката имунна недостатъчност.
Фалшиво положителен тест за ХИВ и други видове резултати от тестове
Резултатите от теста за ХИВ могат да се тълкуват като положителни, отрицателни или двусмислени.
Съмнителен резултат от тестаза ХИВ се получава, когато в кръвния серум има антитела, които реагират кръстосано с протеини на човешкия имунодефицитен вирус. В този случай анализът се повтаря, като по време на провеждането му ще се използват по-специфични тестови системи. Ако съмнителен резултат продължава, тестването трябва да се извършва на всеки 1 до 3 месеца в продължение на шест месеца.
Положителен резултат от тест за ХИВ (серопозитивен) показва наличието на антитела срещу вируса в кръвта на изследваното лице. В този случай ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) се повтаря и ако се получи втори положителен резултат, той се потвърждава чрез имуноблотинг тест със същата кръвна проба.
Отрицателен резултат от тест за ХИВ (сероотрицателен) показва липсата на ХИВ инфекция или инфекцията е настъпила съвсем наскоро и антителата все още не са разработени в кръвта на субекта (периодът на „прозореца“). В този случай прегледът трябва да се повтори след 3 и 6 месеца.
Фалшив положителен резултат от тест за ХИВ се регистрира, когато причината не е вирусът на човешката имунна недостатъчност, а бременност, автоимунно заболяване, алергии, други инфекциозни заболявания, скорошна ваксинация, онкопатология, трансплантация на органи и дори обикновена храна (семена, пикантни, мазни и кисели храни, консумирани през деня преди и дори силно газирана минерална вода). Голям брой фалшиви положителни резултати се получават при тестване в домашни условия.
Фалшиво отрицателен резултат от тест за ХИВ показва, че вирусът присъства в кръвта на пациента, но антитела все още не са разработени.При извършване на PCR анализ може да се получи фалшиво отрицателен резултат при HIV-инфектирани пациенти по време на специфично лечение, когато концентрацията на вируси в кръвта е толкова ниска, че води до повреда на тестовата система. В повечето случаи фалшиво отрицателен резултат се получава поради техническа грешка или дефект в тест системата, което е изключително рядко поради строгия контрол на качеството на всички нива.
Тестът за ХИВ трябва да се отложи най-малко две седмици след инфекциозно заболяване или ваксинация.
Тест системи, които определят наличието на антитела срещу ХИВ
Чрез изследване за антитела срещу вируса на човешката имунна недостатъчност се оценява реакцията на организма към инфекцията. За тази цел се използва ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за откриване на антитела срещу вирусни протеини и потвърждаващ имуноблотинг анализ (Western blot), който определя реакцията на антитела към вирусни протеини.
Антитела срещу ХИВ
Вирусите на човешката имунна недостатъчност имат антигенни свойства и когато попаднат в човешкото тяло, предизвикват синтеза на антитела - специфични имуноглобулини. С помощта на съвременни тестови системи може да се определи класът имуноглобулини (антитела) в кръвния серум и други биологични течности на пациент с ХИВ. Имуноглобулините от клас IgM се появяват преди всички останали (седмица след инфекцията). Техният растеж се наблюдава в рамките на един месец и след това се задържат около 30 дни. Имуноглобулините от клас IgG циркулират в кръвта в продължение на няколко години. Откриването им е индикатор за наличие на HIV инфекция.
Антителата срещу HIV се появяват в рамките на 2-4 седмици.след инфекцията и след това се откриват в кръвта по време на цялото заболяване.
Период на "прозорец" за ХИВ
Антителата не се произвеждат веднага в тялото на заразения човек. Първоначално ХИВ инфекцията не се проявява по никакъв начин. Антителата се появяват в кръвта средно 2-3 месеца от момента на заразяването (от 2 седмици до 6 месеца). Този период се нарича „прозорец“, когато тестовете за антитела все още са отрицателни, но вирусите се размножават интензивно и самият пациент става опасен от гледна точка на заразяване на контактни лица. Инфектираният човек може да бъде идентифициран след по-кратък (1 - 2 седмици) период след заразяването, за което се използва полимеразна верижна реакция (PCR). Въпреки това, поради високата цена, този вид изследване не се използва за скрининг.
Ензимен имуноанализ за диагностика на HIV
При 90 - 95% от заразените лица антителата се появяват в кръвния серум 3 месеца след заразяването. При малка част от пациентите (5 - 9%) антителата се появяват в периода от 3 до 9 месеца и при 0,5 - 1% -. в повече от късни дати. В терминалния стадий на СПИН броят на антителата значително намалява, а в някои случаи изчезва напълно.
От 1985 г. тази техника се използва в Руската федерация за целите на масовите изследвания. Той е лесен за прилагане, показва доста точни резултати и е евтин в сравнение с други методи. Поради възможността за получаване на фалшиво положителни резултати, всички положителни резултати се изследват два пъти, след което кръвният серум на пациента се изследва с потвърдителен тест - имуноблот. Това използва същата кръвна проба. Ако има 2 положителни резултата с помощта на ELISA и имуноблот в една проба, се поставя диагноза HIV инфекция.
В Руската федерация обикновено се използват ELISA от 4-то поколение. Изследването се провежда за получаване на общия спектър от антитела срещу HIV протеини (антигени) - p24 и gp160.
Тестът вижда както антитела, които се произвеждат от тялото на пациента, така и р24 антигени (вирусни протеини). Периодът на прозореца за тестове от 4-то поколение е по-кратък. В рамките на един месец можете да получите надеждни резултати. Въпреки това, според руските здравни експерти, сроковете от 6, 8 или 12 седмици са по-надеждни.
Ориз. 8. Снимката показва ензимни имуноанализатори.
Ориз. 9. На снимката е показан автоматичен ензимен имуноанализатор.
За първоначално изследване на групи хора за откриване на HIV инфекция се използва само методът ELISA.
Имуноблотинг метод
Имуноблотинг методът е по-точен от ELISA; според повечето експерти това е референтният метод. С негова помощ в кръвния серум се откриват антитела срещу HIV протеини. Техниката се използва за потвърждаване на резултатите, получени по време на ELISA. Има висока специфичност. Фалшивите положителни резултати са редки. Надеждността на получените резултати достига 99%. Имуноблотингът е скъпа техника и изисква висока специализация на специалиста, провеждащ изследването. Могат да се получат съмнителни резултати.
Методът се основава на разделянето на HIV антигени (протеини) с помощта на електрофореза на базата на молекулно тегло. Антителата срещу капсидните протеини са първите, които се откриват по време на инфекция.гага" (p24 и p17) и прекурсора p55. Те са последвани от антитела срещу суперкапсидните протеини.Env"(гликопротеини gр 160, gр120, gр41 и протеини p88) и неструктурни протеини "Pol" (р31, р51 и р66). В някои случаи могат да бъдат открити антитела срещу гени "vpu», «vpr», «vif», «тат», «неф», «рев», «тат».
Кръвният серум на пациенти с HIV-1 и HIV-2 съдържа антитела срещу всички вирусни протеини, но за потвърждаване на диагнозата в HIV-1 се откриват само антитела към протеини p24, gp41, gp120 и gp160 и антитела към протеини gp105, gp140 и gp140 в HIV-2.
Ако има 2 положителни резултата с помощта на ELISA и имуноблот в една проба, се поставя диагноза HIV инфекция.
Ориз. 10. Апаратура за провеждане на имуноблот изследвания.
Ориз. 11. Диагнозата HIV инфекция се поставя при наличие на 2 положителни резултата чрез ELISA и имуноблот в една проба.
Един от имунологичните тестове, използвани за HIV инфекция, е методът за преброяване на CD4 и CD8 лимфоцити в кръвта.
CD4 лимфоцити (Т хелперни клетки) са засегнати от вируси на имунната недостатъчност. Постепенното изчерпване на популацията им води до намаляване на имунитета и тялото на пациента престава да устои на инфекцията. Броят на CD4 лимфоцитите се извършва чрез поточна цитометрия с помощта на автоматизирани анализатори или ръчно с помощта на оптична или флуоресцентна микроскопия. Броят на CD4 лимфоцитите определя времето за започване на специфично лечение (антиретровирусна терапия) и превенцията на опортюнистични инфекции и оценява ефективността на лечението.
Когато броят на CD4 лимфоцитите в кръвния серум е 500 или по-малко на 1 ml, това показва развитие на имунна недостатъчност.
Когато броят на CD4 лимфоцитите намалее до 200 на 1 ml (нормата е от 600 до 1900 клетки на 1 ml), се развива синдром на придобита имунна недостатъчност (СПИН).
Когато нивото на CD4 лимфоцитите спадне до 50 или по-малко на 1 μl, СПИН навлиза в терминален стадий.
Делът на CD4 лимфоцитите сред всички лимфоцити обикновено е около 40%.Намаляването на процента до 20% показва развитието на СПИН.
CD8-лимфоцити (T-killers, на английски. убиец - убиец) унищожават ХИВ вирусите чрез цитолиза. Тяхната пролиферация (увеличаване на броя) зависи от активността на Т хелперните клетки. По време на HIV инфекция броят на CD4 и CD8 лимфоцитите намалява, но нивото на CD4 лимфоцитите намалява най-много. Нормалното съотношение CD4/CD8 е 1,5 - 2,5. При намаляване на броя на CD4 лимфоцитите се наблюдава намаляване на индекса.
Стойността му по-малка от 1 показва развит имунен дефицит, съотношение 0,6 - 0,8, развива се СПИН.
При получаване на положителен резултат от теста, човек трябва да се регистрира в държавната агенция Център за превенция и контрол на СПИН, където ще се следи състоянието му и ще се предпише адекватно специфично лечение.
Ориз. 12. На снимката автоматичните анализатори на потока се използват за преброяване на CD4 лимфоцити в кръвта на изследваното лице.
През последните години молекулярно-генетичният метод за диагностициране на HIV инфекцията - полимеразна верижна реакция (PCR) - става все по-широко разпространен. С негова помощ се определя генетичният материал на патогена - РНК - още 1 - 2 седмици след предполагаемата инфекция, а високата чувствителност на теста ви позволява да откриете РНК вируси, дори ако има само няколко от тях в теста материал. Тази техника е скъпа и затова в момента не се използва за скрининг. В допълнение, значителен проблем с изследването е възможността за получаване на фалшиво положителни резултати.
Същността на PCR техниката за HIV
Същността на тази техника е да се получат множество копия на вирусната РНК (нуклеинова киселина), които впоследствие се идентифицират както по характерната им структура, така и с помощта на белязани ензими или изотопи.
Възможности за PCR за HIV инфекция
Използвайки PCR, можете да разрешите съмнителни резултати, получени при използване на техниката на имуноблотинг, да диагностицирате HIV инфекцията в ранните етапи (още 1-2 седмици след предполагаемата инфекция), да наблюдавате ефективността на антиретровирусната терапия и да определите стадия на заболяването .
Препоръчва се PCR тестове да се правят 4 седмици от датата на очаквания риск.
Ориз. 13. На снимката вляво е нормален Т-лимфоцит, вдясно е Т-лимфоцит, заразен с ХИВ. Виждат се множество мехурчета, между които са се появили новообразувани вируси (малки заоблени образувания). Използвайки PCR, HIV инфекцията се открива в рамките на 1 - 2 седмици след предполагаемата инфекция.
Предимства на PCR техниката за HIV
С помощта на PCR е възможно да се открие самият вирус и неговото количество.
Възможност за употреба при деца под година и половина.
Оценете ефективността на лечението.
Определете тежестта и прогнозата на заболяването.
Недостатъци на PCR технологията за ХИВ
Висока цена на изследването.
Наличие на специализирани лаборатории.
Продължителност на получаване на резултати (до 4 седмици).
Кой се нуждае от PCR?
Получаване на резултата до 7-10 дни за лица при съмнение за инфекция, когато е желан резултат за кратко време.
За определяне на началната дата и оценка на ефективността на лечението.
PCR се извършва на инфектирани бременни жени 4 седмици преди раждането, за да се реши дали да се приложи цезарово сечение.
Новородени от заразени майки. Положителният резултат два пъти показва, че детето е заразено.
При нормални условия PCR не се използва за скрининг и диагностика на HIV инфекция.
РНК PCR и ДНК PCR. Каква е разликата
РНК PCR доказва наличието на вируса на имунната недостатъчност в кръвта и обема на откритата РНК. Това изследване се използва при диагностицирани лица за оценка на ефективността на терапията.
С помощта на ДНК PCR се определя наличието на вируса в мононуклеарните клетки при деца, когато антителата срещу вируса на човешката имунна недостатъчност в майката предотвратяват използването на метода ELISA.
Вирусно натоварване
Вирусният товар се определя чрез преброяване на броя на копията на РНК в 1 ml кръвна плазма, което позволява да се определи стадият на заболяването, да се анализира проведеното специфично лечение и да се определи тежестта и прогнозата на заболяването. Колкото по-високо е вирусното натоварване, толкова по-малко CD4 лимфоцити се записват в кръвната плазма.
Тълкуване на резултатите:
РНК или не се открива, или броят на РНК копията е по-малък от 20 на ml. плазма.
РНК се открива на границата на чувствителност - под 20 копия/мл.
РНК от 20 до 106 копия в 1 ml кръвна плазма показва надеждността на резултата.
Повече от 10 РНК копия6ml е горната граница на линейния диапазон.
Увеличаването на вирусния товар при пациент с HIV инфекция три или повече пъти е клинично значим резултат.
Проследяването на вирусния товар се извършва на всеки 3 месеца при пациенти, които все още не са на лечение. Ако се започне антиретровирусна терапия, контролът се извършва след 2-8 седмици.
Ориз. 14. PCR става все по-популярен през последните години.
Ориз. 15. Усилватели за PCR.
Тестът за ХИВ трябва да се извършва в ранните стадии на инфекцията и периодично по време на заболяването, което ще осигури навременно прилагане на антиретровирусна терапия за предотвратяване на развитието на опасни инфекциозни и онкологични процеси.
Вирусите, тяхната РНК, ДНК, антигени и антитела могат да бъдат открити не само в кръвния серум, но и в спермата, слюнката, вагиналното съдържимо и др. ХИВ се култивира в култура от лимфоцитни клетки. Техниката е с висока чувствителност и специфичност (до 100%), но високата цена на изследването не позволява използването й в ежедневната лабораторна работа.
В резултат на увреждане на хематопоетичните органи от човешки имунодефицитен вирус се наблюдава инхибиране на хемопоезата, което се проявява чрез намаляване на броя на лимфоцитите (лимфопения), неутрофили (неутропения), тромбоцити (тромбопения) и анемия. В допълнение, унищожаването на клетъчните популации се влияе от автоимунни процеси, които се развиват при HIV-инфектирани пациенти. IgG имуноглобулините преобладават в кръвния серум на пациентите.
Ориз. 16. Вземане на кръв от вена и пръст за изследване.
Днес всеки може да направи тест за ХИВ анонимно и безплатно за няколко минути, а модерното оборудване и обученият персонал ви позволяват да получите най-точните резултати.
