בדיקת עגבת היא אחת מבדיקות המעבדה הנפוצות ביותר. בדיקות לעגבת נמצאות בשימוש נרחב במהלך בדיקות מניעתיות. באמצעות מיקרוסקופיה, הגורם הסיבתי של עגבת מזוהה - Treponema pallidum.באמצעות תגובות סרולוגיות, אבחנה של עגבת מאושרת, אבחנה של עגבת סמויה נקבעת, מעקב אחר יעילות הטיפול ונקבעת ריפוי החולים.
האבחנה של עגבת נקבעת על בסיס נתונים קליניים, זיהוי פתוגנים של עגבת בדגימות חומר ואישור האבחנה בשיטות מחקר סרולוגיות. הביטויים של עגבת הם רבים ומגוונים, וזו הסיבה שהמחלה מאובחנת על ידי רופאים בעלי התמחויות שונות. אבחנה מבדלת של עגבת ראשונית מתבצעת עם מספר מחלות.
אורז. 1. בתמונה, הביטוי העיקרי של עגבת הוא צ'נקר.
נוגדנים ל-Treponema pallidum ואבחון סרולוגי
כאשר נדבקים בעגבת, נוצרים נוגדנים בגוף החולה. אבחון סרולוגי מסייע לרופא לחקור את הדינמיקה של יצירת נוגדנים בגופו של חולה עם עגבת בשלבים הראשונים של המחלה, במהלך תקופת הטיפול ולאחר סיומו, כדי לפתור את סוגיית ההישנות של המחלה אצל החולה. או זיהום מחדש (הדבקה מחדש), לאבחון עגבת במצבים רפואיים המוניים.
נוגדנים ל-Treponema pallidum IgM
נוגדני IgM הם הראשונים המיוצרים לאחר זיהום. הם מתחילים להתגלות באמצעות תגובות סרולוגיות מהשבוע השני לאחר ההדבקה. לאחר 6-9 שבועות של מחלה, מספרם הופך למקסימלי. אם החולה אינו מטופל, הנוגדנים נעלמים לאחר שישה חודשים. נוגדני IgM נעלמים לאחר 1 - 2 חודשים. לאחר טיפול בעגבת מוקדמת, לאחר 3 - 6 חודשים. - לאחר טיפול בעגבת מאוחרת. אם גידולם נרשם, זהו סימן להישנות של עגבת או מעיד על זיהום חוזר. מולקולות IgM גדולות ואינן עוברות דרך השליה לעובר.
נוגדנים ל-Treponema pallidum IgG
נוגדני אימונוגלובולינים מסוג IgG מופיעים בסוף החודש הראשון (שבוע 4) מרגע ההדבקה. הטיטר שלהם גבוה מהטיטר IgM. IgG נמשך לאחר טיפול במשך זמן רב למדי.
נוגדנים לא ספציפיים
ישנן תגובות סרולוגיות רבות. זה מוסבר על ידי הריבוי האנטיגני של Treponema pallidum. בסרום הדם של אדם חולה בשלבים שונים של עגבת, בנוסף לאלו ספציפיים, נוצרים נוגדנים מסוימים לא ספציפיים - אגלוטינינים, מקבעים משלימים, אימוביליזינים, נוגדנים הגורמים לקרינה חיסונית, משקעים ועוד. תגובות סרולוגיות לאיתור נוגדנים לא ספציפיים יש סגוליות יחסית, לכן, כדי למנוע טעויות אבחון, עליך להשתמש לא רק באחת, אלא במכלול של תגובות סרולוגיות (SRR).
בדיקות חיוביות כוזבות לעגבת
מאפיין ייחודי של בדיקות שאינן טרפונמאליות הוא קבלת תגובות חיוביות שגויות. נוגדנים-ריאגינים, המיוצרים בדם אנושי נגד אנטיגן הקרדיוליפין, מתועדים לא רק בעגבת, אלא גם במחלות אחרות: קולגנוזיס, הפטיטיס, מחלות כליות, תירוטוקסיקוזיס, סרטן, מחלות זיהומיות (צרעת, שחפת, ברוצלוזיס, מלריה, טיפוס, קדחת ארגמן), במהלך הריון ומחזורי הווסת, בעת נטילת מזון שומני ואלכוהול. צוין כי מספר התגובות החיוביות-שגויות עולה עם הגיל.
האנטיגן המשמש בקבוצת בדיקות זו הוא אנטיגן קרדיוליפין. אנטיגנים ליפידים של פתוגני עגבת הם הרבים ביותר. הם מהווים 1/3 מהמסה היבשה של התא. באמצעות בדיקות שאינן טרפונמאליות, מתגלים נוגדני reagin המיוצרים כנגד אנטיגן הקרדיוליפין. קבוצה זו כוללת את בדיקת קיבוע המשלים (FFR), בדיקת מיקרו-משקעים (MPR), בדיקת פלסמה חוזרת מהירה (RPR) ועוד. באמצעות בדיקות שאינן טרפונמאליות, מתבצעת סקר ראשוני לאיתור עגבת (סקר קבוצות אוכלוסייה) ואפשרות של השגת תוצאות בצורה כמותית מאפשרת להשתמש בבדיקות אלו לניטור יעילות הטיפול. תוצאות חיוביות מבדיקות nontreponemal חייבות להיות מאושרות על ידי בדיקות treponemal. מאפיין ייחודי של בדיקות שאינן טרפונמאליות הוא קבלת תגובות חיוביות שגויות.
2. בדיקות טרפונמל
בדיקות טרפונמל משתמשות באנטיגנים ממקור טרפונמל המבודדים מתרבית של Treponema pallidum. בעזרתם, תוצאות חיוביות של בדיקות לא-treponemal מאושרות. הקבוצה כוללת: RSKtrep - תגובת קיבוע משלים, RIF - תגובת אימונופלואורסצנציה ושינויים שלה, RIT, RIBT - תגובת אימוביליזציה של Treponema pallidum, RPHA - תגובת hemagglutination פסיבית, ELISA - assay immunosorbent linked enzyme.
3. בדיקות לאיתור עגבת באמצעות אנטיגנים רקומביננטיים
אנטיגנים לקבוצת בדיקות זו מתקבלים בהנדסה גנטית ומשמשים בתגובות - RPGA ו-ELISA, בניתוחי אימונובלוטינג (IB) ובניתוח אימונוכרומטוגרפי.
אורז. 3. נעשה שימוש בסט בדיקות סרולוגיות לאבחון עגבת.
כדי לזהות עגבת, נעשה שימוש בבדיקות שאינן טרפונמל או קומפלקס של תגובות סרולוגיות (SSR). אבחון סרולוגי משמש מהשבוע החמישי מרגע ההדבקה או מ 2-3 שבועות לאחר הופעת הצ'אנקר. נוגדנים מתגלים כמעט בכל החולים עם עגבת טרייה ראשונית, משנית וחוזרת. תגובות סרולוגיות חיוביות ב-70-80% מהחולים עם עגבת פעילה שלישונית, ב-50-60% מהמקרים בחולים עם עגבת סמויה שלישונית.
בדיקות סרולוגיות באמצעות בדיקות nontreponemal עשויות לתת תוצאות חיוביות שגויות.
תגובת קיבוע משלים (כרטיס RSK, KSK עם KA, תגובת וסרמן)
תגובת וסרמן (RW, РВ), שהומצאה על ידי א. וסרמן לפני יותר מ-100 שנה, עברה היום שינויים רבים, אולם, כמחווה למסורת, היא שמרה על שמה עד היום. תגובת קיבוע המשלים באמצעות אנטיגן קרדיוליפין נועדה לא רק לאיתור נוגדנים, אלא גם מבוצעת כמותית - עם דילולים שונים בסרום, המאפשרים להשתמש בו לניטור יעילות הטיפול. רגישות וספציפיות נמוכות, השגת תוצאות חיוביות שגויות הן ההיבטים השליליים של מחקר מסוג זה.
המהות של תגובת וסרמן היא כדלקמן: האנטיגנים המשמשים לביים את תגובת וסרמן, במקרה של נוכחות של נוגדנים לגורמים הגורמים לעגבת בדם האדם, נקשרים אליהם באמצעות מחמאה ומשקעים. עוצמת התגובה מסומנת בסימן (+).התגובה יכולה להיות שלילית (-) - ללא משקעים, ספק (משקע קטן או +), חיובית חלשה (++), חיובית (+++) וחיובית מאוד (++++).
תגובת וסרמן המתוקנת, תגובת קולמר, רגישה יותר. בעזרתו מתגלים נוגדנים בסמים שבהם תגובת וסרמן נתנה תוצאה שלילית.
במקרה של תגובות חיוביות חדות, מבוצעת קביעה כמותית של reagins, שעבורה נעשה שימוש בסרום בדילול מ-1:10 עד 1:320, מה שמאפשר שימוש במחקר מסוג זה לניטור יעילות הטיפול. לדוגמה, ירידה בטיטר הנוגדנים והסרונגטיביות שלאחר מכן (השגת תוצאות שליליות) מעידה על ריפוי מוצלח של המחלה.
אורז. 5. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת וסרמן.
תגובה מיקרו-משקעים (MPR)
מיקרו תגובת משקעים משמשת לבדיקות המוניות של קבוצות אוכלוסייה מסוימות, אבחון עגבת ומעקב אחר יעילות הטיפול. כדי לבצע מחקר מסוג זה, נדרשת כמות קטנה של חומר בדיקה. המיקרו-תגובה של משקעים מבוססת על תגובת אנטיגן-נוגדנים אימונולוגית. אם קיימים נוגדנים בסרום הדם של הנבדק, תסביך האנטיגן-נוגדנים משקע ויוצרים פתיתים. התגובה מתבצעת בבארות של צלחת זכוכית מיוחדת. זה מוערך לפי עוצמת המשקע וגודל הפתיתים ב-(+) כתגובת וסרמן. הוא אינו משמש בעת בדיקת נשים בהריון, תורמים וכדי לעקוב אחר יעילות הטיפול. VDRL ו-RPR הם סוגים של מיקרו-תגובות.
אורז. 6. סוג תגובת משקעים בטיפה על זכוכית.
אורז. 7. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת מיקרו-משקעים.
אורז. 8.ערכה לקביעה מהירה של פלזמה reagins (בדיקת RPR לעגבת).
כל הבדיקות החיוביות המתקבלות במהלך תגובות סרולוגיות לא ספציפיות דורשות אישור על ידי תגובות ספציפיות - בדיקות טרפונמל.
בעת ביצוע בדיקות טרפונמל, משתמשים באנטיגנים ממקור טרפונמל. הצד השלילי שלהם הוא חוסר האפשרות להשתמש בהם לניטור יעילות הטיפול, השגת תוצאות חיוביות בספירוכטוזיס ובטרפונמטוזות לא מין, וקבלת תוצאות חיוביות כוזבות במחלות אונקולוגיות, צרעת וחלק מהפתולוגיות האנדוקריניות. בדיקות כגון RPGA, ELISA ו-RIF נשארות חיוביות במשך שנים רבות לאחר ריפוי העגבת, ובמקרים מסוימים לכל החיים.
RIBT ו-RIF הם התגובות הסרולוגיות הספציפיות ביותר המשמשות לאבחון עגבת. הם מאפשרים להבחין בין תגובות חיוביות שגויות ולזהות צורות מאוחרות של עגבת המתרחשות עם תגובות שליליות. בעזרת RIBT מזהים תגובות חיוביות כוזבות בנשים בהריון כאשר יש צורך לפתור את נושא ההדבקה של הילד.
תגובת אימוביליזציה של Treponema pallidum (RIBT, RIT)
מהות התגובה היא שהנוגדנים בסרום הדם של המטופל משתקים את Treponema pallidum. תגובה נחשבת לשלילית כאשר עד 20% מהמחוללים משותק, חיובי חלש - 21 - 50%, חיובי - 50 - 100%. RIBT לפעמים נותן תוצאות חיוביות שגויות.הבדיקה מורכבת ודורשת עבודה, אולם היא הכרחית באבחון מבדל של צורות סמויות של המחלה ותוצאות חיוביות שגויות של תגובות סרולוגיות, כולל בנשים הרות. RIBT נותן תוצאה חיובית של 100% עבור עגבת משנית, מוקדמת ומאוחרת, ב-94 - 100% מהמקרים - עבור צורות אחרות של עגבת.
תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF)
מהות התגובה היא ש-treponema pallidum (אנטיגנים), בשילוב עם נוגדנים המסומנים עם פלואורכרומים, פולטים זוהר צהוב-ירוק במיקרוסקופ פלואורסצנטי. התוצאה מוערכת עם סימן (+). באמצעות RIF, אימונוגלובולינים מסוג A מתגלים התגובה האימונופלואורסצנטית הופכת לחיובית מוקדם יותר מתגובת Wasserman. היא תמיד חיובית בעגבת משנית וסמויה, ב-95 - 100% מהמקרים היא חיובית בעגבת שלישונית ומולדת. הטכניקה לעריכת מחקר מסוג זה פשוטה יותר מזו של RIBT, אך אי אפשר להחליף את RIF ב-RIBT, שכן תגובה זו נחותה מ-RIBT בספציפיות. RIF-10 (שינוי של RIF) רגיש יותר, RIF-200 ו-RIF-abs ספציפיים יותר.
אורז. 9. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת אימונופלואורסצנציה (RIF).
תגובת הידבקות חיסונית של Treponema pallidum (IPAT)
המהות של התגובה היא ש-treponema pallidum, שעבר רגישות בסרום של המטופל, בנוכחות משלים, נצמד לפני השטח של תאי דם אדומים. הקומפלקסים המתקבלים משקעים במהלך הצנטריפוגה. הרגישות והספציפיות של בדיקה זו קרובות ל-RIF ול-RIBT.
בדיקת אנזים אימונו עבור עגבת (ELISA)
באמצעות ELISA נקבעים אימונוגלובולינים מסוג M ו-G. טכניקת IgM - ELISA יכולה לשמש כבדיקת סקר ואישור.הרגישות של ELISA והספציפיות שלה דומות ל-RIF. לגבי עגבת, ELISA נותן תוצאות חיוביות מהחודש השלישי של ההדבקה ונשאר חיובי במשך זמן רב למדי (לפעמים במהלך החיים).
אורז. 10. מנתח חיסון אנזים.
תגובה פסיבית (עקיפה) להמגלוטינציה (RPHA)
RPHA מבוסס על יכולתם של תאי דם אדומים שעליהם נספגים אנטיגנים של treponema pallidum להיצמד זה לזה (המגלוטינציה) בנוכחות הסרום של המטופל. RPGA משמש לאבחון כל צורות העגבת, כולל סמויה. כאשר משתמשים באנטיגן איכותי, תגובה סרולוגית מסוג זה עולה על כל שאר הבדיקות בספציפיות וברגישות.
אורז. 13. הופעת מטריה הפוכה התופסת את כל תחתית המבחנה מעידה על תגובה חיובית. במקרה שבו תאי דם אדומים מתיישבים בעמודה ("כפתור") במרכז החלק התחתון של המבחנה, מופיעה תגובה שלילית.
לצד האבחון הסרולוגי, לשיטת זיהוי Treponema pallidum (אבחון מיקרוביולוגי) יש תפקיד חשוב, במיוחד בתקופת העגבת הסרונגטיבית, כאשר עדיין אין נוגדנים בדם, אך יש כבר ביטויים ראשונים של עגבת ראשונית טריה ( chancroid).
החומר הביולוגי למחקר הוא הפרשות מפני השטח של כיבים קשים (צ'אנקרים), תכולת עגבת פוסטולרית, פפולות בכי ושחיקה, דקירות של בלוטות לימפה נגועות, נוזל מוחי ומי שפיר ל-PCR - דם.
השיטה הטובה ביותר לאיתור פתוגני עגבת היא בדיקת חומר ביולוגי במיקרוסקופ שדה אפל. טכניקה זו מאפשרת לראות את treponema pallidum במצב חי, ללמוד את התכונות המבניות והתנועה שלה, ולהבחין בין פתוגנים פתוגניים לבין ספרופיטים.
אורז. 15. ניתוח לעגבת - מיקרוסקופיה בשדה כהה.
אורז. 16. כאשר לומדים מריחות יבשות, משתמשים בצביעה של רומנובסקי-גימסה. טרפונמות חיוורות הופכות לוורודות, כל סוגי הספירושטים האחרים הופכים לסגולים.
זיהוי של Treponema pallidum על ידי מיקרוסקופיה בשדה כהה הוא קריטריון מוחלט לאבחנה הסופית של עגבת.
אורז. 17. לזיהוי חיידקים משתמשים בתגובה אימונופלואורסצנטית (RIF) - בדיקת טרפונמל. קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי, בשילוב עם סרום ספציפי המסומן בפלואורוכרום, לאור מיקרוסקופ פלואורסצנטי מעניק לחיידק זוהר ירקרק.
אורז. 18. הגורמים הגורמים לעגבת נראים בבירור במריחות שהוכנו בשיטת Levaditi (הספגת כסף). הטרפונמה החיוורת היא בצבע כהה על רקע הצבע הצהוב של תאי הרקמות הנגועות.
אורז. 19. הגורם הסיבתי של עגבת בהגדלה מרובה.
אורז. 20. בתצלום נראה מושבה של Treponema pallidum. קשה להשיג תרבית חיידקים. הם למעשה אינם גדלים על חומרי הזנה מלאכותיים. על מדיה המכילה סרום של סוס וארנב, מושבות מופיעות בימים 3-9.
כיום, טכניקת תגובת שרשרת הפולימראז יעילה ומבטיחה.PCR עבור עגבת מאפשר לך לקבל תוצאות תוך מספר שעות, ולפחות מספר פתוגנים עשויים להיות נוכחים בחומר שנאסף לאבחון.
אורז. 21. PCR עבור עגבת יכול לזהות DNA או שברי שלו מ-Treponema pallidum.
הרגישות של שיטת מחקר זו תלויה בנוכחות של Treponema pallidum בחומר הביולוגי ומגיעה ל-98.6%. הספציפיות של בדיקה זו תלויה במידה רבה בבחירה הנכונה של יעד להגברה במהלך האבחון ומגיעה ל-100%.
יחד עם זאת, בשל המאפיינים ההשוואתיים שלא נחקרו מספיק של הרגישות והספציפיות של שיטות ישירות לאבחון עגבת ו-PCR, שיטת בדיקה זו בפדרציה הרוסית לאבחון המחלה עדיין לא אושרה.
PCR עבור עגבת מותר להתבצע רק במקרים מסוימים, כשיטה נוספת לאבחון עגבת מולדת, נוירוסיפיליס, אם קשה לאבחן עגבת בשיטות סרולוגיות בחולי HIV.
אורז. 22. זיהוי של DNA של Treponema pallidum באמצעות PCR מצביע על נוכחות של חיידקים ברי קיימא או על שרידי חיידקים מתים, אך מכילים קטעים בודדים של DNA כרומוזומלי המסוגלים ליצור עותקים נוספים.
