Тестът за сифилис е един от най-честите лабораторни тестове. Тестовете за сифилис се използват широко при профилактични прегледи. С помощта на микроскопия се идентифицира причинителят на сифилис - Treponema pallidum.С помощта на серологични реакции се потвърждава диагнозата сифилис, установява се диагнозата латентен сифилис, проследява се ефективността на лечението и се определя излекуване на пациентите.
Диагнозата на сифилис се установява въз основа на клинични данни, откриване на патогени на сифилис в материални проби и потвърждаване на диагнозата чрез серологични методи на изследване. Проявите на сифилис са многобройни и разнообразни, поради което заболяването се диагностицира от лекари с различни специалности. Диференциалната диагноза на първичния сифилис се извършва с редица заболявания.
Ориз. 1. На снимката основната проява на сифилис е шанкър.
Антитела срещу Treponema pallidum и серологична диагностика
При заразяване със сифилис в тялото на пациента се образуват антитела. Серологичната диагностика помага на лекаря да проучи динамиката на образуването на антитела в тялото на пациент със сифилис в началния стадий на заболяването, по време на лечението и след неговото завършване, за да разреши въпроса за рецидив на заболяването при пациента. или повторна инфекция (реинфекция), за диагностициране на сифилис при масови медицински състояния.
Антитела срещу Treponema pallidum IgM
IgM антителата са първите, които се произвеждат след инфекцията. Те започват да се откриват с помощта на серологични реакции от втората седмица след инфекцията. На 6-9 седмица от заболяването техният брой става максимален. Ако пациентът не се лекува, антителата изчезват след шест месеца. IgM антителата изчезват след 1-2 месеца. след лечение на ранен сифилис, след 3 - 6 месеца. - след лечение на късен сифилис. Ако се регистрира техният растеж, това е признак на рецидив на сифилис или показва повторна инфекция. Молекулите IgM са големи и не преминават през плацентата до плода.
Антитела срещу Treponema pallidum IgG
IgG имуноглобулиновите антитела се появяват в края на първия месец (4-та седмица) от момента на заразяването. Техният титър е по-висок от титъра на IgM. IgG се запазва след лечението доста дълго време.
Неспецифични антитела
Има много серологични реакции. Това се обяснява с антигенната множественост на Treponema pallidum. В кръвния серум на болен човек на различни етапи на сифилис, в допълнение към специфичните, се образуват някои неспецифични антитела - аглутинини, комплемент-фиксиращи, имобилизини, антитела, които причиняват имунна флуоресценция, преципитини и др. Серологични реакции за откриване на неспецифични антитела имат относителна специфичност; следователно, за да избегнете диагностични грешки, трябва да използвате не само една, а комплекс от серологични реакции (SRR).
Фалшиви положителни тестове за сифилис
Отличителна черта на нетрепонемните тестове е получаването на фалшиво положителни реакции. Антителата-реагини, които се произвеждат в човешката кръв срещу кардиолипиновия антиген, се регистрират не само при сифилис, но и при други заболявания: колагеноза, хепатит, бъбречни заболявания, тиреотоксикоза, рак, инфекциозни заболявания (проказа, туберкулоза, бруцелоза, малария, тиф, скарлатина), по време на бременност и менструален цикъл, при прием на мазни храни и алкохол. Беше отбелязано, че броят на фалшиво положителните реакции се увеличава с възрастта.
Ориз. 2. Снимката показва първичен сифилис при жени.
Лабораторна диагностика на сифилис с помощта на серологични тестове
Серологичните тестове за сифилис са разделени на трепонемни и нетрепонемни.
1. Нетрепонемни тестове
Антигенът, използван в тази група тестове, е кардиолипинов антиген. Липидните антигени на патогените на сифилис са най-многобройни. Те съставляват 1/3 от сухата маса на клетката. С помощта на нетрепонемни тестове се откриват реагинови антитела, които се произвеждат срещу кардиолипиновия антиген. Тази група включва тест за фиксиране на комплемента (FFR), тест за микропреципитация (MPR), бърз тест за плазмен реагин (RPR) и др. С помощта на нетрепонемни тестове се извършва първичен скрининг за сифилис (проучване на групи от населението) и възможността получаването на резултати в количествена форма позволява тези тестове да се използват за проследяване на ефективността на лечението. Положителните резултати от нетрепонемни тестове трябва да бъдат потвърдени с трепонемни тестове. Отличителна черта на нетрепонемните тестове е получаването на фалшиво положителни реакции.
2. Трепонемни тестове
Трепонемните тестове използват антигени с трепонемален произход, изолирани от култура на Treponema pallidum. С тяхна помощ се потвърждават положителните резултати от нетрепонемните тестове. Групата включва: RSKtrep - реакция на фиксиране на комплемента, RIF - реакция на имунофлуоресценция и нейните модификации, RIT, RIBT - реакция на имобилизация на Treponema pallidum, RPHA - реакция на пасивна хемаглутинация, ELISA - ензимно-свързан имуносорбентен анализ.
3. Тестове за сифилис с използване на рекомбинантни антигени
Антигените за тази група тестове се получават чрез генно инженерство и се използват в реакции - RPGA и ELISA, в имуноблотинг (IB) анализи и имунохроматографски анализ.
Ориз. 3. За диагностициране на сифилис се използва набор от серологични тестове.
Диагностика на сифилис с помощта на нетрепонемни тестове
За откриване на сифилис се използват нетрепонемни тестове или комплекс от серологични реакции (SSR). Серологичната диагностика се използва от 5-та седмица от момента на инфекцията или от 2-3 седмици след появата на шанкра. Антитела се откриват при почти всички пациенти с пресен първичен, вторичен и рецидивиращ сифилис. Серологичните реакции са положителни при 70-80% от пациентите с третичен активен сифилис, в 50-60% от случаите при пациенти с третичен латентен сифилис.
Серологичните тестове, използващи нетрепонемни тестове, могат да дадат фалшиво положителни резултати.
Ориз. 4. Вземане на кръв за изследване за сифилис.
Реакция на фиксиране на комплемента (RSK карта, KSK с KA, реакция на Васерман)
Реакцията на Васерман (RW, РВ), изобретена от А. Васерман преди повече от 100 години, днес е претърпяла много промени, но като почит към традицията е запазила името си до наши дни. Реакцията на фиксиране на комплемента с помощта на кардиолипинов антиген е предназначена не само за откриване на антитела, но също така се извършва количествено - с различни серумни разреждания, което позволява да се използва за проследяване на ефективността на лечението. Ниската чувствителност и специфичност, получаването на фалшиво положителни резултати са отрицателните страни на този вид изследване.
Същността на реакцията на Васерман е следната: антигените, които се използват за поставяне на реакцията на Васерман, в случай на наличие на антитела срещу причинителите на сифилис в човешката кръв, се свързват с тях чрез комплимент и се утаяват. Интензивността на реакцията се обозначава със знак (+).Реакцията може да бъде отрицателна (-) - без утайка, съмнителна (малка утайка или +), слабо положителна (++), положителна (+++) и силно положителна (++++).
Модифицираната реакция на Васерман, реакцията на Колмер, е по-чувствителна. С негова помощ се откриват антитела в серуми, където реакцията на Васерман е дала отрицателен резултат.
В случай на рязко положителни реакции се извършва количествено определяне на реагини, за които се използва серум в разреждания от 1:10 до 1:320, което позволява използването на този тип изследване за наблюдение на ефективността на лечението. Например, намаляването на титъра на антителата и последващата им серонегативност (получаване на отрицателни резултати) показва успешно излекуване на заболяването.
Ориз. 5. Кръвен тест за сифилис - реакция на Васерман.
Реакция на микроутаяване (MPR)
Микрореакцията на утаяване се използва за масови прегледи на определени групи от населението, диагностика на сифилис и наблюдение на ефективността на лечението. За провеждане на този вид изследване е необходимо малко количество тестов материал. Микрореакцията на утаяването се основава на имунологичната реакция антиген-антитяло. Ако в кръвния серум на субекта присъстват антитела, комплексът антиген-антитяло се утаява, образувайки люспи. Реакцията се провежда в ямките на специална стъклена плака. Оценява се по интензитета на утайката и размера на люспите в (+) като реакция на Васерман. Не се използва при изследване на бременни жени, донори и за проследяване на ефективността на лечението. VDRL и RPR са видове микрореакции.
Ориз. 6. Тип реакция на утаяване в капка върху стъкло.
Ориз. 7. Кръвен тест за сифилис - реакция на микропреципитация.
Ориз. 8.Комплект за бързо определяне на плазмени реагини (RPR тест за сифилис).
Всички положителни тестове, получени по време на неспецифични серологични реакции, изискват потвърждение чрез специфични реакции - трепонемни тестове.
При провеждане на трепонемни тестове се използват антигени от трепонемален произход. Отрицателната им страна е невъзможността да се използват за наблюдение на ефективността на лечението, получаване на положителни резултати при спирохетоза и невенерически трепонематози и получаване на фалшиви положителни резултати при онкологични заболявания, проказа и някои ендокринни патологии. Тестове като RPGA, ELISA и RIF остават положителни много години след излекуването на сифилиса, а в някои случаи и за цял живот.
RIBT и RIF са най-специфичните от всички серологични реакции, използвани за диагностициране на сифилис. Те позволяват да се разграничат фалшиво положителните реакции и да се идентифицират късните форми на сифилис, които протичат с отрицателни реакции. С помощта на RIBT се разпознават фалшиво положителни реакции при бременни жени, когато е необходимо да се реши проблемът с инфекцията на детето.
Реакция на имобилизация на Treponema pallidum (RIBT, RIT)
Същността на реакцията е, че антителата в кръвния серум на пациента обездвижват Treponema pallidum. Реакцията се счита за отрицателна, когато до 20% от патогените са имобилизирани, слабо положителни - 21 - 50%, положителни - 50 - 100%. RIBT понякога дава фалшиви положителни резултати.Тестът е сложен и трудоемък, но е незаменим при диференциалната диагноза на латентни форми на заболяването и фалшиво положителни резултати от серологични реакции, включително при бременни жени. RIBT дава 100% положителен резултат за вторичен, ранен и късен сифилис, в 94 - 100% от случаите - за други форми на сифилис.
Имунофлуоресцентна реакция (RIF)
Същността на реакцията е, че treponema pallidum (антигени), комбинирани с антитела, маркирани с флуорохроми, излъчват жълто-зелено сияние във флуоресцентен микроскоп. Резултатът се оценява със знак (+). С помощта на RIF имуноглобулините от клас А се откриват по-рано от реакцията на Васерман. Винаги е положителен при вторичен и латентен сифилис, в 95 - 100% от случаите е положителен при третичен и вроден сифилис. Техниката за провеждане на този тип изследвания е по-проста от тази на RIBT, но е невъзможно да се замени RIF с RIBT, тъй като тази реакция е по-ниска от RIBT по специфичност. RIF-10 (модификация на RIF) е по-чувствителен, RIF-200 и RIF-abs са по-специфични.
Ориз. 9. Кръвен тест за сифилис - имунофлуоресцентна реакция (РИФ).
Същността на реакцията е, че treponema pallidum, сенсибилизирана от серума на пациента, в присъствието на комплемент, се придържа към повърхността на червените кръвни клетки. Получените комплекси се утаяват по време на центрофугиране. Чувствителността и специфичността на този тест са близки до RIF и RIBT.
Ензимен имуноанализ за сифилис (ELISA)
С помощта на ELISA се определят имуноглобулини от клас M и G - техниката ELISA може да се използва като скрининг и потвърждаващ тест.Чувствителността на ELISA и неговата специфичност са подобни на RIF. За сифилис ELISA дава положителни резултати от третия месец на инфекцията и остава положителен за доста дълго време (понякога през целия живот).
Ориз. 10. Ензимен имуноанализатор.
Реакция на пасивна (индиректна) хемаглутинация (RPHA)
RPHA се основава на способността на червените кръвни клетки, върху които са адсорбирани антигените на treponema pallidum, да се слепват (хемаглутинация) в присъствието на серум на пациента. RPGA се използва за диагностициране на всички форми на сифилис, включително латентен. Когато се използва висококачествен антиген, този тип серологична реакция надхвърля всички други тестове по специфичност и чувствителност.
Ориз. 11. RPGA се използва за диагностициране на всички форми на сифилис.
Ориз. 12. Изследване за сифилис - реакция на пасивна (индиректна) хемаглутинация (схема).
Ориз. 13. Появата на обърнат чадър, заемащ цялото дъно на епруветката, показва положителна реакция. В случай, че червените кръвни клетки се установят в колона („бутон“) в центъра на дъното на епруветката, се показва отрицателна реакция.
Заедно със серологичната диагноза, методът за откриване на Treponema pallidum (микробиологична диагноза) играе важна роля, особено в периода на серонегативен сифилис, когато все още няма антитела в кръвта, но вече има първите прояви на пресен първичен сифилис ( шанкроид).
Биологичният материал за изследването е изхвърляне от повърхността на твърди язви (шанкъри), съдържанието на пустулозни сифилиди, плачещи и ерозивни папули, пункции на инфектирани лимфни възли, цереброспинална течност и амниотична течност за PCR;
Най-добрият метод за откриване на патогени на сифилис е изследването на биологичен материал в микроскоп с тъмно поле. Тази техника ви позволява да видите treponema pallidum в живо състояние, да проучите неговите структурни характеристики и движение и да разграничите патогенните патогени от сапрофитите.
Ориз. 15. Анализ за сифилис - микроскопия в тъмно поле.
Ориз. 16. При изследване на сухи петна се използва оцветяване по Романовски-Гимза. Бледите трепонеми стават розови, всички други видове спирохети стават лилави.
Откриването на Treponema pallidum чрез микроскопия в тъмно поле е абсолютен критерий за окончателната диагноза на сифилис.
Ориз. 17. За идентифициране на бактерии се използва имунофлуоресцентна реакция (RIF) - трепонемален тест. Специфичен комплекс антиген-антитяло, когато се комбинира със специфичен серум, белязан с флуорохром, в светлината на флуоресцентен микроскоп придава на бактериите зеленикаво сияние.
Ориз. 18. Причинителите на сифилис са ясно видими в намазки, приготвени по метода Levaditi (импрегниране със сребро). Бледата трепонема е тъмна на фона на жълтия цвят на клетките на заразените тъкани.
Ориз. 19. Причинителят на сифилис при многократно увеличение.
Ориз. 20. Снимката показва колония от Treponema pallidum. Трудно е да се получи бактериална култура. Те практически не растат върху изкуствени хранителни среди. В среда, съдържаща конски и заешки серум, колониите се появяват на 3-9 дни.
Днес техниката на полимеразна верижна реакция е ефективна и обещаваща.PCR за сифилис ви позволява да получите резултати в рамките на няколко часа и в материала, събран за диагностика, може да има поне няколко патогена.
Ориз. 21. PCR за сифилис може да открие ДНК или нейни фрагменти от Treponema pallidum.
Чувствителността на този метод на изследване зависи от наличието на Treponema pallidum в биологичния материал и достига 98,6%. Специфичността на този тест до голяма степен зависи от правилния избор на мишена за усилване по време на диагностиката и достига 100%.
В същото време, поради недостатъчно проучени сравнителни характеристики на чувствителността и специфичността на директните методи за диагностика на сифилис и PCR, този метод на изследване в Руската федерация за диагностициране на заболяването все още не е одобрен.
PCR за сифилис е разрешено да се извършва само в някои случаи, като допълнителен метод за диагностициране на вроден сифилис, невросифилис, ако е трудно да се диагностицира сифилис с помощта на серологични методи при пациенти с HIV.
Ориз. 22. Откриването на ДНК на Treponema pallidum с помощта на PCR показва или наличието на жизнеспособни бактерии, или останки от мъртви бактерии, но съдържащи отделни участъци от хромозомна ДНК, способни да образуват допълнителни копия.
