Att testa för syfilis är ett av de vanligaste laboratorietesterna. Tester för syfilis används ofta vid förebyggande undersökningar. Med hjälp av mikroskopi identifieras det orsakande medlet för syfilis - Treponema pallidum.Med hjälp av serologiska reaktioner bekräftas diagnosen syfilis, diagnosen latent syfilis fastställs, behandlingens effektivitet övervakas och botemedlet av patienter bestäms.
Diagnosen syfilis fastställs på grundval av kliniska data, upptäckt av syfilispatogener i materialprover och bekräftelse av diagnosen med serologiska forskningsmetoder. Manifestationerna av syfilis är många och varierande, varför sjukdomen diagnostiseras av läkare av olika specialiteter. Differentialdiagnos av primär syfilis utförs med ett antal sjukdomar.
Ris. 1. På bilden är den primära manifestationen av syfilis chancre.
Antikroppar mot Treponema pallidum och serologisk diagnos
Vid infektering av syfilis bildas antikroppar i patientens kropp. Serologisk diagnostik hjälper läkaren att studera dynamiken för antikroppsbildning i kroppen hos en patient med syfilis i de inledande stadierna av sjukdomen, under behandlingsperioden och efter dess slutförande, för att lösa problemet med återfall av sjukdomen hos patienten eller återinfektion (återinfektion), för att diagnostisera syfilis vid massmedicinska tillstånd.
Antikroppar mot Treponema pallidum IgM
IgM-antikroppar är de första som produceras efter infektion. De börjar upptäckas med serologiska reaktioner från den andra veckan efter infektion. Vid 6–9 veckors sjukdom blir deras antal maximalt. Om patienten inte behandlas försvinner antikropparna efter sex månader. IgM-antikroppar försvinner efter 1 - 2 månader. efter behandling av tidig syfilis, efter 3 - 6 månader. - efter behandling av sen syfilis. Om deras tillväxt registreras är detta ett tecken på återfall av syfilis eller indikerar återinfektion. IgM-molekyler är stora och passerar inte genom moderkakan till fostret.
Antikroppar mot Treponema pallidum IgG
IgG-immunoglobulinantikroppar uppträder i slutet av den första månaden (4:e veckan) från infektionsögonblicket. Deras titer är högre än IgM-titern. IgG kvarstår ganska länge efter behandlingen.
Ospecifika antikroppar
Det finns många serologiska reaktioner. Detta förklaras av den antigena mångfalden av Treponema pallidum. I blodserumet hos en sjuk person i olika stadier av syfilis, förutom specifika, bildas vissa ospecifika antikroppar - agglutininer, komplementfixering, immobilisiner, antikroppar som orsakar immunfluorescens, precipitiner etc. Serologiska reaktioner för att upptäcka ospecifika antikroppar har relativ specificitet, därför, för att undvika diagnostiska fel, bör du använda inte bara en, utan ett komplex av serologiska reaktioner (SRR).
Falskt positiva tester för syfilis
Ett utmärkande drag för icke-treponemala tester är mottagandet av falskt positiva reaktioner. Antikroppar-reaginer, som produceras i mänskligt blod mot kardiolipinantigenet, registreras inte bara i syfilis, utan också i andra sjukdomar: kollagenos, hepatit, njursjukdomar, tyreotoxikos, cancer, infektionssjukdomar (speetälska, tuberkulos, brucellos, malaria, tyfus, scharlakansfeber), under graviditet och menstruationscykler, när du tar fet mat och alkohol. Det har noterats att antalet falskt positiva reaktioner ökar med åldern.
Laboratoriediagnos av syfilis med hjälp av serologiska tester
Serologiska tester för syfilis är indelade i treponemal och nontreponemal.
1. Icke-treponemala tester
Antigenet som används i denna grupp av tester är kardiolipinantigen. Lipidantigener av syfilispatogener är de mest talrika. De utgör 1/3 av cellens torrmassa. Med hjälp av icke-treponemala tester detekteras reagin-antikroppar som produceras mot kardiolipinantigenet. Denna grupp inkluderar komplementfixeringstestet (FFR), mikroprecipitationstestet (MPR), snabbt plasmareagintest (RPR), etc. Med hjälp av icke-treponemala tester görs primär screening för syfilis (undersökning av befolkningsgrupper), och möjligheten att erhålla resultat i en kvantitativ form gör att dessa tester kan användas för att övervaka behandlingens effektivitet. Positiva resultat från icke-treponemala tester måste bekräftas med treponemala tester. Ett utmärkande drag för icke-treponemala tester är mottagandet av falskt positiva reaktioner.
2. Treponemala tester
Treponemala tester använder antigener av treponemalt ursprung isolerade från en kultur av Treponema pallidum. Med deras hjälp bekräftas positiva resultat av icke-treponemala tester. Gruppen inkluderar: RSKtrep - komplementfixeringsreaktion, RIF - immunfluorescensreaktion och dess modifieringar, RIT, RIBT - immobiliseringsreaktion av Treponema pallidum, RPHA - passiv hemagglutinationsreaktion, ELISA - enzymkopplad immunosorbentanalys.
3. Tester för syfilis med användning av rekombinanta antigener
Antigener för denna grupp av tester erhålls genom genteknik och används i reaktioner - RPGA och ELISA, i immunoblotting (IB) analyser och immunokromatografisk analys.
Ris. 3. En uppsättning serologiska tester används för att diagnostisera syfilis.
Diagnos av syfilis med hjälp av icke-treponemala tester
För att upptäcka syfilis används icke-treponemala tester eller ett komplex av serologiska reaktioner (SSR). Serologisk diagnos används från den 5:e veckan från infektionsögonblicket eller från 2-3 veckor efter uppkomsten av chancre. Antikroppar detekteras hos nästan alla patienter med ny primär, sekundär och återkommande syfilis. Serologiska reaktioner är positiva hos 70 - 80 % av patienterna med tertiär aktiv syfilis, i 50 - 60 % av fallen hos patienter med tertiär latent syfilis.
Serologiska tester med icke-treponemala tester kan ge falskt positiva resultat.
Komplementfixeringsreaktion (RSK-kort, KSK med KA, Wasserman-reaktion)
Wasserman-reaktionen (RW, РВ), som uppfanns av A. Wasserman för mer än 100 år sedan, har idag genomgått många förändringar, men som en hyllning till traditionen har den behållit sitt namn till våra dagar. Komplementfixeringsreaktionen med kardiolipinantigen är inte bara avsedd att detektera antikroppar, utan utförs också kvantitativt - med olika serumspädningar, vilket gör att den kan användas för att övervaka behandlingens effektivitet. Låg känslighet och specificitet, att få falskt positiva resultat är de negativa aspekterna av denna typ av studier.
Kärnan i Wasserman-reaktionen är som följer: antigenerna som används för att iscensätta Wasserman-reaktionen, i fallet med närvaron av antikroppar mot syfilisförorsakande ämnen i det mänskliga blodet, binder till dem genom en komplimang och fälls ut. Reaktionens intensitet indikeras med ett tecken (+).Reaktionen kan vara negativ (-) - inget sediment, tveksamt (litet sediment eller +), svagt positiv (++), positiv (+++) och starkt positiv (++++).
Den modifierade Wasserman-reaktionen, Kolmer-reaktionen, är mer känslig. Med dess hjälp detekteras antikroppar i sera där Wasserman-reaktionen gav ett negativt resultat.
Vid kraftigt positiva reaktioner utförs en kvantitativ bestämning av reaginer, för vilka serum används i spädningar från 1:10 till 1:320, vilket möjliggör användningen av denna typ av studie för att övervaka behandlingens effektivitet. Till exempel indikerar en minskning av antikroppstiter och deras efterföljande seronegativitet (att erhålla negativa resultat) ett framgångsrikt botemedel mot sjukdomen.
Ris. 5. Blodprov för syfilis - Wasserman reaktion.
Mikrofällningsreaktion (MPR)
Precipitation microreaction används för massundersökningar av vissa befolkningsgrupper, diagnos av syfilis och övervakning av behandlingens effektivitet. För att genomföra denna typ av forskning krävs en liten mängd testmaterial. Mikroreaktionen av utfällning är baserad på den immunologiska antigen-antikroppsreaktionen. Om antikroppar är närvarande i patientens blodserum, fälls antigen-antikroppskomplexet ut och bildar flingor. Reaktionen utförs i brunnarna på en speciell glasplatta. Den bedöms genom intensiteten av fällningen och storleken på flingorna i (+) som Wasserman-reaktionen. Det används inte vid undersökning av gravida kvinnor, donatorer och för att övervaka behandlingens effektivitet. VDRL och RPR är typer av mikroreaktioner.
Ris. 6. Typ av utfällningsreaktion i en droppe på glas.
Ris. 7. Blodprov för syfilis - mikroutfällningsreaktion.
Ris. 8.Kit för snabb bestämning av plasmareagin (RPR-test för syfilis).
Alla positiva tester som erhålls under ospecifika serologiska reaktioner kräver bekräftelse av specifika reaktioner - treponemala tester.
Vid utförande av treponemala tester används antigener av treponemalt ursprung. Deras negativa sida är omöjligheten att använda dem för att övervaka behandlingens effektivitet, få positiva resultat vid spiroketos och icke-venerala treponematoser och få falska positiva resultat vid onkologiska sjukdomar, spetälska och vissa endokrina patologier. Tester som RPGA, ELISA och RIF förblir positiva i många år efter att syfilis har botats, och i vissa fall hela livet.
RIBT och RIF är de mest specifika av alla serologiska reaktioner som används för att diagnostisera syfilis. De gör det möjligt att skilja mellan falskt positiva reaktioner och att identifiera sena former av syfilis som uppstår med negativa reaktioner. Med hjälp av RIBT upptäcks falskt positiva reaktioner hos gravida kvinnor när det är nödvändigt att lösa problemet med infektion av barnet.
Kärnan i reaktionen är att antikropparna i patientens blodserum immobiliserar Treponema pallidum. En reaktion anses vara negativ när upp till 20% av patogenerna är immobiliserade, svagt positiva - 21 - 50%, positiva - 50 - 100%. RIBT ger ibland falskt positiva resultat.Testet är komplext och arbetsintensivt, men det är oumbärligt vid differentialdiagnostik av latenta former av sjukdomen och falskt positiva resultat av serologiska reaktioner, inklusive hos gravida kvinnor. RIBT ger ett 100% positivt resultat för sekundär, tidig och sen syfilis, i 94 - 100% av fallen - för andra former av syfilis.
Immunofluorescensreaktion (RIF)
Kärnan i reaktionen är att treponema pallidum (antigener), i kombination med antikroppar märkta med fluorokromer, avger ett gulgrönt sken i ett fluorescerande mikroskop. Resultatet utvärderas med ett tecken (+). Med RIF detekteras klass A-immunoglobuliner. Immunofluorescensreaktionen blir positiv tidigare än Wasserman-reaktionen. Den är alltid positiv vid sekundär och latent syfilis, i 95 - 100 % av fallen är den positiv vid tertiär och medfödd syfilis. Tekniken för att utföra denna typ av forskning är enklare än RIBT, men det är omöjligt att ersätta RIF med RIBT, eftersom denna reaktion är sämre än RIBT i specificitet. RIF-10 (modifiering av RIF) är mer känslig, RIF-200 och RIF-abs är mer specifika.
Ris. 9. Blodprov för syfilis - immunfluorescensreaktion (RIF).
Immunadhesionsreaktion av Treponema pallidum (IAT)
Kärnan i reaktionen är att treponema pallidum, sensibiliserad av patientens serum, i närvaro av komplement, fäster vid ytan av röda blodkroppar. De resulterande komplexen fälls ut under centrifugering. Känsligheten för detta test och specificiteten ligger nära RIF och RIBT.
Enzymimmunanalys för syfilis (ELISA)
Med hjälp av ELISA bestäms immunglobuliner av klass M och G. IgM-ELISA-tekniken kan användas som ett screening- och bekräftande test.Känsligheten för ELISA och dess specificitet liknar RIF. För syfilis ger ELISA positiva resultat från den tredje infektionsmånaden och förblir positiv under ganska lång tid (ibland hela livet).
RPHA baseras på förmågan hos röda blodkroppar på vilka treponema pallidum-antigener adsorberas att hålla ihop (hemagglutination) i närvaro av patientens serum. RPGA används för att diagnostisera alla former av syfilis, inklusive latent. Vid användning av ett högkvalitativt antigen överstiger denna typ av serologisk reaktion alla andra tester i specificitet och känslighet.
Ris. 11. RPGA används för att diagnostisera alla former av syfilis.
Ris. 12. Test för syfilis - passiv (indirekt) hemagglutinationsreaktion (schema).
Ris. 13. Utseendet på ett omvänt paraply som upptar hela botten av provröret indikerar en positiv reaktion. I fallet när röda blodkroppar sätter sig i en kolumn ("knapp") i mitten av botten av provröret, indikeras en negativ reaktion.
Tillsammans med serologisk diagnos spelar metoden för att upptäcka Treponema pallidum (mikrobiologisk diagnos) en viktig roll, särskilt under perioden med seronegativ syfilis, när det fortfarande inte finns några antikroppar i blodet, men det finns redan de första manifestationerna av färsk primär syfilis ( chancroid).
Det biologiska materialet för studien är flytning från ytan av hårda sår (chancres), innehållet av pustulära syfilider, gråtande och erosiva papler, punkteringar av infekterade lymfkörtlar, cerebrospinalvätska och fostervatten för PCR - blod.
Den bästa metoden för att upptäcka syfilispatogener är att undersöka biologiskt material i ett mörkfältsmikroskop. Denna teknik låter dig se treponema pallidum i ett levande tillstånd, studera dess strukturella egenskaper och rörelser och skilja patogena patogener från saprofyter.
Ris. 15. Analys för syfilis - mörkfältsmikroskopi.
Ris. 16. När man studerar torra utstryk används Romanovsky-Giemsa-färgning. Blek treponema blir rosa, alla andra typer av spiroketer blir lila.
Detektion av Treponema pallidum genom mörkfältsmikroskopi är ett absolut kriterium för den slutliga diagnosen syfilis.
Ris. 17. För att identifiera bakterier används en immunfluorescensreaktion (RIF) - ett treponemaltest. Ett specifikt antigen-antikroppskomplex, i kombination med ett specifikt serum märkt med en fluorokrom, i ljuset av ett fluorescerande mikroskop ger bakterierna ett grönaktigt sken.
Ris. 18. Orsaken till syfilis är tydligt synliga i utstryk framställda med Levaditi-metoden (silverimpregnering). Blek treponema är mörk i färgen mot bakgrund av den gula färgen på cellerna i infekterade vävnader.
Ris. 19. Orsaken till syfilis vid multipel förstoring.
Ris. 20. Bilden visar en koloni av Treponema pallidum. Det är svårt att få en bakteriekultur. De växer praktiskt taget inte på konstgjorda näringsmedier. På media som innehåller häst- och kaninserum uppträder kolonier dag 3–9.
Idag är polymeraskedjereaktionstekniken effektiv och lovande.PCR för syfilis gör att du kan få resultat inom några timmar, och åtminstone flera patogener kan finnas i det material som samlas in för diagnos.
Ris. 21. PCR för syfilis kan detektera DNA eller dess fragment från Treponema pallidum.
Känsligheten hos denna forskningsmetod beror på närvaron av Treponema pallidum i det biologiska materialet och når 98,6 %. Specificiteten för detta test beror till stor del på det korrekta valet av mål för amplifiering under diagnos och når 100 %.
Samtidigt, på grund av de otillräckligt studerade jämförande egenskaperna hos känsligheten och specificiteten hos direkta metoder för att diagnostisera syfilis och PCR, har denna undersökningsmetod i Ryska federationen för att diagnostisera sjukdomen ännu inte godkänts.
PCR för syfilis tillåts endast utföras i vissa fall, som en ytterligare metod för att diagnostisera medfödd syfilis, neurosyfilis, om det är svårt att diagnostisera syfilis med serologiska metoder hos HIV-patienter.
Ris. 22. Detektering av Treponema pallidum DNA med PCR indikerar antingen närvaron av livsdugliga bakterier eller rester av döda bakterier, men som innehåller individuella sektioner av kromosomalt DNA som kan bilda ytterligare kopior.
