Alla typer av HIV-tester

Ett HIV-blodprov eller HIV-test inkluderar flera laboratoriediagnostiksmetoder som hjälper till att fastställa förekomsten av immunbristvirus (HIV), upptäcka antikroppar mot dess proteiner (immunoglobuliner) eller antigener (virusproteiner) i patientens blod, saliv eller urin. Det humana immunbristviruset har en unik antigen variabilitet, som är associerad med en hög transkriptionshastighet (reproduktion), vilket gör både diagnosen av HIV-infektion och dess förebyggande svår.

Grunden för att diagnostisera HIV-infektion, liksom alla andra infektionssjukdomar, är:

• epidemiologisk historia,
• karakteristiska besvär hos patienten,
• klinisk bild av sjukdomen,
• data från laboratorieforskningsmetoder.

När diagnosen HIV-infektion väl har fastställts, för att klargöra förloppet av den underliggande sjukdomen och sekundära sjukdomar, utförs ytterligare undersökning av patienten och lämplig behandling ordineras.

Sjukdomens svårighetsgrad bedöms av nivån på viruskoncentrationen i blodet, antalet CD4-lymfocyter och bestämningen av p24-antigenet.

Huvudtyper av HIV-diagnos

Virologisk diagnostik baseras på upptäckt av HIV i patientens vävnader och biologiska vätskor.

Polymeraskedjereaktion (PCR) används för att upptäcka viruset och bedöma virusmängden, vilket gör det möjligt att bedöma effektiviteten av specifik behandling och förutsäga förloppet av infektionssjukdomen.

Serologisk diagnos HIV-infektion involverar detektering av virala antigener och antikroppar i blodserum. Detektion av antikroppar mot det humana immunbristviruset med hjälp av ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) är den huvudsakliga metoden för laboratoriediagnostik. Alla positiva resultat bekräftas genom immunblotting. Snabbt HIV-test är baserad på detektering av antikroppar i blodet och biologiska vätskor hos försökspersonen. Används i de fall då det är nödvändigt att snabbt få resultat.

Nivå av immunsuppression bestäms genom metoden att räkna CD4- och CD8-lymfocyter, följt av bestämning av CD4:CD8-förhållandet.

Var och en av laboratoriemetoderna för att diagnostisera HIV-infektion kännetecknas av en viss sensitivitet (% av korrekt identifierade tester bland uppenbart (+) prover) och specificitet (% av korrekt identifierade tester bland uppenbart negativa prover).HIV-testresultat tolkas som negativa, positiva eller tvetydiga.

Ris. 1. På bilden till vänster infekterar HIV en immuncell (markeras med gult). På bilden till höger är en lymfocyt infekterad med HIV. Förlängda strukturer på cellytan orsakas av proteinöverproduktion.

Ris. 2. Bilden visar processen för frisättning (knoppning) av virioner från en infekterad cell.

Blodprov för HIV. Vad du behöver veta

Alla invånare i vårt land kan göra ett blodprov för hiv anonymt och gratis. Men det finns kategorier av människor som måste testas för hiv. Dessa inkluderar:

• alla givare av blod och dess komponenter, såväl som vävnader och andra biologiska vätskor;
• personer som har genomgått en transfusion eller transplantation (som genomförts under de första 3 månaderna efter ingreppet);
• gravid kvinna;
• personer som skadats till följd av olyckan;
• personer med kliniska indikationer - feber, diarré, ihållande hosta och förstoring av mer än 2 grupper av lymfkörtlar, som varar mer än 1 månad, oförklarlig viktminskning, AIDS-associerade och opportunistiska infektionssjukdomar, somatisk och onkopatologi;
• Utländska medborgare;
• personer i riskzonen (narkomaner och de som lider av sexuellt överförbara sjukdomar).

Alla som har exponerats för hiv bör testas för hiv.

Ris. 3. Ett blodprov för hiv i vårt land kan tas anonymt och kostnadsfritt.

Var man kan donera blod för hiv

Ett hiv-test kan tas kostnadsfritt på hälsovårdsinstitutioner som fungerar på budgetbasis om du har pass och sjukförsäkring. Läkare är skyldiga att upprätthålla medicinsk konfidentialitet.Du kan testa dig kostnadsfritt och anonymt på AIDS Prevention and Control Centers och få medicinsk rådgivning där före och efter undersökningen. HIV-testning utförs på betald basis i kommersiella medicinska institutioner. Varje person som tillfälligt bor i detta territorium kan ta ett HIV-test.

Laboratoriet kommer att göra ett blodprov för HIV med hjälp av enzymimmunoanalysmetoden (ELISA).

Anonymt HIV-test

På folkhälsoinstitutioner (kliniker och sjukhus) kan du inte anonymt ta ett blodprov för hiv. Information om studiens resultat kommer att vara känd för en snäv krets av läkare som är skyldiga att hålla medicinsk sekretess.

Anonyma testrum finns på AIDS-centra, där varje test tilldelas ett nummer.

Ris. 4. Provrör med blod skickas för serologisk undersökning.

Påtvingat HIV-test

Det finns fyra befolkningsgrupper för vilka HIV-testning är obligatorisk, men inte tvingad:

1. Donatorer av blod och annat biologiskt material.
2. Vid ansökan om arbete på institutioner där den anställde kan ha kontakt med uppenbart infekterat material och patienter.
3. Utländska medborgare vid mottagande av visum för uppehållstillstånd (mer än 3 månader) på Ryska federationens territorium.
4. Om det finns kliniska indikationer för personer i fängelse.

Tvångstestning av befolkningen för hiv är meningslöst och strider mot respekten för mänskliga rättigheter. Tvångstestning av befolkningen i Ryska federationen är olagligt.

Ris. 5. Hiv-testning av dömda utförs enligt kliniska indikationer.

Hur mycket kostar ett HIV-test?

I statliga institutioner är HIV-testning gratis, på privata kliniker betalas det:

• Kostnaden för ELISA varierar från 400 till 800 rubel. Svaret kommer att vara klart efter en dag. Det finns en akut diagnos, då svar kan erhållas inom 2 timmar.
• Kostnaden för ett HIV-test med immunoblotmetoden varierar från 3 till 5 tusen rubel. Resultatet kommer att vara klart inom 4 - 7 dagar.
• Kostnaden för ett HIV-test med PCR-metoden är 10 - 12 tusen rubel. Resultatet kommer att vara klart om 10 - 14 dagar.

Hur lång tid tar det att testa för hiv?

I statliga myndigheter är deadline för att ta emot hiv-testresultat:

• Vid användning av 3:e generationens ELISA ger resultaten de mest tillförlitliga resultaten 12 veckor från ögonblicket för misstänkt infektion.
• Vid användning av 4:e generationens ELISA – 6 veckor.
• Vid användning av PCR - 4 veckor.

Hur man testar sig för hiv

• Det är nödvändigt att ta ett HIV-test tidigast 3 till 4 veckor efter den misstänkta infektionen.
• Testning utförs tidigast 8 timmar efter att ha ätit.

Den enda vätskan du kan dricka är vanligt vatten.

• För analys tas 3 - 5 ml blod från ulnarvenen, för vilken en vanlig spruta eller nål med pump används.
• Före transport till laboratoriet kan blodserum förvaras i kylskåp i upp till 7 dagar. Utan kylning inte mer än 30 minuter efter uppsamling.
• Transport av rör med blodserum utförs i speciella termiska behållare vid en temperatur på +4 - +8^OMED.

Ris. 6. För att testa för HIV är det nödvändigt att samla upp 3 - 5 ml blod taget från antecubitalvenen - för vilket en vanlig spruta (foto till vänster) eller en nål med pump (foto till höger) används.

När blod tas från en ven är det omöjligt att bli infekterad med humant immunbristvirus.

Falskt positivt HIV-test och andra typer av testresultat

HIV-testresultat kan tolkas som positiva, negativa eller tvetydiga.

Tveksamt testresultat för HIV erhålls när det finns antikroppar i blodserumet som korsreagerar med proteiner från humant immunbristvirus. I detta fall upprepas analysen och under dess genomförande kommer mer specifika testsystem att användas. Om ett tveksamt resultat kvarstår, bör testning utföras var 1:e till 3:e månad i sex månader.

Positivt hiv-testresultat (seropositiv) indikerar närvaron av antikroppar mot viruset i testpersonens blod. I detta fall upprepas den enzymkopplade immunosorbentanalysen (ELISA) och, om ett andra positivt resultat erhålls, bekräftas det med ett immunoblottingtest med samma blodprov.

Negativt hiv-testresultat (seronegativ) indikerar frånvaron av HIV-infektion, eller så inträffade infektionen ganska nyligen och antikroppar har ännu inte utvecklats i patientens blod (”fönsterperioden”). I detta fall bör undersökningen upprepas efter 3 och 6 månader.

Falskt positivt hiv-testresultat registreras när orsaken inte var det mänskliga immunbristviruset, utan graviditet, en autoimmun sjukdom, allergier, någon annan infektionssjukdom, en nyligen genomförd vaccination, onkopatologi, organtransplantation och till och med vanlig mat (frön, kryddig, fet och sur mat som konsumeras under dagen före och till och med starkt kolsyrat mineralvatten). Ett stort antal falskt positiva resultat erhålls när man testar hemma.

Falskt negativt hiv-testresultat indikerar att viruset finns i patientens blod, men att antikroppar ännu inte har utvecklats.Vid en PCR-analys kan ett falskt negativt resultat erhållas hos HIV-infekterade patienter under perioden med specifik behandling, när koncentrationen av virus i blodet är så låg att det leder till fel på testsystemet. I de flesta fall erhålls ett falskt negativt resultat på grund av ett tekniskt fel eller defekt i testsystemet, vilket är extremt sällsynt på grund av strikt kvalitetskontroll på alla nivåer.

Ett HIV-test bör skjutas upp i minst två veckor efter en infektionssjukdom eller vaccination.

Ris. 7. Genomföra ett serologiskt blodprov.

Testsystem som bestämmer förekomsten av antikroppar mot HIV

Genom att testa för antikroppar mot humant immunbristvirus bedöms kroppens svar på infektion. För detta ändamål används en enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) för att detektera antikroppar mot virala proteiner och en bekräftande immunoblottinganalys (Western blot), som bestämmer antikropparnas reaktion mot virala proteiner.

Antikroppar mot HIV

Humana immunbristvirus har antigena egenskaper och, när de kommer in i människokroppen, orsakar syntesen av antikroppar - specifika immunglobuliner. Med hjälp av moderna testsystem kan klassen av immunglobuliner (antikroppar) bestämmas i blodserumet och andra biologiska vätskor hos en HIV-patient. IgM-klass immunglobuliner visas före alla andra (en vecka efter infektion). Deras tillväxt observeras inom en månad och sedan kvarstår de i cirka 30 dagar. IgG-klass immunglobuliner cirkulerar i blodet under flera år. Deras upptäckt är en indikator på förekomsten av HIV-infektion.

Antikroppar mot HIV uppstår inom 2–4 veckor.efter infektion och då detekteras de i blodet under hela sjukdomen.

"Fönster"-period för HIV

Antikroppar produceras inte omedelbart i en infekterad persons kropp. Till en början visar sig HIV-infektion inte på något sätt. Antikroppar uppträder i blodet i genomsnitt 2 - 3 månader från infektionsögonblicket (från 2 veckor till 6 månader). Denna period kallas "fönstret", när tester för antikroppar fortfarande är negativa, men virusen förökar sig intensivt och patienten själv blir farlig när det gäller att infektera kontaktpersoner. En infekterad person kan identifieras efter en kortare (1 - 2 veckor) period efter infektion, för vilken polymeraskedjereaktion (PCR) används. Men på grund av dess höga kostnad används denna typ av studie inte för screening.

Enzymimmunanalys för att diagnostisera HIV

Hos 90 - 95% av infekterade individer uppträder antikroppar i blodserumet 3 månader efter infektion Hos en liten del av patienterna (5 - 9%) uppträder antikroppar i perioden från 3 till 9 månader och i 0,5 - 1% -. på mer än sena datum. I det terminala stadiet av AIDS minskar antalet antikroppar avsevärt och försvinner i vissa fall helt.

Sedan 1985 har denna teknik använts i Ryska federationen för massforskning. Det är lätt att implementera, visar ganska exakta resultat och är billigt jämfört med andra metoder. På grund av möjligheten att få falskt positiva resultat undersöks alla positiva resultat två gånger, varefter patientens blodserum undersöks med ett bekräftande test - en immunoblot. Detta använder samma blodprov. Om det finns 2 positiva resultat med ELISA och immunoblot i ett prov, ställs en diagnos av HIV-infektion.

I Ryska federationen används vanligtvis 4:e generationens ELISA. Studien genomförs för att erhålla det totala spektrumet av antikroppar mot HIV-proteiner (antigener) - p24 och gp160.

Testet ser både antikroppar som produceras av patientens kropp och p24-antigener (virusproteiner). Fönsterperioden för 4:e generationens tester är kortare. Inom en månad kan du få tillförlitliga resultat. Enligt ryska sjukvårdsexperter är dock terminer på 6, 8 eller 12 veckor mer tillförlitliga.

Ris. 8. Bilden visar enzymimmunanalysanalysatorer.

Ris. 9. Bilden visar en automatisk enzymimmunanalysanalysator.

För den första undersökningen av grupper av människor för att upptäcka HIV-infektion används endast ELISA-metoden.

Immunblotting-metod

Immunblottingmetoden är mer exakt än ELISA enligt de flesta experter, det är referensmetoden. Med dess hjälp upptäcks antikroppar mot HIV-proteiner i blodserum. Tekniken används för att bekräfta de resultat som erhållits under ELISA. Har hög specificitet. Falskt positiva resultat är sällsynta. Tillförlitligheten hos de erhållna resultaten når 99%. Immunoblotting är en dyr teknik och kräver hög specialisering av specialisten som genomför studien. Tveksamma resultat kan erhållas.

Metoden bygger på separation av HIV-antigener (proteiner) med hjälp av elektrofores baserad på molekylvikt. Antikroppar mot kapsidproteiner är de första som upptäcks under infektion.Gag" (p24 och p17) och prekursorn p55. De följs av antikroppar mot superkapsidproteiner.Env"(glykoproteinerna gр 160, gр120, gр41 och proteinerna p88) och icke-strukturella proteiner "Pol" (р31, р51 och р66). I vissa fall kan antikroppar mot gener detekteras."vpu», «vpr», «vif», «tat», «nef», «varv», «tat».

Blodserumet från patienter med HIV-1 och HIV-2 innehåller antikroppar mot alla virala proteiner, men för att bekräfta diagnosen detekteras endast antikroppar mot proteinerna p24, gp41, gp120 och gp160 i HIV-1, och antikroppar mot proteinerna gp105, gp140 och gp140 i HIV-2 gr36.

Om det finns 2 positiva resultat med ELISA och immunoblot i ett prov, ställs en diagnos av HIV-infektion.

Ris. 10. Apparat för att utföra immunoblotforskning.

Ris. 11. Diagnosen HIV-infektion ställs i närvaro av 2 positiva resultat med hjälp av ELISA och immunoblot i ett prov.

Testsystem för att räkna CD4-lymfocyter

Ett av de immunologiska testerna som används för HIV-infektion är metoden att räkna CD4- och CD8-lymfocyter i blodet.

CD4-lymfocyter (T-hjälparceller) påverkas av immunbristvirus. Den gradvisa utarmningen av deras befolkning leder till en minskning av immuniteten och patientens kropp upphör att motstå infektion. CD4-lymfocyträkningar utförs med flödescytometri med hjälp av automatiserade analysatorer eller manuellt med optisk eller fluorescensmikroskopi. Antalet CD4-lymfocyter bestämmer tidpunkten för initiering av specifik behandling (antiretroviral terapi) och förebyggande av opportunistiska infektioner, och utvärderar behandlingens effektivitet.

• När antalet CD4-lymfocyter i blodserumet är 500 eller mindre per 1 ml, indikerar det utvecklingen av immunbrist.
• När antalet CD4-lymfocyter minskar till 200 per 1 ml (normen är från 600 till 1900 celler per 1 ml), utvecklas förvärvat immunbristsyndrom (AIDS).
• När nivån av CD4-lymfocyter minskar till 50 eller lägre per 1 μl, går AIDS in i terminalstadiet.

Andelen CD4-lymfocyter bland alla lymfocyter är normalt cirka 40 %.En minskning av hastigheten till 20% indikerar utvecklingen av AIDS.

CD8-lymfocyter (T-killers, på engelska. mördare - mördare) förstör HIV-virus genom cytolys. Deras proliferation (ökning i antal) beror på aktiviteten hos T-hjälparceller. Vid HIV-infektion minskar antalet CD4- och CD8-lymfocyter, men halten av CD4-lymfocyter minskar mest av allt. Det normala CD4/CD8-förhållandet är 1,5 - 2,5. Med en minskning av antalet CD4-lymfocyter observeras en minskning av indexet.

Dess värde mindre än 1 indikerar en utvecklad immunbrist med ett förhållande på 0,6 - 0,8, AIDS utvecklas.

Efter att ha fått positiva testresultat måste en person registrera sig hos den statliga myndigheten Center for Prevention and Control of AIDS, där hans tillstånd kommer att övervakas och adekvat specifik behandling kommer att ordineras.

Ris. 12. På bilden används automatiska flödesanalysatorer för att räkna CD4-lymfocyter i blodet på personen som studeras.

HIV-test med PCR

På senare år har en molekylärgenetisk metod för att diagnostisera HIV-infektion – polymeraskedjereaktion (PCR) – blivit allt mer utbredd. Med dess hjälp bestäms patogenens genetiska material - RNA - redan 1 - 2 veckor efter den påstådda infektionen, och testets höga känslighet gör att du kan upptäcka RNA-virus även om det bara finns ett fåtal av dem i testet material. Denna teknik är dyr och används därför för närvarande inte för screening. Dessutom är ett betydande problem med studien möjligheten att få falskt positiva resultat.

Kärnan i PCR-tekniken för HIV

Kärnan i denna teknik är att erhålla flera kopior av virus-RNA (nukleinsyra), som sedan identifieras både genom sin karakteristiska struktur och med hjälp av märkta enzymer eller isotoper.

Möjlighet till PCR för HIV-infektion

Med hjälp av PCR kan du lösa tvivelaktiga resultat som erhålls när du använder immunblottingtekniken, diagnostisera HIV-infektion i de tidiga stadierna (så tidigt som 1-2 veckor efter den misstänkta infektionen), övervaka effektiviteten av antiretroviral terapi och bestämma sjukdomsstadiet .

Det rekommenderas att göra PCR-tester 4 veckor från datumet för den förväntade risken.

Ris. 13. På bilden till vänster är en normal T-lymfocyt, till höger en T-lymfocyt infekterad med HIV. Flera bubblor är synliga, mellan vilka nybildade virus (små rundade formationer) har dykt upp. Med PCR upptäcks HIV-infektion inom 1 - 2 veckor efter den misstänkta infektionen.

Fördelar med PCR-tekniken för HIV

• Med PCR är det möjligt att upptäcka själva viruset och dess kvantitet.
• Möjlighet att använda för barn under ett och ett halvt år.
• Utvärdera behandlingens effektivitet.
• Bestäm svårighetsgraden och prognosen för sjukdomen.

Nackdelar med PCR-teknik för HIV

• Hög kostnad för forskning.
• Tillgång till specialiserade laboratorier.
• Varaktighet för att erhålla resultat (upp till 4 veckor).

Vem behöver PCR?

1. Får resultatet inom 7-10 dagar för personer vid misstänkt infektion, när ett resultat erhållet på kort tid önskas.
2. För att bestämma startdatum och utvärdera behandlingens effektivitet.
3. PCR görs på infekterade gravida kvinnor 4 veckor före födseln för att avgöra om man ska använda kejsarsnitt.
4. Nyfödda från smittade mödrar. Ett positivt resultat som erhållits två gånger indikerar att barnet är smittat.

Under normala förhållanden används inte PCR för screening och diagnostisering av HIV-infektion.

RNA PCR och DNA PCR. Vad är skillnaden

• RNA PCR bevisar förekomsten av immunbristvirus i blodet och volymen av detekterat RNA. Denna studie används i diagnostiserade individer för att utvärdera effektiviteten av terapi.
• Med hjälp av DNA PCR bestäms förekomsten av viruset i mononukleära celler hos barn när antikroppar mot det humana immunbristviruset hos modern förhindrar användningen av ELISA-metoden.

Viral belastning

Virusbelastningen bestäms genom att räkna antalet RNA-kopior i 1 ml blodplasma, vilket gör det möjligt att bestämma sjukdomsstadiet, analysera den specifika behandlingen som ges och bestämma sjukdomens svårighetsgrad och prognos. Ju högre virusmängd, desto färre CD4-lymfocyter registreras i blodplasman.

Tolkning av resultat:

• RNA detekteras antingen inte eller så är antalet RNA-kopior mindre än 20 per ml. plasma.
• RNA detekterades vid känslighetsgränsen - mindre än 20 kopior/ml.
• RNA från 20 till 10⁶ kopior i 1 ml blodplasma indikerar resultatets tillförlitlighet.
• Mer än 10 RNA-kopior⁶ml är den övre gränsen för det linjära området.

En ökning av virusmängden hos en patient med HIV-infektion med tre eller fler gånger är ett kliniskt signifikant resultat.

Viral belastningsövervakning utförs var tredje månad hos patienter som ännu inte får behandling. Om antiretroviral behandling påbörjas utförs kontroll efter 2–8 veckor.

Ris. 14. PCR har blivit allt mer populärt de senaste åren.

Ris. 15. Förstärkare för PCR.

Ett HIV-test måste utföras i de tidiga stadierna av infektion och periodiskt under sjukdomen, vilket kommer att säkerställa snabb administrering av antiretroviral terapi för att förhindra utvecklingen av farliga infektions- och onkologiska processer.

Virusodling

Virus, dess RNA, DNA, antigener och antikroppar kan detekteras inte bara i blodserum utan även i spermier, saliv, vaginalt innehåll etc. HIV odlas i en kultur av lymfocytceller. Tekniken är mycket känslig och specifik (upp till 100%), men den höga kostnaden för studien tillåter inte att den används i det dagliga laboratoriearbetet.

Fullständigt blodprov för HIV

Som ett resultat av skador på de hematopoetiska organen av humana immunbristvirus observeras hämning av hematopoiesis, vilket manifesteras av en minskning av antalet lymfocyter (lymfopeni), neutrofiler (neutropeni), blodplättar (trombopeni) och anemi. Dessutom påverkas förstörelsen av cellpopulationer av autoimmuna processer som utvecklas hos HIV-infekterade patienter. IgG-immunoglobuliner dominerar i blodserum hos patienter.

Ris. 16. Ta blod från en ven och finger för testning.

Idag kan vem som helst ta ett hiv-test anonymt och gratis på några minuter, och modern utrustning och utbildad personal gör att du kan få de mest exakta resultaten.