Sifilio tyrimas yra vienas iš labiausiai paplitusių laboratorinių tyrimų. Sifilio tyrimai plačiai naudojami profilaktinių apžiūrų metu. Naudojant mikroskopiją, nustatomas sifilio sukėlėjas - Treponema pallidum.Naudojant serologines reakcijas, patvirtinama sifilio diagnozė, nustatoma latentinio sifilio diagnozė, stebimas gydymo efektyvumas, nustatomas ligonių išgydymas.
Sifilio diagnozė nustatoma remiantis klinikiniais duomenimis, sifilio sukėlėjų nustatymu medžiaginiuose mėginiuose ir diagnozės patvirtinimu serologiniais tyrimo metodais. Sifilio apraiškų yra daug ir įvairių, todėl ligą diagnozuoja įvairių specialybių gydytojai. Diferencinė pirminio sifilio diagnozė atliekama sergant daugeliu ligų.
Antikūnai prieš Treponema pallidum ir serologinė diagnostika
Užsikrėtus sifiliu, paciento organizme susidaro antikūnai. Serologinė diagnostika padeda gydytojui ištirti antikūnų susidarymo dinamiką sifiliu sergančio paciento organizme pradinėse ligos stadijose, gydymo laikotarpiu ir jam pasibaigus, išspręsti paciento ligos atkryčio problemą. arba pakartotinė infekcija (reinfection), sifiliui diagnozuoti esant masinėms sveikatos būklėms.
Antikūnai prieš Treponema pallidum IgM
IgM antikūnai yra pirmieji, kurie gaminami po infekcijos. Jie pradedami aptikti naudojant serologines reakcijas nuo antros savaitės po užsikrėtimo. 6–9 ligos savaitę jų skaičius tampa didžiausias. Jei pacientas negydomas, antikūnai išnyksta po šešių mėnesių. IgM antikūnai išnyksta po 1-2 mėnesių. po ankstyvo sifilio gydymo, po 3 - 6 mėn. - po vėlyvojo sifilio gydymo. Jei fiksuojamas jų augimas, tai yra sifilio atkryčio požymis arba rodo pakartotinį užsikrėtimą. IgM molekulės yra didelės ir pro placentą nepraeina vaisiui.
Antikūnai prieš Treponema pallidum IgG
IgG imunoglobulino antikūnai atsiranda pirmojo mėnesio pabaigoje (4 savaitę) nuo užsikrėtimo momento. Jų titras yra didesnis nei IgM titras. IgG išlieka gana ilgą laiką po gydymo.
Nespecifiniai antikūnai
Yra daug serologinių reakcijų. Tai paaiškinama Treponema pallidum antigenine daugybe. Sergančio žmogaus, sergančio skirtingomis sifiliu stadijomis, kraujo serume, be specifinių, susidaro ir tam tikri nespecifiniai antikūnai - agliutininai, komplementą fiksuojantys, imobilizinai, imuninę fluorescenciją sukeliantys antikūnai, precipitinai ir kt. Serologinės reakcijos nespecifiniams antikūnams nustatyti. turi santykinį specifiškumą, todėl norėdami išvengti diagnostinių klaidų, turėtumėte naudoti ne vieną, o serologinių reakcijų kompleksą (SRR).
Klaidingai teigiami sifilio testai
Išskirtinis ne treponeminių testų bruožas yra klaidingai teigiamų reakcijų gavimas. Antikūnai-reaginai, kurie žmogaus kraujyje gaminasi prieš kardiolipino antigeną, registruojami ne tik sergant sifiliu, bet ir kitomis ligomis: kolagenoze, hepatitu, inkstų ligomis, tirotoksikoze, vėžiu, infekcinėmis ligomis (raupsais, tuberkulioze, brucelioze, maliarija, šiltinė, skarlatina), nėštumo ir mėnesinių ciklų metu, vartojant riebų maistą ir alkoholį. Pastebėta, kad klaidingai teigiamų reakcijų skaičius didėja su amžiumi.
Ryžiai. 2. Nuotraukoje matomas pirminis moterų sifilis.
Sifilio laboratorinė diagnostika naudojant serologinius tyrimus
Serologiniai sifilio tyrimai skirstomi į treponeminius ir netreponeminius.
1. Ne treponeminiai testai
Šioje tyrimų grupėje naudojamas antigenas yra kardiolipino antigenas. Sifilio sukėlėjų lipidinių antigenų yra daugiausia. Jie sudaro 1/3 sausos ląstelės masės. Naudojant ne treponeminius tyrimus, aptinkami reagino antikūnai, gaminami prieš kardiolipino antigeną. Šiai grupei priklauso komplemento fiksacijos testas (FFR), mikroprecipitacijos testas (MPR), greitasis plazmos reagino testas (RPR) ir kt. Naudojant ne treponeminius tyrimus, atliekama pirminė sifilio patikra (populiacijų grupių apklausa) ir galimybė. Rezultatų gavimas kiekybine forma leidžia šiuos testus naudoti gydymo veiksmingumui stebėti. Teigiami netreponeminių tyrimų rezultatai turi būti patvirtinti treponeminiais tyrimais. Išskirtinis ne treponeminių testų bruožas yra klaidingai teigiamų reakcijų gavimas.
2. Treponeminiai tyrimai
Atliekant treponeminius tyrimus naudojami treponeminės kilmės antigenai, išskirti iš Treponema pallidum kultūros. Jų pagalba patvirtinami teigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai. Į grupę įeina: RSKtrep – komplemento fiksavimo reakcija, RIF – imunofluorescencinė reakcija ir jos modifikacijos, RIT, RIBT – Treponema pallidum imobilizacijos reakcija, RPHA – pasyvioji hemagliutinacijos reakcija, ELISA – fermentinis imunosorbentinis tyrimas.
3. Sifilio tyrimai naudojant rekombinantinius antigenus
Šios grupės testų antigenai gaunami genų inžinerijos būdu ir naudojami reakcijose – RPGA ir ELISA, imunoblotavimo (IB) analizėse ir imunochromatografinėje analizėje.
Ryžiai. 3. Sifiliui diagnozuoti naudojamas serologinių tyrimų rinkinys.
Sifilio diagnozė naudojant ne treponeminius tyrimus
Sifiliui nustatyti naudojami netreponeminiai tyrimai arba serologinių reakcijų kompleksas (SSR). Serologinė diagnostika taikoma nuo 5 savaitės nuo užsikrėtimo arba nuo 2-3 savaičių po šankro atsiradimo. Antikūnai aptinkami beveik visiems ligoniams, sergantiems šviežiu pirminiu, antriniu ir pasikartojančiu sifiliu. Serologinės reakcijos yra teigiamos 70 - 80% pacientų, sergančių tretiniu aktyviu sifiliu, 50 - 60% atvejų pacientams, sergantiems tretiniu latentiniu sifiliu.
Serologiniai tyrimai, naudojant ne treponeminius tyrimus, gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus.
Komplemento fiksavimo reakcija (RSK kortelė, KSK su KA, Wasserman reakcija)
Prieš daugiau nei 100 metų A. Wassermano sugalvota Wassermano reakcija (RW, РВ) šiandien patyrė daugybę pokyčių, tačiau, kaip duoklė tradicijai, savo pavadinimą išlaikė iki šių dienų. Komplemento fiksavimo reakcija naudojant kardiolipino antigeną skirta ne tik antikūnams aptikti, bet atliekama ir kiekybiškai – su skirtingais serumo praskiedimais, kas leidžia ją naudoti gydymo efektyvumui stebėti. Mažas jautrumas ir specifiškumas, klaidingai teigiami rezultatai yra neigiami šio tipo tyrimo aspektai.
Wassermano reakcijos esmė yra tokia: antigenai, naudojami Wasserman reakcijai sukelti, jei žmogaus kraujyje yra antikūnų prieš sifilio sukėlėjus, su jais jungiasi per komplimentą ir nusėda nuosėdos. Reakcijos intensyvumas žymimas ženklu (+).Reakcija gali būti neigiama (-) – nėra nuosėdų, abejotina (mažos nuosėdos arba +), silpnai teigiama (++), teigiama (+++) ir stipriai teigiama (++++).
Modifikuota Wasserman reakcija, Kolmerio reakcija, yra jautresnė. Su jo pagalba antikūnai aptinkami serumuose, kuriuose Wasserman reakcija davė neigiamą rezultatą.
Esant ryškiai teigiamoms reakcijoms, atliekamas kiekybinis reaginų nustatymas, kuriam naudojamas serumas praskiedus nuo 1:10 iki 1:320, o tai leidžia naudoti tokio tipo tyrimus gydymo efektyvumui stebėti. Pavyzdžiui, antikūnų titro sumažėjimas ir vėlesnis jų seronegatyvumas (neigiamų rezultatų gavimas) rodo sėkmingą ligos išgydymą.
Ryžiai. 5. Kraujo tyrimas dėl sifilio – Wasserman reakcija.
Mikroprecipitacijos reakcija (MPR)
Kritulių mikroreakcija naudojama masiniams tam tikrų gyventojų grupių tyrimams, sifilio diagnostikai ir gydymo efektyvumo stebėjimui. Norint atlikti tokio tipo tyrimus, reikalingas nedidelis bandomosios medžiagos kiekis. Kritulių mikroreakcija pagrįsta imunologine antigeno-antikūno reakcija. Jei tiriamojo kraujo serume yra antikūnų, antigeno-antikūno kompleksas nusėda ir susidaro dribsniai. Reakcija atliekama specialios stiklo plokštės šuliniuose. Jis vertinamas pagal nuosėdų intensyvumą ir dribsnių dydį (+) kaip Wassermano reakciją. Jis nenaudojamas tiriant nėščias moteris, donorus ir stebint gydymo efektyvumą. VDRL ir RPR yra mikroreakcijų tipai.
Ryžiai. 6. Nusodinimo reakcijos tipas laše ant stiklo.
Ryžiai. 7. Kraujo tyrimas dėl sifilio – mikroprecipitacijos reakcija.
Ryžiai. 8.Rinkinys greitam plazmos reaginų nustatymui (RPR testas dėl sifilio).
Visi teigiami testai, gauti nespecifinių serologinių reakcijų metu, turi būti patvirtinti specifinėmis reakcijomis – treponeminiais tyrimais.
Atliekant treponeminius tyrimus, naudojami treponeminės kilmės antigenai. Jų neigiama pusė yra tai, kad neįmanoma juos naudoti stebint gydymo efektyvumą, gauti teigiamų rezultatų sergant spirochetoze ir nevenerinėmis treponematozėmis, gauti klaidingai teigiamus rezultatus sergant onkologinėmis ligomis, raupsais ir kai kuriomis endokrininėmis patologijomis. Tokie testai kaip RPGA, ELISA ir RIF išlieka teigiami daugelį metų po sifilio išgydymo, o kai kuriais atvejais ir visą gyvenimą.
RIBT ir RIF yra specifiškiausios iš visų serologinių reakcijų, naudojamų sifiliui diagnozuoti. Jie leidžia atskirti klaidingai teigiamas reakcijas ir nustatyti vėlyvąsias sifilio formas, kurios atsiranda su neigiamomis reakcijomis. RIBT pagalba atpažįstamos klaidingai teigiamos nėščių moterų reakcijos, kai reikia išspręsti vaiko užsikrėtimo problemą.
Treponema pallidum imobilizacijos reakcija (RIBT, RIT)
Reakcijos esmė ta, kad paciento kraujo serume esantys antikūnai imobilizuoja Treponema pallidum. Reakcija laikoma neigiama, kai imobilizuojama iki 20% patogenų, silpnai teigiama - 21 - 50%, teigiama - 50 - 100%. RIBT kartais duoda klaidingai teigiamų rezultatų.Tyrimas yra sudėtingas ir daug darbo reikalaujantis, tačiau jis yra būtinas diferencinei latentinių ligos formų diagnostikai ir klaidingai teigiamiems serologinių reakcijų rezultatams, įskaitant nėščias moteris. RIBT duoda 100% teigiamą antrinio, ankstyvojo ir vėlyvojo sifilio rezultatą, 94 - 100% atvejų - dėl kitų sifilio formų.
Imunofluorescencinė reakcija (RIF)
Reakcijos esmė ta, kad treponema pallidum (antigenai), kartu su antikūnais, paženklintais fluorochromais, fluorescenciniame mikroskope skleidžia geltonai žalią švytėjimą. Rezultatas įvertinamas ženklu (+). Naudojant RIF, aptinkami A klasės imunoglobulinai. Imunofluorescencinė reakcija tampa teigiama anksčiau nei Wasserman reakcija. Jis visada teigiamas sergant antriniu ir latentiniu sifiliu, 95 - 100% atvejų teigiamas sergant tretiniu ir įgimtu sifiliu. Šio tipo tyrimų atlikimo technika yra paprastesnė nei RIBT, tačiau RIF pakeisti RIBT neįmanoma, nes ši reakcija specifiškumu yra prastesnė nei RIBT. RIF-10 (RIF modifikacija) yra jautresnis, RIF-200 ir RIF-abs yra specifiškesni.
Ryžiai. 9. Kraujo tyrimas dėl sifilio – imunofluorescencinė reakcija (RIF).
Treponema pallidum (IAT) imuninės adhezijos reakcija
Reakcijos esmė ta, kad blyški treponema, įjautrinta paciento serumo, esant komplementui, prilimpa prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus. Centrifuguojant susidarę kompleksai nusėda. Šio testo jautrumas ir specifiškumas yra artimi RIF ir RIBT.
Fermentinis imunologinis sifilio tyrimas (ELISA)
Naudojant ELISA, nustatomi M ir G klasės imunoglobulinai. IgM-ELISA metodas gali būti naudojamas kaip atrankos ir patvirtinimo testas.ELISA jautrumas ir specifiškumas yra panašus į RIF. Dėl sifilio ELISA duoda teigiamų rezultatų nuo trečio užsikrėtimo mėnesio ir išlieka teigiamas gana ilgą laiką (kartais visą gyvenimą).
Pasyvi (netiesioginė) hemagliutinacijos reakcija (RPHA)
RPHA pagrįsta raudonųjų kraujo kūnelių, ant kurių adsorbuojami treponema pallidum antigenai, gebėjimu sulipti (hemagliutinacija) esant paciento serumui. RPGA naudojamas diagnozuoti visų formų sifilį, įskaitant latentinį. Naudojant aukštos kokybės antigeną, šio tipo serologinė reakcija specifiškumu ir jautrumu lenkia visus kitus testus.
Ryžiai. 11. RPGA naudojamas visų formų sifiliui diagnozuoti.
Ryžiai. 12. Sifilio tyrimas – pasyvi (netiesioginė) hemagliutinacijos reakcija (schema).
Ryžiai. 13. Apversto skėčio, užimančio visą mėgintuvėlio dugną, atsiradimas rodo teigiamą reakciją. Tuo atveju, kai raudonieji kraujo kūneliai nusėda stulpelyje („mygtukas“) mėgintuvėlio dugno centre, rodoma neigiama reakcija.
Kartu su serologine diagnoze svarbų vaidmenį atlieka Treponema pallidum (mikrobiologinė diagnozė) nustatymo metodas, ypač seronegatyvaus sifilio laikotarpiu, kai kraujyje vis dar nėra antikūnų, tačiau jau yra pirmųjų šviežio pirminio sifilio apraiškų. chancroid).
Tyrimo biologinė medžiaga yra išskyros iš kietų opų (šankrų) paviršiaus, pustulinių sifilių turinys, verkiančios ir erozinės papulės, užkrėstų limfmazgių punkcijos, smegenų skystis ir amniono skystis PGR - kraujas.
Geriausias būdas aptikti sifilio sukėlėjus – ištirti biologinę medžiagą tamsaus lauko mikroskopu. Ši technika leidžia pamatyti blyškią treponemą gyvoje būsenoje, ištirti jos struktūrines ypatybes ir judėjimą bei atskirti patogeninius patogenus nuo saprofitų.
Ryžiai. 15. Sifilio analizė – tamsaus lauko mikroskopija.
Ryžiai. 16. Tiriant sausus tepinėlius, naudojamas Romanovskio-Giemsa dažymas. Blyškios treponemos pasidaro rausvos, visos kitos spirochetų rūšys – violetinės spalvos.
Treponema pallidum aptikimas tamsaus lauko mikroskopu yra absoliutus galutinis sifilio diagnozės kriterijus.
Ryžiai. 17. Bakterijoms identifikuoti naudojama imunofluorescencinė reakcija (RIF) – treponeminis tyrimas. Specifinis antigeno-antikūno kompleksas, derinamas su specifiniu serumu, paženklintu fluorochromu, fluorescencinio mikroskopo šviesoje suteikia bakterijoms žalsvą švytėjimą.
Ryžiai. 18. Sifilio sukėlėjai aiškiai matomi tepinėliuose, paruoštuose Levaditi metodu (impregnavimas sidabru). Blyški treponema yra tamsios spalvos užkrėstų audinių ląstelių geltonos spalvos fone.
Ryžiai. 20. Nuotraukoje pavaizduota Treponema pallidum kolonija. Sunku gauti bakterijų kultūrą. Dirbtinėse maistinėse terpėse jie praktiškai neauga. Terpėse, kurioje yra arklio ir triušio serumo, kolonijos atsiranda 3–9 dienomis.
Šiandien polimerazės grandininės reakcijos metodas yra veiksmingas ir perspektyvus.Sifilio PGR leidžia gauti rezultatus per kelias valandas, o diagnozei surinktoje medžiagoje gali būti bent keli patogenai.
Ryžiai. 21. Sifilio PGR gali aptikti Treponema pallidum DNR arba jos fragmentus.
Šio tyrimo metodo jautrumas priklauso nuo Treponema pallidum buvimo biologinėje medžiagoje ir siekia 98,6 proc. Šio tyrimo specifiškumas labai priklauso nuo teisingo amplifikacijos taikinio pasirinkimo diagnozės metu ir pasiekia 100%.
Tuo pačiu metu dėl nepakankamai ištirtų tiesioginių sifilio ir PGR diagnozavimo metodų jautrumo ir specifiškumo lyginamųjų charakteristikų šis tyrimo metodas Rusijos Federacijoje ligai diagnozuoti dar nepatvirtintas.
PGR dėl sifilio leidžiama atlikti tik kai kuriais atvejais, kaip papildomą įgimto sifilio, neurosifilio diagnozavimo metodą, jei sifilį sunku diagnozuoti serologiniais metodais ŽIV sergantiems pacientams.
Ryžiai. 22. Treponema pallidum DNR aptikimas naudojant PGR rodo arba gyvybingų bakterijų buvimą, arba negyvų bakterijų liekanas, tačiau turinčias atskiras chromosominės DNR dalis, galinčias sudaryti papildomas kopijas.
