Krevní test na HIV neboli HIV test zahrnuje několik laboratorních diagnostických metod, které pomáhají určit přítomnost viru imunodeficience (HIV), detekovat protilátky proti jeho proteinům (imunoglobuliny) nebo antigeny (virové proteiny) v krvi, slinách nebo moči pacienta. Virus lidské imunodeficience má unikátní antigenní variabilitu, která je spojena s vysokou mírou transkripce (reprodukce), což ztěžuje jak diagnostiku infekce HIV, tak její prevenci.
Základem pro diagnostiku infekce HIV, stejně jako jakékoli jiné infekční nemoci, je:
epidemiologická anamnéza,
charakteristické stížnosti pacienta,
klinický obraz onemocnění,
údaje z laboratorních výzkumných metod.
Po stanovení diagnózy infekce HIV se za účelem objasnění povahy průběhu základního onemocnění a sekundárních onemocnění provádí další vyšetření pacienta a předepisuje se vhodná léčba.
Závažnost onemocnění se posuzuje podle hladiny koncentrace viru v krvi, počtu CD4 lymfocytů a stanovení antigenu p24.
Hlavní typy diagnostiky HIV
Virologická diagnostika je založen na detekci HIV v tkáních a biologických tekutinách pacienta.
Polymerázová řetězová reakce (PCR) slouží k detekci viru a posouzení virové zátěže, což umožňuje posoudit účinnost specifické léčby a předpovědět průběh infekčního onemocnění.
Sérologická diagnostika Infekce HIV zahrnuje detekci virových antigenů a protilátek v krevním séru. Detekce protilátek proti viru lidské imunodeficience pomocí ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) je hlavní metodou laboratorní diagnostiky. Všechny pozitivní výsledky jsou potvrzeny imunoblotem. Rychlý test na HIV je založena na detekci protilátek v krvi a biologických tekutinách subjektu. Používá se v případech, kdy je nutné rychle získat výsledky.
Úroveň imunosuprese stanoveno metodou počítání CD4 a CD8 lymfocytů s následným stanovením poměru CD4:CD8.
Každá z laboratorních metod diagnostiky HIV infekce se vyznačuje určitou senzitivitou (% správně identifikovaných testů mezi zjevně (+) vzorky) a specificitou (% správně identifikovaných testů mezi zjevně negativními vzorky).Výsledky testu HIV jsou interpretovány jako negativní, pozitivní nebo nejednoznačné.
Rýže. 1. Na fotografii vlevo HIV infikuje imunitní buňku (označeno žlutě). Na fotografii vpravo je lymfocyt infikovaný HIV. Protáhlé struktury na buněčném povrchu jsou způsobeny nadprodukcí bílkovin.
Rýže. 2. Fotografie ukazuje proces uvolňování (pučení) virionů z infikované buňky.
Každý obyvatel naší země může anonymně a zdarma provést krevní test na HIV. Existují však kategorie lidí, kteří musí být testováni na HIV. Tyto zahrnují:
všichni dárci krve a jejích složek, jakož i tkání a jiných biologických tekutin;
osoby, které podstoupily transfuzi nebo transplantaci (provedenou během prvních 3 měsíců po výkonu);
těhotná žena;
osoby zraněné v důsledku nehody;
osoby s klinickými indikacemi - horečka, průjem, přetrvávající kašel a zvětšení více než 2 skupin lymfatických uzlin, trvající déle než 1 měsíc, nevysvětlitelný úbytek hmotnosti, oportunní infekční onemocnění spojená s AIDS, somatická a onkopatologie;
Cizí občané;
ohrožené osoby (narkomani a osoby trpící pohlavně přenosnými chorobami).
Každý, kdo byl vystaven HIV, by měl být testován na HIV.
Rýže. 3. Krevní test na HIV u nás lze absolvovat anonymně a zdarma.
Kde darovat krev na HIV
HIV test lze provést zdarma ve zdravotnických zařízeních fungujících na základě rozpočtu, pokud máte cestovní pas a zdravotní pojištění. Lékaři jsou povinni zachovávat lékařské tajemství.V Centrech prevence a kontroly AIDS se můžete nechat bezplatně a anonymně otestovat a získat tam lékařskou pomoc před a po vyšetření. Testování na HIV se provádí za úplatu v komerčních zdravotnických zařízeních. Test na HIV může podstoupit každá osoba dočasně pobývající na tomto území.
Laboratoř provede krevní test na HIV metodou enzymové imunoanalýzy (ELISA).
Anonymní test na HIV
Ve veřejných zdravotnických zařízeních (klinikách a nemocnicích) nemůžete anonymně podstoupit krevní test na HIV. Informace o výsledcích studie budou známy úzkému okruhu lékařů, kteří jsou povinni zachovávat lékařské tajemství.
V AIDS centrech existují anonymní testovací místnosti, kde je každému testu přiděleno číslo.
Rýže. 4. Zkumavky s krví se zasílají na sérologické vyšetření.
Nucený test na HIV
Existují čtyři skupiny populace, pro které je testování na HIV povinné, ale ne vynucené:
Dárci krve a jiného biologického materiálu.
Při ucházení se o práci v institucích, kde může dojít ke kontaktu zaměstnance se zjevně infikovaným materiálem a pacienty.
Zahraniční občané po obdržení víza k pobytu (více než 3 měsíce) na území Ruské federace.
Pokud existují klinické indikace pro osoby ve věznici.
Nucené testování populace na HIV je marné a je v rozporu s dodržováním lidských práv. Nucené testování populace v Ruské federaci je nezákonné.
Rýže. 5. Testování na HIV u odsouzených se provádí podle klinických indikací.
Kolik stojí test na HIV?
Ve státních institucích je testování na HIV zdarma, na soukromých klinikách se platí:
Náklady na ELISA se pohybují od 400 do 800 rublů. Odpověď bude připravena po jednom dni. Existuje urgentní diagnóza, kdy lze odpověď obdržet do 2 hodin.
Náklady na test HIV pomocí metody imunoblot se pohybují od 3 do 5 tisíc rublů. Výsledek bude hotový za 4 - 7 dní.
Náklady na test HIV pomocí metody PCR jsou 10 - 12 tisíc rublů. Výsledek bude hotový za 10 - 14 dní.
Jak dlouho trvá testování na HIV?
Ve vládních agenturách je konečný termín pro obdržení výsledků testů na HIV:
Při použití ELISA 3. generace dávají výsledky nejspolehlivější výsledky 12 týdnů od okamžiku podezření na infekci.
Při použití ELISA 4. generace – 6 týdnů.
Při použití PCR - 4 týdny.
Jak se nechat testovat na HIV
Test na HIV je nutné provést nejdříve 3 až 4 týdny po podezření na infekci.
Testování se provádí nejdříve 8 hodin po jídle.
Jediná tekutina, kterou můžete pít, je obyčejná voda.
Pro rozbor se odebere 3 - 5 ml krve z ulnární žíly, k čemuž se používá běžná injekční stříkačka nebo jehla s pumpičkou.
Před transportem do laboratoře lze krevní sérum uchovávat v chladničce po dobu až 7 dnů. Bez chlazení ne více než 30 minut po odběru.
Přeprava zkumavek s krevním sérem se provádí ve speciálních termonádobách při teplotě +4 - +8ÓS.
Rýže. 6. K testování na HIV je potřeba odebrat 3 - 5 ml krve odebrané z předloktní žíly - k tomu se používá běžná injekční stříkačka (foto vlevo) nebo jehla s pumpičkou (foto vpravo).
Při odběru krve ze žíly je nemožné se nakazit virem lidské imunodeficience.
Falešně pozitivní test na HIV a další typy výsledků testů
Výsledky testů na HIV lze interpretovat jako pozitivní, negativní nebo nejednoznačné.
Pochybný výsledek testupro HIV se získává, když jsou v krevním séru protilátky, které zkříženě reagují s proteiny viru lidské imunodeficience. V tomto případě se analýza opakuje a při jejím provádění budou použity specifičtější testovací systémy. Pokud pochybný výsledek přetrvává, testování by mělo být prováděno každé 1 až 3 měsíce po dobu šesti měsíců.
Pozitivní výsledek testu na HIV (séropozitivní) indikuje přítomnost protilátek proti viru v krvi testované osoby. V tomto případě se enzymová imunoanalýza (ELISA) opakuje a v případě druhého pozitivního výsledku je potvrzena imunoblotovacím testem se stejným krevním vzorkem.
Negativní výsledek testu na HIV (séronegativní) označuje nepřítomnost infekce HIV nebo k infekci došlo poměrně nedávno a v krvi subjektu se ještě nevytvořily protilátky (období „okna“). V tomto případě by se mělo vyšetření opakovat po 3 a 6 měsících.
Falešně pozitivní výsledek testu na HIV je registrován, když jeho příčinou nebyl virus lidské imunodeficience, ale těhotenství, autoimunitní onemocnění, alergie, jakékoli jiné infekční onemocnění, nedávné očkování, onkopatologie, transplantace orgánů a dokonce i běžné potraviny (semena, kořeněná, tučná a kyselá jídla zkonzumovaná v daný den před, a dokonce i vysoce sycené minerální vody). Při domácím testování se získá velké množství falešně pozitivních výsledků.
Falešně negativní výsledek testu na HIV znamená, že virus je přítomen v krvi pacienta, ale protilátky ještě nebyly vyvinuty.Při provádění analýzy PCR může dojít k falešně negativnímu výsledku u pacientů infikovaných HIV během období specifické léčby, kdy je koncentrace virů v krvi tak nízká, že to vede k selhání testovacího systému. Ve většině případů je falešně negativní výsledek získán kvůli technické chybě nebo závadě v testovacím systému, což je extrémně vzácné kvůli přísné kontrole kvality na všech úrovních.
Test na HIV by měl být odložen nejméně o dva týdny po infekčním onemocnění nebo očkování.
Testovací systémy, které určují přítomnost protilátek proti HIV
Testováním protilátek proti viru lidské imunodeficience se posuzuje reakce těla na infekci. K tomuto účelu se používá enzymová imunoanalýza (ELISA) k detekci protilátek proti virovým proteinům a konfirmační imunoblotovací analýza (Western blot), která určuje reakci protilátek na virové proteiny.
Protilátky proti HIV
Viry lidské imunodeficience mají antigenní vlastnosti a při vstupu do lidského těla způsobují syntézu protilátek - specifických imunoglobulinů. Pomocí moderních testovacích systémů lze určit třídu imunoglobulinů (protilátek) v krevním séru a dalších biologických tekutinách pacienta s HIV. Imunoglobuliny třídy IgM se objevují dříve než všichni ostatní (týden po infekci). Jejich růst je pozorován do měsíce a poté přetrvávají asi 30 dní. Imunoglobuliny třídy IgG cirkulují v krvi několik let. Jejich detekce je indikátorem přítomnosti infekce HIV.
Protilátky proti HIV se objeví během 2–4 týdnů.po infekci a pak jsou detekovány v krvi po celou dobu onemocnění.
Období „okna“ pro HIV
Protilátky se v těle infikované osoby nevytvářejí okamžitě. Infekce HIV se zpočátku nijak neprojevuje. Protilátky se objevují v krvi v průměru 2 - 3 měsíce od okamžiku infekce (od 2 týdnů do 6 měsíců). Toto období se nazývá „okno“, kdy jsou testy na protilátky stále negativní, ale viry se intenzivně množí a samotný pacient se stává nebezpečným z hlediska nakažení kontaktních osob. Infikovanou osobu lze identifikovat po kratší době (1 - 2 týdny) po infekci, k čemuž se používá polymerázová řetězová reakce (PCR). Vzhledem k vysoké ceně se však tento typ studie pro screening nepoužívá.
Enzymová imunoanalýza pro diagnostiku HIV
U 90 - 95 % infikovaných jedinců se protilátky objeví v krevním séru 3 měsíce po infekci U malé části pacientů (5 - 9 %) se protilátky objeví v období od 3 do 9 měsíců a u 0,5 - 1 % -. ve více než pozdních termínech. V terminálním stadiu AIDS se počet protilátek výrazně snižuje, v některých případech zcela vymizí.
Od roku 1985 se tato technika používá v Ruské federaci za účelem masového výzkumu. Je snadno implementovatelný, ukazuje poměrně přesné výsledky a je levný ve srovnání s jinými metodami. Vzhledem k možnosti získání falešně pozitivních výsledků jsou všechny pozitivní výsledky vyšetřeny dvakrát, poté je pacientovo krevní sérum vyšetřeno potvrzujícím testem - imunoblotem. To používá stejný vzorek krve. Pokud jsou v jednom vzorku 2 pozitivní výsledky pomocí ELISA a imunoblotu, je stanovena diagnóza infekce HIV.
V Ruské federaci se obvykle používají ELISA 4. generace. Studie se provádí za účelem získání celkového spektra protilátek proti HIV proteinům (antigenům) - p24 a gp160.
Test vidí jak protilátky, které jsou produkovány tělem pacienta, tak antigeny p24 (virové proteiny). Období okna pro testy 4. generace je kratší. Za měsíc můžete získat spolehlivé výsledky. Podle ruských odborníků na zdravotnictví jsou však spolehlivější termíny 6, 8 nebo 12 týdnů.
Rýže. 8. Fotografie ukazuje analyzátory enzymové imunoanalýzy.
Rýže. 9. Fotografie ukazuje automatický analyzátor enzymové imunoanalýzy.
Pro prvotní vyšetření skupin osob k detekci HIV infekce se používá pouze metoda ELISA.
Imunoblotovací metoda
Metoda imunoblotování je podle většiny odborníků přesnější než ELISA; S jeho pomocí jsou v krevním séru detekovány protilátky proti proteinům HIV. Tato technika se používá k potvrzení výsledků získaných během ELISA. Má vysokou specifičnost. Falešně pozitivní výsledky jsou vzácné. Spolehlivost získaných výsledků dosahuje 99 %. Imunoblotting je nákladná technika a vyžaduje vysokou specializaci odborníka provádějícího studii. Mohou být získány sporné výsledky.
Metoda je založena na separaci HIV antigenů (proteinů) pomocí elektroforézy na základě molekulové hmotnosti. Jako první jsou během infekce detekovány protilátky proti kapsidovým proteinům.Gag" (p24 a p17) a prekurzor p55. Po nich následují protilátky proti superkapsidovým proteinům.Env"(glykoproteiny gр 160, gр120, gр41 a proteiny p88) a nestrukturální proteiny "Pol" (р31, р51 a р66). V některých případech lze detekovat protilátky proti genům.vpu», «vpr», «vif», «tat», «nef», «rev», «tat».
Krevní sérum pacientů s HIV-1 a HIV-2 obsahuje protilátky proti všem virovým proteinům, ale pro potvrzení diagnózy jsou u HIV-1 detekovány pouze protilátky proti proteinům p24, gp41, gp120 a gp160 a protilátky proti proteinům gp105, gp140 a gp140 u HIV-2 gr36.
Pokud jsou v jednom vzorku 2 pozitivní výsledky pomocí ELISA a imunoblotu, je stanovena diagnóza infekce HIV.
Rýže. 10. Zařízení pro provádění imunoblotového výzkumu.
Rýže. 11. Diagnóza infekce HIV se stanoví za přítomnosti 2 pozitivních výsledků pomocí ELISA a imunoblotu v jednom vzorku.
Jedním z imunologických testů používaných při infekci HIV je metoda počítání CD4 a CD8 lymfocytů v krvi.
CD4 lymfocyty (pomocné T buňky) jsou ovlivněny viry imunodeficience. Postupné vyčerpání jejich populace vede ke snížení imunity a tělo pacienta přestává odolávat infekci. Počty lymfocytů CD4 se provádějí průtokovou cytometrií pomocí automatických analyzátorů nebo ručně pomocí optické nebo fluorescenční mikroskopie. Počet CD4 lymfocytů určuje dobu zahájení specifické léčby (antiretrovirová terapie) a prevenci oportunních infekcí a hodnotí účinnost léčby.
Když je počet CD4 lymfocytů v krevním séru 500 nebo méně na 1 ml, ukazuje to na rozvoj imunodeficience.
Když počet CD4 lymfocytů klesne na 200 na 1 ml (norma je od 600 do 1900 buněk na 1 ml), rozvíjí se syndrom získané imunodeficience (AIDS).
Když hladina CD4 lymfocytů klesne na 50 nebo méně na 1 μl, AIDS vstupuje do terminálního stadia.
Podíl CD4 lymfocytů mezi všemi lymfocyty je normálně asi 40 %.Pokles míry na 20 % ukazuje na rozvoj AIDS.
CD8-lymfocytů (T-killers, v angličtině. zabiják - zabiják) ničí viry HIV cytolýzou. Jejich proliferace (zvýšení počtu) závisí na aktivitě pomocných T buněk. Při infekci HIV se snižuje počet CD4 a CD8 lymfocytů, ale nejvíce se snižuje hladina CD4 lymfocytů. Normální poměr CD4/CD8 je 1,5 - 2,5. S poklesem počtu CD4 lymfocytů je pozorován pokles indexu.
Jeho hodnota menší než 1 ukazuje na rozvinutou imunodeficienci s poměrem 0,6 - 0,8, rozvíjí se AIDS.
Po obdržení pozitivních výsledků testů se člověk musí zaregistrovat u vládní agentury Centrum pro prevenci a kontrolu AIDS, kde bude jeho stav sledován a bude mu předepsána adekvátní specifická léčba.
Rýže. 12. Na fotografii jsou automatické průtokové analyzátory použity k počítání CD4 lymfocytů v krvi studované osoby.
V posledních letech se stále více rozšiřuje molekulárně genetická metoda diagnostiky infekce HIV – polymerázová řetězová reakce (PCR). S jeho pomocí je určen genetický materiál patogenu - RNA - již 1 - 2 týdny po údajné infekci a vysoká citlivost testu umožňuje detekovat RNA viry, i když jich je v testu jen několik materiál. Tato technika je drahá, a proto se v současnosti pro screening nepoužívá. Kromě toho je významným problémem studie možnost získání falešně pozitivních výsledků.
Podstata techniky PCR pro HIV
Podstatou této techniky je získání více kopií virové RNA (nukleové kyseliny), které jsou následně identifikovány jak podle jejich charakteristické struktury, tak pomocí značených enzymů či izotopů.
Možnosti PCR pro HIV infekci
Pomocí PCR můžete vyřešit sporné výsledky získané při použití techniky imunoblotování, diagnostikovat infekci HIV v časných stádiích (již 1-2 týdny po podezření na infekci), sledovat účinnost antiretrovirové terapie a určit fázi onemocnění. .
Testy PCR se doporučuje provést 4 týdny od data očekávaného rizika.
Rýže. 13. Na fotografii vlevo je normální T-lymfocyt, vpravo T-lymfocyt infikovaný HIV. Jsou viditelné mnohočetné bubliny, mezi kterými se objevily nově vytvořené viry (malé zaoblené útvary). Pomocí PCR je infekce HIV detekována během 1 - 2 týdnů po podezření na infekci.
Výhody techniky PCR pro HIV
Pomocí PCR je možné detekovat samotný virus a jeho množství.
Možnost použití u dětí do jednoho a půl roku.
Vyhodnoťte účinnost léčby.
Určete závažnost a prognózu onemocnění.
Nevýhody technologie PCR pro HIV
Vysoké náklady na výzkum.
Dostupnost specializovaných laboratoří.
Doba trvání získání výsledků (až 4 týdny).
Kdo potřebuje PCR?
Obdržení výsledku do 7-10 dnů u osob v případě podezření na infekci, kdy je požadován výsledek získaný v krátké době.
Stanovit datum zahájení a vyhodnotit účinnost léčby.
PCR se provádí u infikovaných těhotných žen 4 týdny před porodem, aby se rozhodlo, zda použít císařský řez.
Novorozenci od infikovaných matek. Pozitivní výsledek získaný dvakrát znamená, že dítě je infikováno.
Za normálních podmínek se PCR pro screening a diagnostiku HIV infekce nepoužívá.
RNA PCR a DNA PCR. Jaký je rozdíl
RNA PCR prokazuje přítomnost viru imunodeficience v krvi a objem detekované RNA. Tato studie se používá u diagnostikovaných jedinců k hodnocení účinnosti terapie.
Pomocí DNA PCR se zjišťuje přítomnost viru v mononukleárních buňkách u dětí, když protilátky proti viru lidské imunodeficience u matky brání použití metody ELISA.
Virová zátěž
Virová nálož se stanovuje spočítáním počtu kopií RNA v 1 ml krevní plazmy, což umožňuje určit stadium onemocnění, analyzovat konkrétní poskytnutou léčbu a určit závažnost a prognózu onemocnění. Čím vyšší je virová zátěž, tím méně CD4 lymfocytů je zaznamenáno v krevní plazmě.
Interpretace výsledků:
RNA buď není detekována, nebo je počet kopií RNA menší než 20 na ml. plazma.
RNA byla detekována na hranici citlivosti - méně než 20 kopií/ml.
RNA od 20 do 106 kopií v 1 ml krevní plazmy ukazuje na spolehlivost výsledku.
Více než 10 kopií RNA6ml je horní hranice lineárního rozsahu.
Trojnásobné nebo vícenásobné zvýšení virové zátěže u pacienta s infekcí HIV je klinicky významný výsledek.
Monitorování virové zátěže se provádí každé 3 měsíce u pacientů, kteří ještě nejsou léčeni. Pokud je zahájena antiretrovirová terapie, kontrola se provádí po 2–8 týdnech.
Rýže. 14. PCR je v posledních letech stále populárnější.
Rýže. 15. Zesilovače pro PCR.
V časných stádiích infekce a periodicky v průběhu onemocnění je nutné provádět HIV test, který zajistí včasné podání antiretrovirové terapie k prevenci rozvoje nebezpečných infekčních a onkologických procesů.
Viry, jeho RNA, DNA, antigeny a protilátky lze detekovat nejen v krevním séru, ale také ve spermatu, slinách, vaginálním obsahu atd. HIV se kultivuje v kultuře lymfocytů. Technika je vysoce citlivá a specifická (až 100 %), ale vysoká cena studie neumožňuje její použití v každodenní laboratorní práci.
V důsledku poškození krvetvorných orgánů viry lidské imunodeficience je pozorována inhibice krvetvorby, která se projevuje snížením počtu lymfocytů (lymfopenie), neutrofilů (neutropenie), krevních destiček (trombopenie) a anémií. Destrukce buněčných populací je navíc ovlivněna autoimunitními procesy, které se vyvíjejí u pacientů infikovaných HIV. V krevním séru pacientů převládají IgG imunoglobuliny.
Rýže. 16. Odběr krve ze žíly a prstu pro testování.
Dnes si každý může udělat test na HIV anonymně a zdarma během několika minut a moderní vybavení a vyškolený personál vám umožní získat ty nejpřesnější výsledky.
